医疗器械微生物检验教学内容

学特性。
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大肠 菌群
胆盐乳糖发酵培养基、曙红亚甲蓝琼脂培养基或麦康 乳糖胆盐发酵管、伊红美蓝琼脂、乳糖发酵培
凯琼脂培养基 、乳糖发酵培养基
养基
沙门菌
营养肉汤 、四硫酸钠亮绿培养基 、胆盐硫乳琼脂（或 / 沙门、志贺菌属琼脂）培养基和麦康凯琼脂（或曙红 亚蓝琼脂）培养基 、三糖铁琼脂培养基
铜绿假单 胆盐乳糖 、溴化十六烷基三甲铵琼脂培养基 、氧化酶 SCDLP培养基、溴化十六烷基三甲铵琼脂培养
分类：原核类：二菌，四体（细菌、放线菌、螺旋体、 支原体、立克次氏体、衣原体） 真核类：真菌，原生动物，显微藻类 非细胞类：病毒，亚病毒
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概述
医疗用品的分类 按医疗用品与人体接触的性质以及对人体使用安全
性要求分三类： a)Ⅰ 类医疗用品：接触人体完整皮肤的医疗用品 b) Ⅱ类医疗用品：接触人体未破损粘膜的医疗用品 c) Ⅲ类医疗用品：进入人体无菌组织、器官和血液
干热：160 ℃~ 170 ℃ ，2h 适于耐高温的玻璃、陶瓷或金属器皿的灭 菌。
灭菌程序需要经过验证。
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计数培养基适用性检查
细菌、霉菌及酵母菌计数用培养基应进行 培养基的适用性检查，成品培养基、由脱 水培养基或按处方配制的培养基均应检查。
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计数培养基适用性检查
菌种
• 大肠埃希菌
［CMCC（B）44 102］
庖肉培养基、含庆大霉素的哥伦比亚琼脂培养基 、过 / 氧化氢酶试验
溶血性链 / 球菌
葡萄糖肉汤、血琼脂培养基、链球菌试验、杆 菌肽敏感试验
白色念珠 沙氏葡萄糖液体培养基、沙氏葡萄糖琼脂培养基、念 /
菌
珠菌显色培养基、1%聚山黎脂80-玉米琼脂培养基、
芽管试验
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实验条件
无菌操作技术 实验环境 实验器材
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实验环境保证
环境清洁，表面消毒（ 75%(V/V)乙醇、新 洁尔灭(1:1000)溶液或其他适宜消毒溶液）
空气过滤系统，紫外灯或臭氧空气消毒仪
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实验试液
稀释剂 1.0.9%氯化钠溶液 2.pH6.8无菌磷酸盐缓冲液、pH7.6无菌磷酸盐缓冲液 3.pH7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液：调解pH至近中性，其中蛋 白胨对细菌细胞有保护作用有利于菌落数及控制菌测定。
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无菌操作技术
微生物学基础 微生Leabharlann Baidu实践基础 无菌操作意识
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实验环境
洁净度10000级下的局部洁净度100级的单向流空 气区域或隔离系统；
定期按GB/T16292-16294：2010《医药工业洁净 室（区）悬浮粒子、浮游菌和沉降菌的测试方法》 的现行国家标准进行洁净度验证；
实验中监控：实验时将制备好的营养琼脂平板打 开放于实验台上，至实验结束收起，30 ℃ ~35℃
培养48h，菌落平均数应小于1cfu/φ90mm。
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实验器具
仪器 超净工作台、光学显微镜、恒温培养箱、压力蒸 汽灭菌器、薄膜过滤装置、比浊仪等。
用具 试管、注射器、三角瓶、刻度吸管、移液器、精 密PH试纸、滤膜、滤杯、剪刀、镊子、无菌服、 牛皮纸等。
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实验准备
实验环境保证 实验试液 培养基 灭菌方法
胞菌 试验 、绿脓菌素试验、
基 、氧化酶试验 、绿脓菌素试验、硝酸盐还原
产气试验、明胶液化试验42℃生长试验
金黄色 亚碲酸钠（钾）肉汤（或营养肉汤）培养基 、卵黄氯 葡萄球菌 化钠琼脂培养基或甘露醇氯化钠琼脂培养基 、血浆凝
固酶试验
SCDLP培养基、血琼脂培养基、甘露醇发酵试 验、血浆凝固酶试验
梭菌
表面活性剂、中和剂或灭活剂 鉴定用试剂
1.靛基质试液 2.1%二盐酸二甲基对苯二胺试液（氧化酶试液） 3.三氯甲烷 4.1mol/l盐酸试液
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培养基
标准菌株处理及增菌用培养基 选择性培养基 鉴别培养基
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培养基
培养基的酸碱度应符合细菌生长要求。应 按各种培养基要求准确测定调节pH值。多 数细菌生长的适宜pH值为7.2～7.6。酵母 菌霉菌（6.0～6.5）。调节可用1N HCl或 NaOH。
培养基的灭菌时间和温度，应按照各种培 养基的规定进行，以保证灭菌效果及不损 失培养基的必需营养成分。
制成的培养基应透明，以便观察细菌生长 性状以及其他代谢活动所产生的变化。
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灭菌方式
湿热：115 ℃ ~121 ℃，15min~30min 物品切勿立即取出置冷处，以免急速冷却， 使灭菌物品内蒸气冷凝造成负压，以致染 菌。
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项目 《药典》2010
GB15979-2002
细菌 定量：营养琼脂培养基 2个平皿
定量：营养琼脂培养基 5个平皿
真菌
定量：玫瑰红钠琼脂培养基 至少2个平皿 72h 酵母浸出粉胨葡萄糖琼脂培养基
定量：沙氏琼脂培养基 5个平皿 7天 定性：沙氏液体培养基 7天
大肠 胆盐乳糖培养基 、MUG培养基
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埃希菌 曙红亚甲蓝琼脂培养基或麦康凯琼脂培养基
• 金黄色葡萄球菌 ［CMCC（B） 26 003］
• 枯草芽孢杆菌 ［CMCC（B） 63 501］
• 白色念珠菌
[CMCC(F) 98 001]
• 黑曲霉
[CMCC(F) 98 003]
验证试验所用的菌株传代次数不得超过5代（从菌 种保存中心获得的冷冻干燥菌种为第0代），并采
用适宜的菌种保藏技术，以保证试验菌株的生物
医疗器械微生物限度检验
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概述
微生物限度检查法系检查非规定灭菌制剂 及其原料、辅料受微生物污染程度的方法。
微生物限度检查
细菌、真菌菌落数 控制菌
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概述
微生物：形体微小，结构简单，通常要用光学显 微镜和电子显微镜才能看清楚的生物
特点： 1、个体微小，一般<0.1mm 2、构造简单，有单细胞的，简单多细胞 的，非细胞的 3、进化地位低
以及接触破损皮肤和粘膜的医疗 用品
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常用检测标准
《中华人民共和国药典》 2010年版二部附录XI J “微生物限度检查法”
GB 15979-2002 《一次性卫生用品卫生标准》附 录B
ISO11737-1:2006 Sterilization of medical devices– Microbiological methods—Part1: Determination of a population of microorganisms on products