溶血性贫血检查标准操作程序

SOP_09-3 溶血性贫血检查标准操作程序

一、目的：统一项目操作规程，严格检验质量标准，为临床提供及时、可靠的结果报告。 二、适用范围：溶血性贫血检验。 三、操作人员：检验科授权工作人员。 四、操作步骤：

1 红细胞渗透脆性试验：

1.1 原理：本试验是测定红细胞对不同浓度低渗盐水溶液的抵抗力。这种抵抗力与红细胞表

面积和体积的比值有密切关系。表面积大而体积小者对低渗盐水抵抗力较大(脆性减低)；反之，则抵抗力较小(脆性增加)。球形细胞表面积／体积比值减少，脆性显著增加。 1.2 试剂 171mmol ／L NaCl 溶液(10g ／L)：取经1OO ℃烘干的分析纯氯化钠1000g 置100ml 容

量瓶中，加适量双蒸馏水溶解后，再加双蒸馏水至刻度。 1.3 操作：

(1)．分别取1Og ／L NaCl 液和蒸馏水，按下表加入小试管中。

红细胞渗透脆性试验操作表

试管号 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12

NaCL(ml) 1.7 1.6 1.5 1.4 1.3 1.2 1.1 1.0 0.9 0.8 0.7 0.6 H 2O(ml) 0.8 0.9 1.0 1.1 1.2 1.3 1.4 1.5 1.6 1.7 1.8 1.9 浓度

g/l

6.8

6.4

6.0

5.6 5.2

4.8

4.4

4.0

3.6

3.2

2.8 2.4

mmol 116.3 109.4 102.6 95.8 88.9

82.1

75.2

68.4

61.6

54.7

47.9 41.0

(2)．将试管架带至患者面前，用配备6号针头的干燥灭菌注射器取静脉血1～1.5ml ，立即滴于各管中，每管1滴(贫血患者可加2滴)，轻轻摇匀，室温静置。 (3)．每次试验均应同时作正常对照。

1.4 结果判断：静置室温2h ，观察结果，从高浓度管开始观察，上层溶液开始出现透明红色

且管底有红细胞者为开始溶血管；溶液透明红色，管底完全无红细胞者为完全溶血管。 1.5 参考值：开始溶血：4.2～4.6g ／L(71.8～78.6mmol ／L)；

完全溶血：3.2～3.4g ／L(54.7～58.1mmol ／L)

患者与正常对照溶血管的NaCl 浓度相差0.4g ／L 具有诊断价值。 1.6 附注：

(1)．NaCl 经100℃干燥后可保存于干燥器中，称量要精确，用前要新鲜配制。 (2)．注射器和小试管必须清洁干燥。

(3)．本试验忌用抗凝血，如遇特殊情况，可用肝素抗凝。

(4)．在乳白色背景下观察、判断完全溶血管，必要时可离心后观察。

(5)．黄疸开始溶血管不易观察，严重贫血RBC太少，可用等渗盐水配成50%RBC悬液作试验。

1.7 临床意义：

(1)．渗透脆性增加：见于遗传性球形细胞性贫血，也可见于自身免疫性溶血性贫血伴球形

红细胞增多者。此类患者开始溶血在5.2g／L，甚至可达到6.8g／L以上。

(2)．渗透脆性减低：见于各型地中海贫血、Hb-C、D、E病、缺铁性贫血、脾切除术后、阻

塞性黄疸等。

2 热溶血试验：

2.1 原理：本试验是利用患者的红细胞在其自身的血清(含补体)中，于37℃孵育后，由于葡

萄糖分解产酸使血清酸化，从而导致溶血的发生。

2.2 操作：以无菌干燥注射器取静脉血2ml，取下针头，缓缓地沿管壁注入消毒小试管中，避

免产生气泡，加少许消毒石蜡油覆盖，置37℃孵育箱保温24h，取出离心沉淀。

2.3 结果判断：观察上清液颜色，如出现溶血为阳性。正常人为阴性。

2.4 附注：注射器要干燥，试管要清洁，操作过程要避免发生溶血，否则会导致假阳性。置

孵育箱24小时后，如血块未回缩，用一小玻璃棒沿管壁轻轻分离之，然后离心观察结果。

2.5 临床意义：PNH患者本试验为阳性。正常人无溶血发生，其他溶血性贫血患者有程度不同

的轻度溶血。

3 冷溶血试验：

3.1 原理：阵发性冷性血红蛋白尿症(PCH)是一种自身免疫性溶血综合征，患者体内产生一种

冷反应性抗体(D-L抗体)。这种抗体是一种IgG，在37℃下与红细胞不能牢固结合。当温度低至20℃以下时，如有补体存在，D—L抗体便能结合于红细胞表面。当温度再增高至37℃时，由于一系列补体参与反应，使红细胞膜上形成空洞，发生溶血。

3.2 试剂(补体制备)：抽取豚鼠心脏血液2～4m1，分离其血清，保存于冰箱，临用时以生理

盐水作1：10稀释。

3.3 操作：

(1)．取患者及同型或0型正常人静脉血各8ml，以玻璃珠去纤维蛋白的方法分别制备血清与

红细胞悬液。或取其中6ml血不予抗凝，分离血清，余下的2m1抗凝，以分离红细胞。

(2)．用生理盐水洗涤红细胞三次，最后制成50%红细胞悬液。

(3)．按表滴加各液，经培育后离心1 000r／min，5min观察溶血现象。

冷溶血试验操作表

管号血清O.5ml RBC悬液O.05ml 补体(m1) 孵育温度、时间阳性结果

1 患者患者0.05 2℃ 30min 溶血

2 患者正常人0.05 2℃ 30min 溶血

3 正常人正常人0.05 2℃ 30min 不溶血

4 患者灭能血清[注]患者0.0

5 37℃ 2h 不溶血

5 正常人患者0.05 37℃ 2h 不溶血

6 患者患者O.05*37℃ 2h 不溶血

7 患者患者O.05*2℃ 30min 不溶血

8 患者正常人O.05*2℃ 30min 不溶血

3.4 结果判断：若第1、第2管溶血，其余管不溶血为阳性。

3.5 附注：操作中第1、第2管最好在20℃以下进行操作。

注：患者血清先置56℃灭能30min。*：生理盐水

4 变性珠蛋白小体(Heinz小体)检查：

4.1 原理：变性珠蛋白小体实际上是一种变性血红蛋白颗粒，一般附着在细胞膜上，故又称

血红蛋白包涵体，多发生于敏感个体服用药物或接触化学物质后，这些药物可导致Hb变性。此种包涵体也可以见于不稳定Hb病患者，故本试验对G一6一PD缺乏症及不稳定Hb病的诊断有价值。变性珠蛋白小体与某些碱性染料如耐尔蓝接触时，即被染成紫色或蓝黑色小点。

4.2 试剂：(1)．5g／L耐尔蓝乙醇溶液；(2)．10g／L结晶紫生理盐水液

4.3 操作：

（1）．耐尔蓝法：

①置5g／L耐尔蓝乙醇液1滴于玻片一端，待干。

②取受检血液1滴置于干燥的染料玻片上，用另一玻片角轻轻搅匀。

③覆以盖玻片，静置5～10 min。

④油镜镜检，RBC呈黄绿色，变性珠蛋白染成蓝黑色小点。据颗粒及红细胞染色情况，

可分为微粒型、粗粒型及空粒型(RBC中Hb完全缺如，胞膜尚完整，边缘有多个粗大

或纤细不规则的颗粒)，系折光，圆形，大小不等，数目不一及分布不匀的小体。

⑤计数500～1000个红细胞，报告Heinz小体阳性红细胞的百分率。

(2)．结晶紫法：

①取结晶紫盐水溶液O.5ml，加末梢血2～3滴，混匀，放37℃水浴5min。

②取出1滴于载玻片上，加盖玻片后用油镜观察。