生化实验分光层析技术 ppt课件
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• 如果老师最后没有总结一节课的重点的难点，你 是否会认为老师的教学方法需要改进？
• 你所经历的课堂，是讲座式还是讨论式？ • 教师的教鞭
• “不怕太阳晒，也不怕那风雨狂，只怕先生骂我 笨，没有学问无颜见爹娘 ……”
• “太阳当空照，花儿对我笑，小鸟说早早早……”
The basic experimental technology：
ppt课件
一) 光的概述（lightwave）
1. 光的性质
任何一种发光的物体，都称为光源。 光源电偶极子的振荡，在其附近空间产生交变的电磁场， 即辐射出光波。
光具有波粒二象性： 粒子性（微观）（光量子） 波动性（宏观）
ppt课件
波长：一个“完整的波” 的距离。 频率：波源的振动周期（每秒钟振动次数）。
一、分光光度技术 二、层析技术 三、电泳技术 四、离心分析技术 五、PCR技术 六、蛋白分离和纯化技术
ppt课件
一、分光光度技术
(Spectrophotometry)
[spektrəʊfəʊ'tɒmitri]
ppt课件
Contents：
一) 光的概述 二) 分光光度法的概念及原理 三) 分光光度计的构造 四) 722型分光光度计的使用方法 五) 测定物含量的计算
ppt课件
互补光（c[o,kmɒpmlepmli'menetnatrriy] colors）：把适当颜色的两种光 按一定强度比例混合能成为白光，这两种颜色的光称为 互补光 。
ppt课件
2. 介质对光波的吸收
光在介质内传播时，介质中的束缚电子在光波电场作用下做 受迫振动，光波要消耗能量激发电子的振动，导致介质中的分 子（或离子）由基态跃迁到高能级的激发态。 光的吸收：是指原子在光照下，会吸收光子的能量由低能 态跃迁到高能态的现象。
可 见 光 400~750nm
紫外光谱法 可见光度法
近红外光 0.75~2.5μm 中红外光 2.5~5.0μm
分子振动
近红外光度法 中红外光度法
远红外光 5.0~1000μm 分子转动和低位振动 远红外光度法
微
波 0.1~ 100cm 分子转动
微波光谱法
无线电波 1~1000m
自旋p方 pt课向 件
绿、紫； )
ppt课件
溶液的颜色与吸收光颜色的关系
ppt课件
物质吸收光能的多少与什么有关系？
用眼睛观察、比较溶液颜色深度以大致估计物质含量的 方法称为目视比色法。
利用物质能吸收光能的原理以精确测定物质含量的方法
ppt课件
——分光光度法
二) 分光光度法的概念及原理 1. 分光光度法的概念
生物化学与分子生物学实验技术
Experimental technology of Biochemistry and molecular biology
ppt课件
成绩分布：
选择题（15分）
理论考试（60分） 判断题（10分）
填空题（15分） 问答题（20分）
实验成绩（40分）
ppt课件
精品资料
• 你怎么称呼老师？
如果各种颜色的光透过程度相同/不吸收可见光，这种物 质就是无色透明的。
但所含物质可以吸收特定波长的紫外线或红外线（如蛋白质溶液）
如果只让一部分波长的光透过，其他波长的光被吸收，则 溶液就呈现出透过光的颜色，也就是溶液呈现Байду номын сангаас是与它吸收的 光成互补色的颜色。
ppt课件
白光
(红、青；
橙、青蓝； 黄、蓝；
可见光：电磁波谱中人眼可以感知的部分，波长在400到 760纳米之间 溶，液往的颜往色是与吸具收有光颜颜色色的关的系光。
ppt课件
溶液的颜色与吸收光颜色的关系
实验证明：白光(日光、白炽电灯光、日光灯光等)就 是由以上不同颜色的光按一定的强度比例混合而成的。
白光叫做复合光； 只具有一种颜色的光/同一波长的光叫做单色光。 为什么以上多种有颜色的单色光混合在一起即变为白光？
分子振动
近红外光度法 中红外光度法
远红外光 5.0~1000μm 分子转动和低位振动 远红外光度法
微
波 0.1~ 100cm 分子转动
微波光谱法
无线电波 1~1000m
自旋p方 pt课向 件
核磁共振光谱法
另根据电磁波的波长不同又分为三个波段： 紫外光：10-400nm 可见光：400～760nm 红外光：760-5000000nm
只要是介质，就会吸收各种光？
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介质吸收光的条件： 入射光的能量 = 介质中物质的基态和激发态能量差
而物质的基态和激发态是由物质的原子构成和原子间相 互作用决定的，不同物质由于其分子结构不同，导致物质能 态的不同，对光的选择性吸收也就不一样。 物质对光具有选择吸收性。
ppt课件
对固体物质来说，当白光照射到物质上时，物质对于不 同波长的光线吸收、透过、反射、折射的程度不同而使物 质呈现出不同的颜色。
X 射线
波长范围 10-5nm 10-3nm
0.1~10nm
跃迁类型 核跃迁
K 和 L 层电子
分析方法
Y 射线光谱法 X 射线光谱法
远紫外线 10~200nm 中层电子
真空紫外光谱法
近紫外线 200~400nm 价电子
可 见 光 400~750nm
紫外光谱法 可见光度法
近红外光 0.75~2.5μm 中红外光 2.5~5.0μm
核磁共振光谱法
不同波长 (或不同频率)的电磁波在相同介质中 的传播速度都相同。
波速=波长×频率 电磁波的频率愈高，波长越短。
一定波长的光波具有一定的能量： 频率越高（波长越短），光量子的能量越高 频率越低（波长越长），光量子的能量越低；
ppt课件
电磁波谱范围表： “伽玛手术刀”
光谱名称 宇宙线 Y 射线
光是电磁波，通常用波长、频率来描述不同的光波。
ppt课件
电磁波谱范围表：
光谱名称 宇宙线 Y 射线
X 射线
波长范围 10-5nm 10-3nm
0.1~10nm
跃迁类型 核跃迁
K 和 L 层电子
分析方法
Y 射线光谱法 X 射线光谱法
远紫外线 10~200nm 中层电子
真空紫外光谱法
近紫外线 200~400nm 价电子
如果物质对各种波长的光完全吸收，则呈现黑色； 如果完全反射，则呈现白色； 如果对各种波长的光吸收程度差不多，则呈现灰色； 如果物质选择性地吸收某些波长的光，那么，这种物质 的颜色就由它所反射或透过光的颜色来决定。
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对溶液来说，溶液呈现不同的颜色，是由于溶液中的质 点(分子或离子)选择性的吸收某种颜色的光所引起的。
• 你所经历的课堂，是讲座式还是讨论式？ • 教师的教鞭
• “不怕太阳晒，也不怕那风雨狂，只怕先生骂我 笨，没有学问无颜见爹娘 ……”
• “太阳当空照，花儿对我笑，小鸟说早早早……”
The basic experimental technology：
ppt课件
一) 光的概述（lightwave）
1. 光的性质
任何一种发光的物体，都称为光源。 光源电偶极子的振荡，在其附近空间产生交变的电磁场， 即辐射出光波。
光具有波粒二象性： 粒子性（微观）（光量子） 波动性（宏观）
ppt课件
波长：一个“完整的波” 的距离。 频率：波源的振动周期（每秒钟振动次数）。
一、分光光度技术 二、层析技术 三、电泳技术 四、离心分析技术 五、PCR技术 六、蛋白分离和纯化技术
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一、分光光度技术
(Spectrophotometry)
[spektrəʊfəʊ'tɒmitri]
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Contents：
一) 光的概述 二) 分光光度法的概念及原理 三) 分光光度计的构造 四) 722型分光光度计的使用方法 五) 测定物含量的计算
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互补光（c[o,kmɒpmlepmli'menetnatrriy] colors）：把适当颜色的两种光 按一定强度比例混合能成为白光，这两种颜色的光称为 互补光 。
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2. 介质对光波的吸收
光在介质内传播时，介质中的束缚电子在光波电场作用下做 受迫振动，光波要消耗能量激发电子的振动，导致介质中的分 子（或离子）由基态跃迁到高能级的激发态。 光的吸收：是指原子在光照下，会吸收光子的能量由低能 态跃迁到高能态的现象。
可 见 光 400~750nm
紫外光谱法 可见光度法
近红外光 0.75~2.5μm 中红外光 2.5~5.0μm
分子振动
近红外光度法 中红外光度法
远红外光 5.0~1000μm 分子转动和低位振动 远红外光度法
微
波 0.1~ 100cm 分子转动
微波光谱法
无线电波 1~1000m
自旋p方 pt课向 件
绿、紫； )
ppt课件
溶液的颜色与吸收光颜色的关系
ppt课件
物质吸收光能的多少与什么有关系？
用眼睛观察、比较溶液颜色深度以大致估计物质含量的 方法称为目视比色法。
利用物质能吸收光能的原理以精确测定物质含量的方法
ppt课件
——分光光度法
二) 分光光度法的概念及原理 1. 分光光度法的概念
生物化学与分子生物学实验技术
Experimental technology of Biochemistry and molecular biology
ppt课件
成绩分布：
选择题（15分）
理论考试（60分） 判断题（10分）
填空题（15分） 问答题（20分）
实验成绩（40分）
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精品资料
• 你怎么称呼老师？
如果各种颜色的光透过程度相同/不吸收可见光，这种物 质就是无色透明的。
但所含物质可以吸收特定波长的紫外线或红外线（如蛋白质溶液）
如果只让一部分波长的光透过，其他波长的光被吸收，则 溶液就呈现出透过光的颜色，也就是溶液呈现Байду номын сангаас是与它吸收的 光成互补色的颜色。
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白光
(红、青；
橙、青蓝； 黄、蓝；
可见光：电磁波谱中人眼可以感知的部分，波长在400到 760纳米之间 溶，液往的颜往色是与吸具收有光颜颜色色的关的系光。
ppt课件
溶液的颜色与吸收光颜色的关系
实验证明：白光(日光、白炽电灯光、日光灯光等)就 是由以上不同颜色的光按一定的强度比例混合而成的。
白光叫做复合光； 只具有一种颜色的光/同一波长的光叫做单色光。 为什么以上多种有颜色的单色光混合在一起即变为白光？
分子振动
近红外光度法 中红外光度法
远红外光 5.0~1000μm 分子转动和低位振动 远红外光度法
微
波 0.1~ 100cm 分子转动
微波光谱法
无线电波 1~1000m
自旋p方 pt课向 件
核磁共振光谱法
另根据电磁波的波长不同又分为三个波段： 紫外光：10-400nm 可见光：400～760nm 红外光：760-5000000nm
只要是介质，就会吸收各种光？
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介质吸收光的条件： 入射光的能量 = 介质中物质的基态和激发态能量差
而物质的基态和激发态是由物质的原子构成和原子间相 互作用决定的，不同物质由于其分子结构不同，导致物质能 态的不同，对光的选择性吸收也就不一样。 物质对光具有选择吸收性。
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对固体物质来说，当白光照射到物质上时，物质对于不 同波长的光线吸收、透过、反射、折射的程度不同而使物 质呈现出不同的颜色。
X 射线
波长范围 10-5nm 10-3nm
0.1~10nm
跃迁类型 核跃迁
K 和 L 层电子
分析方法
Y 射线光谱法 X 射线光谱法
远紫外线 10~200nm 中层电子
真空紫外光谱法
近紫外线 200~400nm 价电子
可 见 光 400~750nm
紫外光谱法 可见光度法
近红外光 0.75~2.5μm 中红外光 2.5~5.0μm
核磁共振光谱法
不同波长 (或不同频率)的电磁波在相同介质中 的传播速度都相同。
波速=波长×频率 电磁波的频率愈高，波长越短。
一定波长的光波具有一定的能量： 频率越高（波长越短），光量子的能量越高 频率越低（波长越长），光量子的能量越低；
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电磁波谱范围表： “伽玛手术刀”
光谱名称 宇宙线 Y 射线
光是电磁波，通常用波长、频率来描述不同的光波。
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电磁波谱范围表：
光谱名称 宇宙线 Y 射线
X 射线
波长范围 10-5nm 10-3nm
0.1~10nm
跃迁类型 核跃迁
K 和 L 层电子
分析方法
Y 射线光谱法 X 射线光谱法
远紫外线 10~200nm 中层电子
真空紫外光谱法
近紫外线 200~400nm 价电子
如果物质对各种波长的光完全吸收，则呈现黑色； 如果完全反射，则呈现白色； 如果对各种波长的光吸收程度差不多，则呈现灰色； 如果物质选择性地吸收某些波长的光，那么，这种物质 的颜色就由它所反射或透过光的颜色来决定。
ppt课件
对溶液来说，溶液呈现不同的颜色，是由于溶液中的质 点(分子或离子)选择性的吸收某种颜色的光所引起的。