生物化学实验图文新版

• 杜氏反应(按下表加入试剂)
管号 1 2 3
1%葡萄糖
1D
1%半乳糖 1%阿拉伯糖
杜氏 试剂
1ml
现象（沸水浴加 热）并解释
2D 3D
1ml 1ml
注意：观察颜色变化及变化时间。
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思考题


莫氏反应中莫氏试剂为什么要直接加入溶 液中，不能滴在试管壁上? 加浓硫酸时，试管倾斜，硫酸缓缓加入， 为什么不能振动溶液？
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显色：

喷瓶将茚三酮溶液均匀的喷在滤纸上。在约105℃的 条件下烘烤至各层析斑点显色为止。
记录：
• 将滤纸适当缩小后，将结果画于报告上。
计算Rf值：
• 在计算Rf 值时，用下标表示氨基酸的名称，最好 用每种氨基酸的第一个字标记。例如甘氨酸得Rf 值用Rf甘= 表示。
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结论： 提示通过主要比较Rf值的差异，讨论在该 条件下各种氨基酸分离度的大小。 思考题与习题 有哪些因素影响氨基酸的Rf值？
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点样:
用毛细管分别吸取各种样液，分别在各原点点上 一种氨基酸。注意每一管要分次点完。样点直径 小于0.3cm。
展层：
在层析缸上口处中央，平行的贴上透明胶纸，胶 纸要绷紧。在点了样品的滤纸上端中点处垂直贴 上透明胶，将滤纸上的透明胶贴在缸口的透明胶 上。 注意：滤纸点样端朝下，刚好接触缸底，垂直悬 于缸中。当溶剂前沿展到距滤纸上端约1.0cm时 取出滤纸，用吹风机吹干。
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试剂与器材：
氨基酸液（5种）、正丁醇、冰醋酸、水、茚三酮、 层析滤纸、层析缸、吹风机、喷瓶、铅笔、直尺、 分液漏斗
•
各 式 各 样 的 喷 瓶
层析缸
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实验步骤
实验准备 点样 展层 显色 记录 计算Rf 值 结论
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实验准备


层析液配制: 正丁醇:冰醋酸:水= 5:3:2 (体积 比)置分液漏斗中静置分层，取上清液约 60ml 倒于层析缸中静置到液面不动为止。 滤纸准备：取层析滤纸，裁成10×15cm的 长方形，在距纸一端1.5cm处用铅笔画一直 线。在线的两端距边沿1cm处各划一点。在 这两点之间均匀的画上四点。在这六点处 标上序号1、2、3、4、5、6。
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实验步骤： • 莫氏反应（按下表加试剂）
管号
1 1%葡萄糖 /ml 1 1%蔗糖 /ml 1%淀粉 /ml 纤维素 莫氏试剂 2D 浓硫酸 /ml 2 现象
2
3 4
1
1 少许
2D
2D 2D
2
2 2
注意: (1) 莫氏试剂直接加入溶液中，不能滴在试管壁上！
(2) 加浓硫酸时，试管倾斜，硫酸缓缓加入，不要振动溶液！
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实验一
实验安排 实验原理
糖的颜色反应
实验试剂
实验步骤
思考题
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实验安排： 2课时，单人单组 实验原理：



莫氏反应：糖经无机酸脱水产生糠醛或糠醛衍生 物，后者在浓无机酸作用下，能与1-萘酚生成紫 色的缩合物，可用于鉴定糖的存在。 塞氏反应：酮糖在浓酸的作用下，脱水生成5-羟 基糠醛，后者与间苯二酚作用，呈红色，可用于 鉴定酮糖的存在。 杜氏反应：戊糖在浓酸溶液中脱水生成糠醛，后 者与间苯三酚作用生成桃红色物质，可用于鉴定 戊糖的存在。
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实验室规则（三）
５、注意实验室卫生、整洁。废弃液体 应倒入水槽，放水冲走，实验用过的和棉 花、废纸、沉淀废渣及其他废弃物品等均 应放入指定容器，源自文库得随意乱扔或丢进水 槽。实验结束后应将实验台整理好。并清 扫、整理实验室。关好水、电、门、窗， 经老师检查同意后，方可离开实验室。
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实
•糖的颜色反应
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实验二 氨基酸的纸层析
重点与难点：氨基酸纸层析的基本原理的 理解是本实验的难点。重点是掌握氨基酸 纸层析的操作方法和运用。 实验安排：4课时，每人独立实验，4人一 个层析缸。
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实验原理
纸作支持物，特点是-OH多，亲水性强。 溶剂系统分成两相：固定相（水）特点是易与OH结合移动慢。移动相（水饱和的有机溶剂）特 点是移动速度快。 不同的氨基酸在不同的相中溶解度不同，不同的 氨基酸在不同的相中移动速度不同，不同的氨基 酸在相同的相中移动速度也不同。 基于以上三点原因，经过层析后，不同的氨基酸 移动的距离不同，从而得到分离。分离度用Rf值 表示如下： Rf=原点到层析点中心的距离/ 原点到溶剂前沿 的距离
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实验试剂：
Molish（莫氏）试剂：取5g α-萘酚用95%乙醇 溶解至100mL，临用前配制，棕色瓶保存； Sediwanoff（塞氏）试剂：0.5g 间苯二酚溶于1 升盐酸（H2O∶HCl=2∶1）(V/V)中，临用前 配制； 杜氏试剂：称取2g间苯三酚，溶于250mL95% 乙醇中。临用时取此液3mL，缓缓加入15mL浓 盐酸及9mL蒸馏水，临用时配制。
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• 塞氏反应(按下表加试剂)
管号 1%果糖 1%蔗糖 1%葡萄糖 1 2 3 0.5ml 0.5ml 0.5ml
塞氏 试剂
2.5ml 2.5ml 2.5ml
现象(沸水浴 加热)并解释
注意：加热时间要长，观察颜色变化及变化的顺序。颜色 变化顺序用1、2、3标记，深浅用+、++、+++等表示。
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验
目
录
•氨基酸的纸层析 •血清蛋白的醋酸薄膜电泳 •脂肪酸酸价和碘价的测定 •DNA的提取与定性实验 •过氧化氢酶和过氧化物酶的作用
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实验参考书


生物化学实验，陶均辉等编，科学出版社，第三版； 基础生物化学实验，王秀奇等编，高等教育出版社， 第二版； 动物生物化学实验指导，周顺伍主编，中国农业出版 社，第二版。
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实验室规则（二）
３、取用试剂时，应仔细辨明标签，以免 取错。取完试剂后，应及时将瓶盖盖好， 放回原处，切忌乱拿乱放，“张冠李戴”。 ４、注意安全，用吸量管吸取试剂时应使 用吸球，严禁用嘴吸取。对于有毒、腐蚀 的试剂更应注意，应避免其直接接触人体 及衣物。乙醚、丙酮等易燃试剂应远离火 源，以免发生意外。
生物化学实验
海南大学海洋学院水产学系
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实验室规则(一)
１、自觉遵守学习纪律，保持实验室肃静， 不得喧哗吵闹、迟到早退，更不得缺席。 ２、爱护仪器，厉行节约。试剂、药品、蒸 馏水等应节约使用，不得浪费。如不慎损坏仪器， 应及时报告老师，说明原因，经老师同意后，方 可换领。并应按规定赔偿或处理。贵重、精密仪 器，应先熟悉使用方法，在老师的指导下，严格 按操作规程操作，发现故障，应立即报告老师， 不得擅自处理。