药物分析课件第4章-药物定量分析与分析方法验证
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药物分析课件第4章药物定量分析与分析方法验证
○ A．做空白试验 B．做对照实验 ○ C．做回收试验 D．增加平行测定次数 ○ E．选用多种测定方法
[B型题]
HPLC。
按分离方法分为：PC；TLC；柱色谱；GC；
（一）HPLC法
1. 对HPLC仪器一般要求 色谱柱、流动相按品种项下要求。
色谱柱的理论板数：n = 5.54(tR /Wh/2)2
2. 系统性试验 于1.5
分离度：R = 2（tR1 – tR2)/(W1 + W2); 要大
拖尾因子：T = W /2d 应在0.9 ～
1. 原料药 可用已知纯度对照品或样品进行测定；或与已建准 确
度的另一方法测定的结果进行比较。 2. 制剂 要考察辅料对回收率的影响。采用在空白辅料中加入 原
料对照品的方法作回收率试验，然后计算RSD。 具体做法：测定高、中、低三个浓度，n=3, 共9个数据来评价
回收率的RSD＜2%；用UV和HPLC发时，一般
三．含量测定 常用的方法对照品比较
法:Ci = (Ri-Rib)/(Rr-Rrb) ×Cr
Ch.P收载地高辛片、利血平片、洋地黄毒苷片。
二．荧光分析仪 有二个单
色光器—激发单色光器与
发射单色光
器；且激发光源、样品池和检测器成直 角。
三、色谱分析法
按分离原理分为：吸附；分配；离子交换；排阻色 谱
方法分类
2. 用硫酸水解后测定法 例如：硬脂酸镁的含量测定
Mg(C17H35COO)2 + H2SO4
H2SO4 + 2NaOH
MgSO4 + 2C17H35COOH Na2SO4 + 2H2O
（三）经氧化还原后测定法
COOH
I
I
[B型题]
HPLC。
按分离方法分为：PC；TLC；柱色谱；GC；
（一）HPLC法
1. 对HPLC仪器一般要求 色谱柱、流动相按品种项下要求。
色谱柱的理论板数：n = 5.54(tR /Wh/2)2
2. 系统性试验 于1.5
分离度：R = 2（tR1 – tR2)/(W1 + W2); 要大
拖尾因子：T = W /2d 应在0.9 ～
1. 原料药 可用已知纯度对照品或样品进行测定；或与已建准 确
度的另一方法测定的结果进行比较。 2. 制剂 要考察辅料对回收率的影响。采用在空白辅料中加入 原
料对照品的方法作回收率试验，然后计算RSD。 具体做法：测定高、中、低三个浓度，n=3, 共9个数据来评价
回收率的RSD＜2%；用UV和HPLC发时，一般
三．含量测定 常用的方法对照品比较
法:Ci = (Ri-Rib)/(Rr-Rrb) ×Cr
Ch.P收载地高辛片、利血平片、洋地黄毒苷片。
二．荧光分析仪 有二个单
色光器—激发单色光器与
发射单色光
器；且激发光源、样品池和检测器成直 角。
三、色谱分析法
按分离原理分为：吸附；分配；离子交换；排阻色 谱
方法分类
2. 用硫酸水解后测定法 例如：硬脂酸镁的含量测定
Mg(C17H35COO)2 + H2SO4
H2SO4 + 2NaOH
MgSO4 + 2C17H35COOH Na2SO4 + 2H2O
（三）经氧化还原后测定法
COOH
I
I
药物分析课件 第四章 药物定量分析与分析方法验证_OK
样品能在足够的氧气中燃烧分解完全样品能在足够的氧气中燃烧分解完全有利于将燃烧分解产物较快地吸收到吸有利于将燃烧分解产物较快地吸收到吸防止爆炸的可能性防止爆炸的可能性26燃烧瓶要洁净不能残留有机溶剂不能用有机润滑剂涂抹瓶塞要有防爆措施氧气要充足确保燃烧完全产物不能有黑色炭化物燃烧产生的烟雾要被完全吸收充分振摇和放置都是为了保证吸收完全例
③要有防爆措施 ④氧气要充足，确保燃烧完全，产物不能有黑色
炭化物 ⑤燃烧产生的烟雾要被完全吸收
充分振摇和放置都是为了保证吸收完全 例：碘产生紫色烟雾；氯、氟产生白色烟雾，烟
雾颜色完全消失后，即表示吸收完全 ⑥测定含氟有机化合物时要用石英燃烧瓶
26
4、应用
含卤素、硫、磷、氟及硒等有机药物的鉴别、杂 质的检查及含量测定
100%
注射剂：标示量％＝
V0
V T 标示量
100%
V VO
T F 标示量
100%
VO : 量取注射剂的体积， ml
36
(2)间接滴定法 1）生成物滴定法
供试品＋试剂 A 化合物 B
化合物 B＋滴定液 C 化合物 D
计量滴定液消耗的量，计算供试品的含量 计算同直接滴定法
37
2）回滴定法（剩余滴定法） 原理：先在待测样品溶液中加定量、过量的滴定
10
（一）湿法破坏
（1） 硝酸-高氯酸法 适用于血、尿、组织等生物样品的破坏，有
机金属药物经破坏后，得到的无机金属离子一 般呈高价态。
本法不能用于含氮杂环药物的破坏
干法灼烧法 11
（2） 硝酸-硫酸法 适用于大多数有机物质的破坏，破坏得到的
无机金属离子均为高价态。 不能用于含碱土金属有机药物的破坏
27
氧瓶燃烧
③要有防爆措施 ④氧气要充足，确保燃烧完全，产物不能有黑色
炭化物 ⑤燃烧产生的烟雾要被完全吸收
充分振摇和放置都是为了保证吸收完全 例：碘产生紫色烟雾；氯、氟产生白色烟雾，烟
雾颜色完全消失后，即表示吸收完全 ⑥测定含氟有机化合物时要用石英燃烧瓶
26
4、应用
含卤素、硫、磷、氟及硒等有机药物的鉴别、杂 质的检查及含量测定
100%
注射剂：标示量％＝
V0
V T 标示量
100%
V VO
T F 标示量
100%
VO : 量取注射剂的体积， ml
36
(2)间接滴定法 1）生成物滴定法
供试品＋试剂 A 化合物 B
化合物 B＋滴定液 C 化合物 D
计量滴定液消耗的量，计算供试品的含量 计算同直接滴定法
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2）回滴定法（剩余滴定法） 原理：先在待测样品溶液中加定量、过量的滴定
10
（一）湿法破坏
（1） 硝酸-高氯酸法 适用于血、尿、组织等生物样品的破坏，有
机金属药物经破坏后，得到的无机金属离子一 般呈高价态。
本法不能用于含氮杂环药物的破坏
干法灼烧法 11
（2） 硝酸-硫酸法 适用于大多数有机物质的破坏，破坏得到的
无机金属离子均为高价态。 不能用于含碱土金属有机药物的破坏
27
氧瓶燃烧
药物分析药物定量分析与分析方法验证 ppt课件
单质溴还原为溴负离子。
测定含碘药物时，分解产生的碘化氢可被氧
气进一步氧化，其燃烧产物主要为单质碘，
并 含 有 少 量 的 五 价 碘 （ HIO3 ） 与 一 价 碘
吸
（HI）。当使用AgNO3滴定法测定含量时，
收 液 的
用H2O-NaOH溶液-SO2饱和溶液作为吸收液， 上述不同价态的碘均转变为负一价的碘
H2O2与水的混合液作为吸收液，燃烧产物经
吸收转变为H2SO4，加入盐酸溶液并煮沸除
去剩余的过氧化氢后，加入BaCl2，使硫酸生
吸
成BaSO4，以重量法测定含量。
收 液
含磷药物（有机膦酸类）的燃烧产物为P2O5，
的 以水为吸收液，加入少量硝酸溶液并经煮沸
选 择
使焦磷酸（H4P2O7）和偏磷酸[(HPO3)n]转 化为磷酸后，采用钼蓝比色法测定含量。
f. 砷盐的检查：有机结合的砷经与无水Na2CO3或 Ca(OH)2 、 Mg(NO3)2 共 热 （ <700℃ ） 转 化 为 无机砷酸盐后，依法检查。本法主要用于高分子 化合物（如：右旋糖酐铁）或植物提取物（如： 大豆油）中砷盐的检查，亦应用与少数有机药物 （如吡罗昔康、布美他尼等）.
② 氧瓶燃烧法：
1. 湿法破坏
适用于含氮有机合成药物分析的前处理，在生物制 品分析中用于氮（包括蛋白质）、磷、硫柳汞及氯 化钠测定法的前处理； 亦可用于生物样品中金属元素测定时生物基质的去除。 主要分解剂：硫酸 辅助分解剂：硝酸、高氯酸、过氧化氢。 湿法破坏可分为：硫酸-硝酸法、硫酸-高氯酸法、 硫酸-硫酸盐法、硝酸-高锰酸钾法。
选 （ NaI ） ； 若 使 用 间 接 碘 量 法 测 定 时 ， 用
择
H2O-NaOH溶液为吸收液，此时吸收液中的
第四章药物定量分析与方法验证PPT课件
5ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
（二）容量分析法的计算问题
1.滴定度（T）：
每1ml规定浓度的滴定液相当于被测物质的质量(mg)
2.滴定度的计算
aA（待测物） + bB（滴定液）
a
b
T/M
1·m
cC + dD
T = m×a/b×M m：滴定液浓度 (mol/L)
M：被测物分子量
WA=T×VB 6
3.百分含量的计算
（1）直接滴定法 设至终点时，消耗滴定液体积为V ml
CX
CX＝—C—AR·R—AX—
要求：进样量准确、操作条件稳定
33
34
（二）GC法 1. 对GC仪器一般要求
载 气：氮气 色谱柱：填充柱或毛细管柱 填充柱：内径2～4mm，长1～10m，内装吸附剂
高分子多孔小球或涂渍固定液的载体 毛细管柱：内径0.2～0.5mm，长10～100m，
片数＝ W
W
15
16
2）吸收系数法：
E C X
AX
1%
1cm
E 注意： 1％ 1cm
应>100
应注意仪器的校正和检定：E
1％ 1cm
作为计算浓
度的因数进行定量的方法，不是任何情况下都
适用的，特别是单色光不纯的情况下，A会随
仪器不同而变化，误差较大。
但若认定一台仪器，固定其工作状态和测 定条件，则C和A间的关系在多数情况下仍符合 Lambert－Beer定律。
2. 系统适用性试验
色谱柱的理论板数：n = 5.54(tR /Wh/2)2 分离度：R = 2（tR1 – tR2)/(W1 + W2); 应大于1.5
重复性：对照液连续进样5次，峰面积RSD≤2.0％
（二）容量分析法的计算问题
1.滴定度（T）：
每1ml规定浓度的滴定液相当于被测物质的质量(mg)
2.滴定度的计算
aA（待测物） + bB（滴定液）
a
b
T/M
1·m
cC + dD
T = m×a/b×M m：滴定液浓度 (mol/L)
M：被测物分子量
WA=T×VB 6
3.百分含量的计算
（1）直接滴定法 设至终点时，消耗滴定液体积为V ml
CX
CX＝—C—AR·R—AX—
要求：进样量准确、操作条件稳定
33
34
（二）GC法 1. 对GC仪器一般要求
载 气：氮气 色谱柱：填充柱或毛细管柱 填充柱：内径2～4mm，长1～10m，内装吸附剂
高分子多孔小球或涂渍固定液的载体 毛细管柱：内径0.2～0.5mm，长10～100m，
片数＝ W
W
15
16
2）吸收系数法：
E C X
AX
1%
1cm
E 注意： 1％ 1cm
应>100
应注意仪器的校正和检定：E
1％ 1cm
作为计算浓
度的因数进行定量的方法，不是任何情况下都
适用的，特别是单色光不纯的情况下，A会随
仪器不同而变化，误差较大。
但若认定一台仪器，固定其工作状态和测 定条件，则C和A间的关系在多数情况下仍符合 Lambert－Beer定律。
2. 系统适用性试验
色谱柱的理论板数：n = 5.54(tR /Wh/2)2 分离度：R = 2（tR1 – tR2)/(W1 + W2); 应大于1.5
重复性：对照液连续进样5次，峰面积RSD≤2.0％
4药物定量分析与分析方法验证解析精品PPT课件
反应摩尔比为1∶6
T cM 0.02 416.34 1.388mg / ml
n
6
98：140. 氧瓶燃烧法中的装置有 A. 磨口硬质玻璃锥形瓶 B. 磨口软质玻璃锥形瓶 C. 铂丝 D. 铁丝 E. 铝丝
96：133（99x：138）．选择氧瓶燃烧 法所必备的实验物品 A. 磨口硬质玻璃锥形瓶 B. 铂丝 C. 普通滤纸 D. 氢气 E. 无灰滤纸
Fe (SCN) 2+ （淡棕红色）
测定方法 取本品约0.1g，精密称定，加 乙醇5ml溶解后，加20%氢氧化钠溶液5ml， 加热回流15min，放冷至室温，加水20ml 与硝酸5ml，精密加硝酸银滴定液 (0.1mol/L) 30ml，再加邻苯二甲酸二丁酯 5ml，密塞，强力振摇后，加硫酸铁铵指 示液2ml，用硫氰酸铵滴定液(0.1mol/L)滴 定，并将滴定的结果用空白试验校正。每 1ml硝酸银滴定液(0.1mol/L)相当于 6.216mg的C4H7Cl3O·1/2H2O。
OH SO3Na
磺溴酞钠
实验诊断用药 （肝功能）
（二）含卤素有机药物的分析
C X 适当的处理 X
直接回流后测定法 碱性或酸性还原后测定法 氧瓶燃烧分解后测定法
1. 直接回流后测定法 本法是将含卤素有机药物溶于适当
溶剂（如乙醇）中，加入氢氧化钠溶 液（或一定量过量的硝酸银滴定液） 后，加热回流使其水解，将有机结合 的卤素转变为无机的卤素离子，然后 采用银量法（Volhard法）测定。
本法特点是简便、快速、破坏 完全，尤其适用于微量样品的分析
（ 2） 仪器与材料
①仪器装置 燃烧瓶为500、1000或
2000ml无色、磨口、厚壁、 硬质玻璃锥型瓶；瓶塞空 心，底部熔封铂丝一根， 下端呈螺旋状或网状
T cM 0.02 416.34 1.388mg / ml
n
6
98：140. 氧瓶燃烧法中的装置有 A. 磨口硬质玻璃锥形瓶 B. 磨口软质玻璃锥形瓶 C. 铂丝 D. 铁丝 E. 铝丝
96：133（99x：138）．选择氧瓶燃烧 法所必备的实验物品 A. 磨口硬质玻璃锥形瓶 B. 铂丝 C. 普通滤纸 D. 氢气 E. 无灰滤纸
Fe (SCN) 2+ （淡棕红色）
测定方法 取本品约0.1g，精密称定，加 乙醇5ml溶解后，加20%氢氧化钠溶液5ml， 加热回流15min，放冷至室温，加水20ml 与硝酸5ml，精密加硝酸银滴定液 (0.1mol/L) 30ml，再加邻苯二甲酸二丁酯 5ml，密塞，强力振摇后，加硫酸铁铵指 示液2ml，用硫氰酸铵滴定液(0.1mol/L)滴 定，并将滴定的结果用空白试验校正。每 1ml硝酸银滴定液(0.1mol/L)相当于 6.216mg的C4H7Cl3O·1/2H2O。
OH SO3Na
磺溴酞钠
实验诊断用药 （肝功能）
（二）含卤素有机药物的分析
C X 适当的处理 X
直接回流后测定法 碱性或酸性还原后测定法 氧瓶燃烧分解后测定法
1. 直接回流后测定法 本法是将含卤素有机药物溶于适当
溶剂（如乙醇）中，加入氢氧化钠溶 液（或一定量过量的硝酸银滴定液） 后，加热回流使其水解，将有机结合 的卤素转变为无机的卤素离子，然后 采用银量法（Volhard法）测定。
本法特点是简便、快速、破坏 完全，尤其适用于微量样品的分析
（ 2） 仪器与材料
①仪器装置 燃烧瓶为500、1000或
2000ml无色、磨口、厚壁、 硬质玻璃锥型瓶；瓶塞空 心，底部熔封铂丝一根， 下端呈螺旋状或网状
药物定量分析与分析方法验证PPT课件
（二）干法破坏
适用于含卤素、硫、磷等有机药物 分析的前处理，亦用于某些药物中硒
和砷盐的检查。
高温炽灼法 氧瓶燃烧法
1.高温炽灼法 将含待测元素（卤素、磷、砷 盐)的有机药物经高温灼烧灰化， 使有机结构分解而待测元素转化为 无机元素或可溶性无机盐。 常加入无水碳酸钠、硝酸镁、 氢氧化钙、氧化锌等辅助灰化
2. 氧瓶燃烧法 oxygen flask combustion method 适用于含卤素或硫、磷等元素 的有机药物的鉴别、限量检查或含 量测定 亦可用于药物中杂质硒的检查
原理 将有机药物放入充满氧气的密闭燃 烧瓶中充分燃烧，有机结构彻底分解 为二氧化碳和水，待测元素转化为氧 化物（或无氧酸），被吸收于适当的 吸收液中，然后根据欲测物质的性质， 采用适宜的方法进行分析
A. H2O2溶液 B. H2O2—NaOH溶液
C. NaOH溶液 D．硫酸肼饱和液 E. NaOH—硫酸肼饱和液
例4. 氧瓶燃烧法可用于
A. 含卤素有机药物的含量测定 B. 醚类药物的含量测定
C. 检查甾体激素类药物中的氟
D. 检查甾体激素类药物中的硒 E. 芳酸类药物的含量测定
本章要求
掌握凯氏定氮法及氧瓶燃烧法的原理 及所加试剂、操作要点 熟悉各种定量分析样品的前处理方法 的适用范围
难以分解的药物 辅助氧化剂 30% 过氧化氢和高氯酸
不能在高温时加入，应待消解 液放冷后加入，并再次加热继续消 解
3.应用范围：含有氨基或酰胺结构的 药物含量
偶氮或肼结构的含氮药物，在消解过 程易生成氮气而损失，在消解前加入锌粉 还原 杂环中的氮不易断键而难以消解，可 用氢碘酸或红磷还原为氢化杂环后在消解 含氮量超过10%的样品，在消解液中加 入少量多碳化合物，如蔗糖、淀粉等还原 剂，以利于氮转变为氨。
第四章药物定量分析与分析方法验证pptPowerPoi
例 泛影酸的测定 ChP (2000)
取本品约0.4g，精密称定，加氢氧化钠溶 液30ml与锌粉1.0g，加热回流30min，放冷，冷 凝管用少量水洗涤，滤过，烧瓶与滤器用水洗 涤3次，每次15ml，洗液与滤液合并，加冰醋 酸5ml与曙红钠指示液5滴，用硝酸银滴定液 (0.1mol/L)滴定。每1ml硝酸银滴定液(0.1mol/L) 相当于20.46mg的C11H9 I 3N2O4。
第四章药物定量分析与分析方法验证 pptPowerPoi
本法适用于含卤素有机药物结构中 卤素原子结合不牢固的药物（如卤原 子和脂肪碳原子相连者）。
第四章药物定量分析与分析方法验证 pptPowerPoi
例:三氯叔丁醇的测定 ChP（2000）
原理 三氯叔丁醇在氢氧化钠溶液中加热 回流水解，氯元素全部转变成氯化钠，然 后用剩余滴定法，即于水解液中加硝酸酸 化，再加入定量过量的硝酸银滴定液，使 Cl-生成AgCl沉淀，过量的硝酸银，以Fe3+ 为指示剂，用硫氰酸铵液回滴定。
本法不能用于含氮杂环药物的破坏。
第四章药物定量分析与分析方法验证 pptPowerPoi
2. 硝酸-硫酸法
本法适用于大多数有机物质的破坏， 破坏得到的无机金属离子均为高价态。
本法不能用于含碱土金属有机药物的 破坏。
第四章药物定量分析与分析方法验证 pptPowerPoi
3. 硫酸-硫酸盐法
本法是往样品中加入浓硫酸作氧化剂， 加入硫酸盐提高硫酸的沸点，增强硫酸的 氧化破坏能力，且防止硫酸的分解损失。
第四章药物定量分析与分析方法验证 pptPowerPoi
原理： Mg(C17 H35COO)2 + H2SO4
△ MgSO4 + 2 C17 H35COOH
第四章药物定量分析与分析方法验证课件
Ar W
含量%= Ax×D ×100%(原料）
E×100×W
3.计算分光光度法 a.解线性方程组法，b.双入测定法 c.系数倍率法，d.导数法
片剂和注射剂
Ax×Cr×D×W 标示量%= ————————×100%
Ar×W样×标示量
A×D×W 标示量%=—————————————
E 11c%m×100×W样×标示量
(1).内标加校正因子 对照品+内标：进样
f= As/Cs( 内）
Ar/Cr(外）
供试液+内标
Cx=f Ax
As’/Cs’
1）一般两次进样量相同 2）两次所加内标量相同
HPLC. 测定（用A或h定量）
(2).外标法：
12))标单准点曲比线较法法：：C回x归=C方r AA程xr ，相关系数，求Cx
NaOH/H2O,Br用H2O/NaOH/H2O2,S用H2O2/H2O, Se用AgNO3
氧瓶燃烧 . (2)操作
称样于无灰滤纸中包好，并固定在铂丝下端， 露出尾巴。
在燃烧瓶中加入规定吸收液，快速通氧使之充 满瓶子。
点燃滤纸包尾部，迅速放入燃烧瓶，按紧瓶塞， 少量水封住瓶口。
燃烧完后，振摇，使烟雾全部吸收于吸收液中。 用适当方法测定，同时做空白。
+ 2KBrO3
3 N
+3N2+3H2O+2KBr
含量计算
1. 直接滴定：
原料：含量= T.V(mg) ×F×100%
W
F: C/C0(浓度系数）
T·V·F×W 片剂的标示量%=———————×100%
W×标示量
2.间接滴定
(1)置换滴定
待测物与化合物A反应, 生成B, 再用标准滴定液
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HBr + CO
+
+ 5I + 6H
3I
2
+ 3H 2 O
2S 4O 6
I 2 + 2Na 2 S 2 O 3
2NaI + Na
返 回
第二节 定量分析方法特点
一、容量分析法
（一）容量分析法的特点 操作简单、快速； 比较准确（RSD＜0.2%）； 仪器普通易得。
（二）容量分析法的计算问题
1. 滴定度（T）的概念 每1mlmol溶液相当于被测物质的量(mg) 2. 滴定度的计算
第四章
药物定量分析与分析方法验证
基本要求 第一节 定量分析样品的前处理方法 第二节 定量分析方法特点 第三节 药品质量标准分析方法验证 第四节 生物样品分析方法的基本要求
练习与思考
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基本要求
一、掌握定量分析方法验证的效能指标。
二、熟悉定量分析样品的前处理方法。
三、了解定量分析样品的前处理方法的进展
（二）重复性、中间精密度及重现性
1. 重复性 在相同条件下,由一个分析人员测定所得结果的精密度.
2. 中间精密度 在同一个实验室，不同时间由不同分析人员用不
同设备测定结果的精密度。
3. 重现性 在不同实验室由不同分析人员测定结果的精密度。
（三）数据要求
应报告S或SD、RSD和可信限。用统计学的可 信性分析(t或f）。
按分离方法分为：PC；TLC；柱色谱；GC；HPLC。 （一）HPLC法 1. 对HPLC仪器一般要求 色谱柱、流动相按品种项下要求。 色谱柱的理论板数：n = 5.54(tR /Wh/2)2 2. 系统性试验 分离度：R = 2（tR1 – tR2)/(W1 + W2); 要大于1.5 拖尾因子：T = W0.05h/2d1 应在0.9 ～ 1.05
灵敏度高，可达10-4g/ml ～ 10-7g/ml
1. 特点 准确度高，SRD（%）为2% ～5% 仪器价格低廉，操作简单，易普及，应用 范围广。 2. 朗伯-比耳定律
A = ECL
E1%1cm = ε ×10/M
3. 仪器校正和检定
波长校正用汞灯中较强谱线237.38,253.65,275.28,296.73, 313.16,334.15,365.02,404.66,425.83,546.07nm与576.96nm
（二）荧光分光光度法
灵敏度高，可达10-10g/ml ～ 10-12g/ml 在低浓度进行测定，防止F与C不成正比及自熄灭作用 1. 特点 用基准物溶液校正仪器灵敏度，防止样品液荧光衰减 灵敏度高，但干扰因素多。
制备荧光衍生物，可提高其灵敏度和选择性。
用样品量少，操作简单，方法快速，应用范围较广。
测定波长 220nm
106.6
透光率(%) ＜ 0.8
杂散光检查：
NaNO2
5.00
340nm
＜ 0.8
4. 对溶剂的要求:
220～240nm 241～250nm 251～300nm 300nm以上 溶剂+吸收池A ＜0.41 ＜0.20 ＜0.10 ＜0.05
5. 测定方法
要求供试品溶液的A应在0.3 ～0.7 对照品比较法：Cx=(Ax/Ar)Cr; 含量%=Cx×D/W×100 % 常用方法 吸收系数法： 含量%= (E1%1cm )x/(E1%1cm )r ×100 % 计算分光光度法：VA的三点校正法
（二）数据要求
回收率% = （测定平均值— 空白值）/加入量×100%
要求制备高、中、低三浓度的样品，各测定3次。应
报告已知加入量的回收率，或测定结果平均值与真实值
之差及其可信限。
二、精密度
是指在规定的测试条件下，同一个均匀样品，经多次测定结果 之间的接近程度。
（一）精密度表示方法
1. 偏差(deviation , d) d = 测得值-平均值=Xi-X 2. 标准偏差（standard deviation, SD或S） S =[(∑Xi – X)2/(n-1)]1/2 3. 相对标准差(relative standard deviation, RSD)也称变异系数 (coefficient of variation, CV) RSD=标准偏差/平均值×100%=S/X ×100%
三、专属性
是指在其他成分(如杂质、降解产物、辅料等)可能存在下， 采用的方法能准确测定出被测物的特性。鉴别反应、杂质检 查、含量测定方法，均应考察其专属性。
（一）鉴别反应
应能与其它共存的物质或相似化合物区分，不含被测组分 的样品均应呈现负反应。
（二）含量测度应符合要求。在能 获得杂质的情况下，可加到试样中，考察对结果的干扰。在杂 质和降解物不能获得的情况下，可用以验证方法和药典方法进 行对照；也可用对试样加速破坏的方法，比较两种方法。
二、不经有机破坏的分析方法
（一）直接测定法
例如：富马酸亚铁
CH 0 C O CH
C
O
Fe
溶于热稀矿酸，采用铈量法 ，邻二氮菲作指示剂
（二）经水解后测定法
1. 直接回流后测定法 例如：三氯叔丁醇的含量测定
CCl3-C(CH3)2-OH + 4NaOH NaCl + AgNO3 AgNO3 + NH4SCN
或用仪器中氘灯的486.02nm与656.10nm进行校正。
吸收度的检定：用K2CrO7(60mg)+0.005mol/LH2SO4液至1000ml 波长(nm) 235(最小) 257(最大) 313(最小) 350(最大)
E1%1cm
124.5
试剂 NaI
144.0
浓度(g/ml) 1.00
48.62
aA + bB cC + dD T = M×b/a×B
3. 百分含量的计算 （1）直接滴定法 D% = V ×F × T/W ×100%
F = 实际标定的浓度/规定的浓度
（2）间接滴定法（回滴定法；剩余滴定法）
D% = （VO – VB) ×F ×T/W ×100%
二、光谱分析法
（一）紫外-可见分光光度法（200nm～760nm)
Flu法：LOD = f.3S空 = C样/(F样-F空)× 3S空
GC和HPLC法： LOD = S/N = 2或3
（二）数据要求
应附测试图，说明测试过程和检测限结果。
五、定量限（limit of quantitation, LOQ)
是指样品中被测物能被定量测定的最低量，其测定结果应 具一定准确度和精密度。杂质和降解产物进行定量测定时，要求
2. 荧光分析仪 有二个单色光器—激发单色光器与发射单色光 器；且激发光源、样品池和检测器成直角。 3. 含量测定 常用的方法对照品比较法:Ci = (Ri-Rib)/(Rr-Rrb) ×Cr Ch.P收载地高辛片、利血平片、洋地黄毒苷片。
三、色谱分析法
按分离原理分为：吸附；分配；离子交换；排阻色谱 方法分类
3
2. 酸性还原后测定 例如：碘番酸的含量测定 Zn还原 后银量法
3. 利用药物中可游离的金属离子的氧化性测定含量 （1）含锑药物 例如：葡萄糖酸锑的含量测定
Sb5+ + 2KI I2 + 2Na2S2O3 H+ Sb3+ + 2K+ ++ I2 2NaI + Na2S4O6
（2）含铁药物
2Fe3+ + 2KI
色谱法和其他分离法，应附代表性的图谱，以说明专属性。
四、检测限（limit of detection, LOD)
（一）常用的方法
1.非仪器分析目视法 2.仪器分析方法 用已知浓度被测物，试验出能被可靠地 检测出的最低浓度或量。 UV法：LOD = f.3S空 = C样/A样× 3S空
是指试样中被测物能被检测出的最低浓度或量，是限度检验 指标。它无需测定，只要指出高于或低于该规定的浓度或量即可。
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第三节 药品质量标准分析方法验证
一、准确度
是指用该方法测定结果与真实值接近的程度，用回收率表示 （一）含量测定方法的准确度 1. 原料药 可用已知纯度对照品或样品进行测定；或与已建准确 度的另一方法测定的结果进行比较。 2. 制剂 要考察辅料对回收率的影响。采用在空白辅料中加入原 料对照品的方法作回收率试验，然后计算RSD。 具体做法：测定高、中、低三个浓度，n=3, 共9个数据来评价 回收率的RSD＜2%；用UV和HPLC发时，一般回 收率可达98%～102%；容量法可达99.7%～100.3%
△
(CH3)2CO +3NaCl + HCOONa +2H2O AgCl AgSCN + NaNO3 + NH4NO3
2. 用硫酸水解后测定法 例如：硬脂酸镁的含量测定
Mg(C17H35COO)2 + H2SO4 H2SO4 + 2NaOH MgSO4 + 2C17H35COOH Na2SO4 + 2H2O
2. 系统性试验
分离度：R = 2（tR1 – tR2)/(W1 + W2); 要大于1.5
拖尾因子：T = W0.05h/2d1 应在0.9 ～ 1.05
内标法加校正因子测定供试品中主成分含量
3.
测定方法
外标法测定供试品中主成分含量
标准曲线法 外标一点法
应用示例： Ch.P(2000)收载的月桂卓酮、维生素E及其片剂、注 射剂、甲酚皂溶液等均采用GC法中的内标法加校正 因子测定含量。
及在药物分中的应用。
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第一节 定量分析样品的前处理方法
一、概述
1.为什么要对定量分析的样品进行前处理？ 含卤素有机药物 含金属有机药物 R-X （F，Cl, Br, I ） 金属有机药物 R-O-Me（有机酸或酚的 金属盐；结合不牢固） 有机金属药物 R-Me （结合牢固）