霉菌检测

3. 霉菌检测（按GB/T 4789）

3.1 设备和材料

冰箱：0℃--4℃

恒温培养箱25℃-28℃

天平:感量0.1g

无菌吸管1ml（具0.01ml刻度）、10ml(具0.1ml刻度)或微量移液器及吸头

无菌具玻塞锥形瓶:容量300ml

无菌培养皿:直径90mm

灭菌广口瓶：500ml

灭菌试管：16mm×160mm

3.2 培养基和试剂

3.2.1 马铃薯-葡萄糖琼脂培养基，附加抗菌素；

马铃薯（去皮切块） 300g

葡萄糖 20g

琼脂 20g

蒸馏水 1000ml

制法：将马铃薯去皮切块，加1000ml蒸馏水，煮沸10min—20min。用纱布过滤，补加蒸馏水至1000ml。加入葡萄糖和琼脂，加热熔化，分装，121℃高压灭菌20min 3.2．2 孟加拉红培养基

蛋白胨 5g

葡萄糖 10g

磷酸二氢钾 1g

硫酸镁 0.5g

琼脂 20g

1/3000孟加拉红溶液 100ml

蒸馏水 1000ml

氯霉素 0.1g

制法：上述成分加入蒸馏水中溶解后，再加孟加拉红该溶液。另用少量乙醇溶解氯霉素加入培养基中，分装后，121℃高压灭菌20min。

3.2.3 灭菌蒸馏水

4. 操作步骤

4.1 以无菌操作称取检样25g,放入含225ml灭菌水的具玻塞锥形瓶中，振摇30min，即为1﹕10 稀释液。

4.2 用灭菌吸管吸取1﹕10 稀释液10ml,注入灭菌试管中，另用1ml灭菌吸管吹吸50次，使霉菌孢子充分散开。

4.3 取1ml1﹕10 稀释液注入含有9ml灭菌水的试管中，另换一支1ml灭菌吸管吹吸5次，此液为1﹕100稀释液。

4.4 按上述操作顺序做10倍递增稀释液，每稀释一次，换用一支1ml灭菌吸管，根据对样品污染情况的估计，选择三个合适的稀释度，分别在做10倍稀释的同时，吸取1ml 稀释液于灭菌平皿中，每个稀释度做两个平皿，然后将晾至45℃左右的培养基注入平皿中，并转动平皿使之与样液混匀，待琼脂凝固后，倒置于25℃-28℃恒温箱中，3d 后开始观察，共培养观察5d。

4.5 计算方法：通常选择菌落数在10-150之间的平皿进行计数，同稀释度的两个平皿的菌落平均数乘以稀释倍数，即为每克（或毫升）检样中所含霉菌和酵母数。

4.5.1 若所有平板上菌落数大于150，则对稀释度最高的平板进行计数，其他平板可记录为多不可计，结果按平均菌落数乘以最高稀释倍数计算

4.5.2若所有平板上菌落数小于10，则应按稀释度最低的平均菌落数乘以稀释倍数计算。

5 报告

5.1 菌落数在100以内时，按“四舍五入”原则修约，采用两位有效数字报告。

5.2 菌落数大于或等于100时，前三位数字采用“四舍五入”原则修约后，取前二位数字，后面用0代替位数来表示结果；也可用10的指数来表示，此时也按“四舍五入”原则修约，采用两位有效数字。

5.3 称重取样以CFU/g为单位报告，报告或分别报告霉菌和/或酵母数。