活化部分凝血活酶时间APTT测定知识讲解

深圳市沙井人民医院检验科文件编号：SJ/QS-26-OP-XY-059

版本版次：A/01

临床血液作业指导书生效日期：2005.01.01

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活化部分凝血活酶时间测定（APTT）

1.项目名称:

活化部分凝血活酶时间(Activated Partial Thromboplastin Time,APTT)

2.检验目的

2.1手术前的检测

2.2 DIC的协诊

2.3抗凝药物治疗监测

2.4凝血因子检查

2.5循环血液中抗凝物质和一些疾病协诊等

3.检验原理：

3.1检测原理:全自动血凝仪测定,散射光凝固法检测——确定量的血浆样本（50μl）经过一定时间（3min）温育后，加入部分凝血活酶时间反应试剂（50μl），加温1min，加入0.025MCaCl250μl，加温4min,采用波长660nm的光照射反应物，通过测量散射光光强度的改变来测定凝血过程(纤维蛋白原转化为纤维蛋白)中的浊度变化,从散射光光强度的测定可得凝集曲线，反应物凝固的时间即活化部分凝血活酶时间。

3.2反应方法学溯源:37℃条件下,以鞣花酸激活因子Ⅻ和Ⅺ,以脑磷脂(部分凝血活酶)代替血小板,在Ca2+参与下,观察贫血小板血浆凝固所需时间,即为活化部分凝血活酶时间,是内源凝血系统较敏感和常用的筛选试验.

4.性能参数

4.1重复性:CV≤2%

4.2分析和计算参数:报告单位秒(S)

4.3样本量:50ul,试剂量:50ul激活剂,50ul CaCl2

4.4检验时间:在最长检验时间之内测出结果,标准设置最长检验时间:190秒

4.5精密度范围:1.3～6.0%

5．原始样品系统:

血浆

6.容器和添加剂类型

容器采用真空负压专用抗凝管,添加剂类型为0.109M枸橼酸钠

7.试剂及配套品

7.1激活剂:Cephaloplastin试剂(Dade Actin Activated Cephaloplastin Reagent)

7.1.1商标:德灵(DADE BEHRING)

7.1.2包装规格:10×2ml

7.1.3货号:B4218-1

7.1.4成分:脑磷脂(从干燥兔脑粉中提取)加入含有缓冲液、稳定剂和防腐剂的1.0×10-4M的鞣花酸溶液

7.1.5使用方法:液体试剂,直接使用

7.1.6储存:未开封试剂2～8℃贮存到说明书上有效期，开盖后2～8℃有效期7天,不能冰冻。未被污染的试剂稳定期是：2～8℃3年、18～25℃1年、37℃2天;

7.2氯化钙溶液(Calcium Chloride Solution)

7.2.1商标:德灵(DADE BEHRING)

7.2.2包装规格:10×15ml

7.2.3货号:ORHO37

7.2.4成分:0.025mol/L的氯化钙溶液

7.2.5使用方法:液体试剂,直接使用.

7.2.6储存:没开盖试剂放2～8℃存放至试剂瓶上有效期.开盖后2～8℃有效期7天.

7.3清洗液(Clean I):用于测定过程中的吸样针冲洗

7.3.1商标:希森美康(Sysmex)

7.3.2包装规格:50ml

7.3.3货号:GSA500A

7.3.4成分:1%次氯酸钠及活性成分

7.3.5使用方法;液体试剂,直接使用

7.3.6储存:没开盖试剂放2～8℃存放至包装有效期,开盖后放于仪器内有效期仅存4小时

7.4校准质控血浆(Ci-Trol)

7.4.1商标: 德灵(DADE BEHRING)

7.4.2货号:Level 1(Normai),291070 10×1ml

Level 2(Abnormal),291071 10×1ml

Level 3(Abnormal),291072 10×1ml

7.4.3使用方法:1ml蒸馏水溶解置室温15分钟后使用

7.4.4储存:室温:2h, 2～8℃:4h,冷冻分装保存:-20℃<2周,-70℃<6个月

8.校准程序:仪器的验证和光路系统校正

仪器的验证由生产商、代理商指定工程师和我科共同完成.灯泡大约半年更换一次,光路系统的校正由代理商完成.

9.程序步骤:

9.1标本采集与要求

9.1.1标本采集:

抽取静脉血 1.8ml,加入到含0.2ml109mmol/L(1:9)的枸橼酸钠溶液抗凝真空试管中,并轻轻颠倒10次使之充分混匀,不得有凝块、不得形成泡沫,总量不得超过2.0±0.2ml,并在试管上做好标识.

采血应避免溶血和脂血,故患者应尽量空腹和避免在输入脂肪乳过程中或其后8小时内采血.采血后2小时内送到检验科,需要运输时应在低温条件下运输.采集标本时宜“一针见血”,以防止组织损伤,外源性凝血因子进入针管,最好不与其它实验一起采集,否则由于标本的分配、分装而使血液停留在针管的时间延长.

9.1.2不合格标本的处理

对凝固、有凝块、严重溶血、重度黄疸、脂血、采血量不符合要求、无条码或无标识等不合格的标本,距采集时间超过2小时并且没有按要求储存的标本,按程序文件《样品核收、登记和保存程序》处理

9.1.3标本保存

检测应在标本采集后2小时内完成,2～8℃保存不超过4小时,分离后的血浆-20℃以下密封可保存2周.需长期保存的标本在-70℃下不超过6个月,且只能冻融1次，分析前在37℃迅速解冻，以减低凝血因子的消耗，解冻后立即测试。分析后的标本不保存.

9.2检测前准备

采样后应尽快分离血浆(60分钟内进行),将标本1500×g(3000r/min)离心10分钟,务使血小板去除;.

在进行质控物和病人标本分析检测前,进行仪器状态和试剂检查,确保准备完好后才能进行分析.并将检查结果记录在相应的仪器设备使用记录表上.

9.3病人标本的检测

9.3.1开机:开CA1500仪器左侧电源→开机后仪器进行自检、预热,当屏幕上显示

验

9.3.2每日针冲洗:在主屏幕上选然后按下

9.3.3准备试剂:按照仪器试剂位置设定,把上述每项的试剂准备好,放在相应的位置

9.3.4准备反应杯:打开仪器顶部反应杯储存槽,查看反应杯是否足够,需及时添加

9.3.5准备标本;将离心好的样本放在相应的样本架上(一个架子可放10个样本),准备好放在进样器上

9.3.6输入试验项目:按下主菜单上的,在试验项目键点击使-”

变为“○”,按“↑”或“↓”将需要测试标本如上操作选择;

9.3.7输入样本号:按下按顺序输入样本的序号或病人的病历号

9.3.8开始检测:待一切准备工作就绪,按下屏幕右上角,仪器开始检测…

9.3.9查看结果:返回主屏幕,检测的项目如果由“◎”变为“●”表明此试验已经完成,然后按下

储存结果)键,屏幕会换到结果显示界面,按下边第一个菜单查看凝集曲线、吸光度、结果等,检查是否有Error错误信息,有错误报警的标本需考虑重测

9.3.10关机前冲洗针:关机前需要洗针,然后按下

9.3.11关机:回到主屏幕下,切断仪器电源.

10.质量控制程序:.

10.1质控物准备

用1ml蒸馏水溶解一瓶Dade Control质控血浆,轻轻颠倒混匀约5秒,置于室温30分钟,用前摇匀即可,不要剧烈振摇.将未用完的质控血浆在室温保存2小时、2～8℃4小时、-20℃以下冰箱中可保存24小时

10.2上机检测

将质控标本加入样品杯,上机检测.具体操作详见CA1500血液凝固分析仪作业指导书

10.3质控规则

10.3.1质控图正常分布规律

各点应分布在均值的两侧,95.45%数据落在x±2s内,99.73%数据落在x±3s内.

10.3.2质控图失控规则

a)一个质控物的测定结果超过x±3s(13s规则)；

b) 一个质控物的测定结果连续2次超过x＋2s或x-2s(22s规则)

C) 一个质控物的测定结果连续2次测定其中1次超过x＋2s另1次超过x-2s(R4s规则)

d) 一个质控物的测定结果连续4次超过x+1s或x-1s(41s规则)

e)连续10次质控物结果都在均数的同一侧（10x规则）

f)连续5次测定结果渐增或渐减（5T规则）

10.4室内质控分析与失控处理

10.4.1质控结果分析

检测人员对质控结果进行分析,在发现质控数据违背质控规则后,通知组长,协助处理.组长分析该失控信号的真伪,并做出是否发出与测定质控品相关的那批病人标本检验报告的决定,必要时由检验科主任处理.检测人员填写失控报告.

10.4.2失控原因分析极其处理过程