实验八 补体结合试验

医学免疫学实验指导

实验八补体结合实验由长沙达尔锋生物科技有限公司整理

【文章介绍】

实验是映证理论，对学生进行基本技能训练和培养科学研究能力的手段。BioRike博瑞克根据《医学免疫学实验指导》一书系统整理了14个实验项目，每个实验说明实验目的，实验原理，实验内容方法，实验要求及注意事项，希望广大师生能够从中有所收获。

BioRike简介：BioRike（中文简称“博瑞克”）是长沙达尔锋生物科技有限公司旗下的产品品牌,由旗下专业的生命科学实验室BioRike博瑞克研发和生产。BioRike是一家致力于生命科学和生物技术领域的高科技实验室，专门从事以Elisa试剂盒、抗体、细胞因子、免疫检测试剂盒、血清等免疫学产品为主的生物试剂的研发与销售。

【实验目的】

1.熟悉补体结合试验的原理和方法及其应用。

2.了解溶血素单位、补体单位、抗原单位的测定方法。

【实验原理】

补体结合试验（complement fixation text ,CFT）是在补体参与下，以绵羊红细胞和溶血素作为指示系统，来检测未知的抗原或抗体的血清学试验。有五种成分参与，分为指示系统和待检系统(已知抗原和未知抗体或已知抗体和未知抗原)。补体用新鲜豚鼠血清。方法是将已知的抗原或抗体与未知标本(可能含相应抗体或抗原)充分混合，再加入补体作用一段时间，最后加入指示系统。若待检系统有相应抗体或抗原，则能形成抗原抗体复合物，从而消耗了补体不出现溶血现象，此为阳性；相反，出现溶血则为阴性。补体结合试验的影响因素较多，正式试验前需对已知成分作一系列滴定，尤其是补体，应选择适宜的量参与反应，避免假性结果。每次试验尚需同时设立多种对照，以作为判断结果可靠性的依据。

该法对颗粒性或可溶性抗原均适用，临床上常用于检测某些病毒、立克次氏体和螺旋体感染者血清内的中的抗体，亦可用于某些病毒的分型。

一、溶血素单位滴定

【材料】

1.抗体：溶血素血清。

2.抗原：2％绵羊红细胞悬液。

3.补体：（1:30）取自豚鼠新鲜血清

4.其它：生理盐水、小试管、试管架、吸管、37℃水浴锅。

【方法与结果】

1.按下表8-1于各试管分别加入不同稀释的溶血素0.2ml及其成分。

2.充分混合后置于37℃水浴锅中30分钟，然后观察结果。

3.凡最高稀释度的溶血素可呈现完全溶血者为一个单位。举例：上表结果表明，第11管（即1：9600倍稀释）0.2毫升溶血素为一个单位，在溶血反应中常用0.2毫升中含有2个溶血

素单位的稀释液。配置时可取1：100倍稀释的溶血素1ml加生理盐水47ml。

二、补体单位滴定

【材料】

1.抗体：2单位溶血素。

2.抗原：2％绵羊红细胞悬液。

3.补体：（1:30）取自豚鼠新鲜血清

4.其它：生理盐水、小试管、试管架、吸管、37℃水浴锅。

【方法与结果】

1.按下表8-2于各试管分别加入1:30稀释液的补体。

2.依次加入其他各成分至每管中，37℃水浴一定时间后观察结果，判定补体单位。

3.补体单位：凡能使一定量红细胞发生完全溶解的最小补体量，称为1个确定单位。如上表中第3管开始出现溶血现象，因此第3管（0.1ml）所含补体量为1个确定单位。

由于在实际应用时补体有一部分损失，故须酌量增加一些，通常取其次高一管补体量称为1个实用单位。在下例中：

1个确定单位=0.1ml 1:30稀释的补体。

1个实用单位=0.12ml 1:30稀释的补体。

4.补体的稀释：若使每0.2ml补体含2个实用单位，可照下法计算。

30:2×0.12=X:0.2

X=（0.2×30）÷0.24=25

即将补体稀释25倍，用0.2ml即可。

（三）正交试验

正交试验可以做定性的，液可以做定量的。本实验用伤寒杆菌的提取液为抗原与其免疫血清做定性实验。

【材料】

1.抗体：1:5稀释的伤寒血清。

2.抗原：1:50稀释的伤寒抗原，1:80稀释的痢疾抗原。

3.补体：（1:25）取自豚鼠新鲜血清。

4.指示系统：2单位溶血素，2%绵羊红细胞。

5.其它：同预备试验。

【方法】

按表8-3顺序操作。

【结果】

观察各管溶血情况，记录并分析其意义。

【注意事项】

1.以细菌作抗原时，应使用细菌的提取液而不用悬液，通常滴定找出最适稀释度。

2.血清需56℃30分钟灭活。

3.补体性质不稳定，以实验的当天采取效果最好，操作时尽量减少在室温停留的时间。