重金属检查法标准操作规程

1.目的：

规范重金属测定检验操作，保证检验的质量。

2.范围：

适于本公司原辅料、成品的重金属测定检验。

3.责任：

质量管理科、中心化验室、检验员。

4.检验依据：

《中国药典》2015年版四部重金属检查方法。

5.内容：

5.1 原理

◆《中国药典》（2015年版）中对于药物所含的重金属的定义是指在实验条件下，能与硫代乙酰胺或硫化钠作用显色的金属杂质。所谓“在实验条件下”是因供试品液的酸度对金属离子与硫化氢的呈色有显著的影响。

◆《中国药典》（2015年版）规定25ml供试液中含醋酸盐缓冲液2ml，再加硫代乙酰胺试液2ml，其PH值应为3.5；在此弱酸性条件下能与硫代乙酰胺呈色的金属离子有银、铅、汞、铜、镉、铋、砷、锑、锡、锌、钴、镍等均能生面不溶性硫化物；在碱性溶液中，如铋、镉、铜、钴、铁、汞、铅、锌等金属离子均能生面不溶性硫化物。由于在药品生产中遇到铅的机会较多，而且铅易积蓄中毒，故检查以铅为代表，反应式如下：

Pb2＋+S2－ PbS 黑色

5.2 仪器与用具

◆纳氏比色管应注意选择各管之间的平行性，玻璃色泽一致，内径、刻度标线高度一致。比色管洗涤时避免划伤内壁。

◆过滤器见中国药典2010年版二部附录重金属检查法第四法附图，由且有纹丝扣并能密封的上、下二部分以及垫圈、滤膜和辅助滤板组成。

●过滤器上盖部分A的入口处应能与50ml注射器紧密联接，过滤器下部F 的出口处能套上一合适橡皮管。A与F能通过螺纹密封。

●垫圈应内径光滑，大小相同，以使斑点边缘圆整、清楚、大小一致。在滤器上加上橡皮垫圈，既可使滤膜与滤板紧密结合，又可避免在旋紧滤器接头时扭曲或损坏滤膜。

●滤膜的直径为10mm，孔径为3.0μm，使用前在水中浸泡24小时以上，可使色斑均匀。

●50ml注射器，应能与滤器上盖入口处紧密联接。

5.3 试药和试液

◆标准铅溶液精密取在105℃干燥至恒重的硝酸铅0.1598g，置1000ml量瓶中，加硝酸5ml与水50ml溶解后，用水稀释至刻度，摇匀，作为贮备液。临用前，精密量取贮备液10ml，置100ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，即得（每1ml相当于10μg的Pb）

◆硫代乙酰胺试液、硫化钠试液、醋酸盐缓冲液（pH3.5）与抗坏血酸等均按药典规定。

◆稀焦糖溶液取蔗糖或葡萄糖约5g，置瓷坩埚中，在玻璃棒不断搅拌下，加热至呈棕色糊状，放冷，用水溶解成约25ml，滤过，贮于滴瓶中备用。临用时，根据供试液色泽深浅，取适当量调节使用。

5.4 操作方法

◆第一法

●取25ml纳氏比色管两支，编号为甲、乙。

●甲管中加标准铅溶液一定量与醋酸盐缓冲液（pH3.5）2ml，加水或该药品正文项下规定的溶剂稀释成25ml。

●乙管中加入药品项下规定的方法制成的供试液25ml。

●如供试液带颜色，可在甲管中滴加少量稀焦糖溶液或其它无干扰的有色溶液，使其色泽与乙管一致。

●在甲、乙两管中分别加硫代乙酰胺试液2ml，摇匀，放置2分钟，同置白色衬板上，自上向下透视，乙管中显出的颜色与甲管比较，不得更深。

●如在甲管中滴加稀焦糖溶液仍不能使颜色一致时，可取该药品项下规定的2倍量的供试品和试液，加水或该药品项下规定的溶剂稀释成30ml；甲管中加入硫代乙酰胺试液2ml，摇匀，放置2分钟，经滤膜（孔径3μm）滤过，然后甲管中加入标准铅溶液一定量，加水或该药品项下规定的溶剂使成25ml，再在乙管中加硫代乙酰胺试液2ml，甲管中加水2ml，照上述方法检查，即得；

●供试品如含铁盐影响重金属检查时，可取该药品项下方法制成的供试液，加抗坏血酸0.5-1.0g，并在对照液中加入相同量的抗坏血酸，再照上方法比较，即得；

●配制供试品溶液时，如使用的盐酸超过1.0ml（或与盐酸1.0ml相当的稀盐酸），氨试液超过2ml，或加入其他试剂进行处理者，除另有规定外，对照液中应取同样同量的试剂置瓷皿中蒸干后，加醋酸盐缓冲液（pH3.5）2ml与水15ml溶解后，移置甲管中，加标准铅溶液一定量，再加水稀释成25ml。

◆第二法

●除另有规定外取在500－600℃灼烧的炽灼残渣项下遗留的残渣，加硝酸

0.5ml蒸干，至氧化氮蒸气除尽后，放冷，加盐酸2ml，置水浴上蒸干后加水15ml 滴加氨试液至对酚酞指示液显微粉红色，再加醋酸盐缓冲液（pH3.5）2ml，微热溶解后，移至纳氏比色管中，加水稀释成25ml，作为乙管。

●另取硫酸0.5ml，低温加热至硫酸蒸汽除尽后，加硝酸0.5ml，蒸干，至氧化氮蒸汽除尽后，放冷，加盐酸2ml，置水浴上蒸干后加水15ml，滴加氨试液至对酚酞指示液显微粉红色，再加醋酸盐缓冲液（pH3.5）2ml，微热溶解后，移至纳氏比色管中，精密加入标准铅溶液一定量，加水稀释至25ml，作为甲管。

●再在甲、乙两管中分别加硫代乙酰胺试液各2ml，摇匀，放置2分钟，同置白纸上，自上向下透视，乙管中显出的颜色与甲管比较，不得更深。

◆第三法

●取25ml纳氏比色管两支，编号为甲、乙。

●除另有规定外，取供试品适量，加氢氧化钠试液5ml与水20ml溶解后，置乙比色管中。

●取一定量的标准铅溶液，与（4.3.2）同样处理，置甲管中。

●于甲、乙两管中各加硫化钠试液5滴，摇匀。

●甲、乙管同置白色衬板上，自上向下透视，乙管中所显的颜色与甲管比较，不得更深。

◆第四法

●标准铅斑的制备精密量取标准铅一定量，置小烧怀中，加水或该药品项下的溶剂稀释成10ml，加入醋酸盐缓冲液（pH3.5）2ml与硫代乙酰胺试液1.0ml，摇匀，放置10分钟注射器转移至过滤器中进行压滤（滤速约为每分钟1ml），滤毕，取下滤膜，放在滤纸上干燥，即得。

●检查法照该药品项下规定制成的供试液10ml，照例（4.4.1）标准铅斑的制备，自“加入醋酸盐缓冲液（pH3.5）2ml”起，依法操作，将生成的色斑与标准铅斑比较，不得更深。

●若供试溶液有颜色或浑浊，应对换辅助滤板与滤膜的位置，进行预滤，如滤膜有污染，应换滤膜再滤，直至滤膜不再染色；反转辅助滤膜的位置，然后取滤液10ml，照 4.1）标准铅斑制备，“加入醋酸盐缓冲液（pH3.5）2ml”起，依法操作，所得供试液的铅斑与标准铅斑比较，不得更深。

5.5 注意事项

◆在弱酸条件下测定时，应严格控制溶液的酸碱度，因为pH值3.0-3.5，硫化物沉淀比较完全，酸度太大或太小都使颜色显色浅，从而结果不正确。

◆本法以10μg -20μgPb／35ml所产生的浑浊度为最佳目视比色范围。

◆在酸性溶液中检查重金属，以硫代乙酰胺试液作为显色剂，如用硫化钠试液，容易分解析出硫，引起浑浊而影响比色。在碱性溶液中，则用硫化钠试剂作为显色剂。

◆检查新产品重金属时，除有标准管和供试管外，宜应配有一个监测管（加适量的标准溶液及供试品）。三管依法同样操作，供试管显色不得深于标准管，否则供试品经有机破坏后再依法检查。