蛋白质层析方法与原理简介PPT课件

安徽智飞龙科马生物制药 2019/12/22 有限公司
凝胶过滤
离子交换
O SO O
疏水相互作用 反相色谱
亲和色谱
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凝胶层析（分子筛）
凝胶层析
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凝胶是惰性载体，不带电荷， 吸附力弱，操作条件比较温和。 具有三维空间的多孔网状结构的 物质，每个颗粒的细微结构及筛 孔的直径均匀一致，小分子可以 进入凝胶网孔，而大分子则排阻 于颗粒之外。
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亲和层析
亲和层析
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亲和层析是一种通过生物分子之 间的特异性的相互作用来分离物质的 层析方法。
如酶与底物的识别结合、受体与 配体的识别结合、抗体与抗原的识别 结合，这种结合既是特异的，又是可 逆的， 改变条件可以使这种结合解 除。生物分子间的这种结合能力称为 亲和力。
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纯化蛋白质的方法
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盐析法、等电点沉淀和有机溶剂沉淀等 透析、超滤和密度梯度离心等
层析法
其中层析法是基因工程下游的核心， 它是最有效和最重要的蛋白质纯化工具。
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色谱法（层析法）
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色谱法的分类
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蛋白质纯化 柱层析的方法与原理
作者 朱银猛
安徽智飞龙科马生物制 2019/12/22 药有限公司
蛋白质
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蛋白质（protein）是生命的物质基础， 是有机大分子，是构成细胞的基本有机物， 是生命活动的主要承担者。没有蛋白质就没 有生命。氨基酸是蛋白质的基本组成单位。 它是与生命及与各种形式的生命活动紧密联 系在一起的物质。机体中的每一个细胞和所 有重要组成部分都有蛋白质参与。
流动相
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离子取代顺序
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pH值对蛋白质所带电荷的影响
COOH
R NH3+
Low pH Positive charge
Hydrogen gained
COபைடு நூலகம்R NH+3
High pH Negative charge
流动相
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离子交换层析
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平衡离子是结合于配基上的相反离 子，它能与溶液中其它的离子基团发 生可逆的交换反应。如Na+和Cl-。
阳离子交换剂：平衡离子带正电的 离子交换剂，能与带正电的离子基团 发生交换作用。
阴离子交换剂：平衡离子带负电的 离子交换剂，与带负电的离子基团发 生交换作用。
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离子交换的基本步骤
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再生
-+-----+---+---+-------++----
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疏水作用层析
疏水作用层析
疏水作用层析（HIC）是根据 分子表面疏水性差别来分离蛋白质 和多肽等生物大分子的一种较为常 用的方法。
Hydrogen lost
COO -
R NH2
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阴离子交换分离过程
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2019/12/22
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离子交换的基本步骤
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平衡
阴离子交换介质
疏水性弱的物质，在较高离 子强度的溶液时被洗脱下来，当离 子强度降低时，疏水性强的物质才 随后被洗脱下来。
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水分子
表面暴露的 疏水集团
溶质分子 流体中的水分子 DG = DH - T DS
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谢谢
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2019/12/22
原理：空间排阻
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离子交换层析
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离子交换层析
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离子交换层析技术是以离子交 换纤维素或以离子交换葡聚糖凝胶 为固定相，以蛋白质等样品为移动 相，分离和提纯蛋白质、核酸、酶、 激素和多糖等的一项技术。 原理：利用物质的电荷和层析载体 的电荷间的相互作用，进而达到分 离纯化的目的。
+-
+- ++-++
-
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离子交换的基本步骤
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上样和清洗
--- --
-
+ + -+ -- +
+ +
-
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离子交换的基本步骤
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洗脱
-
- -- -- -
-- -- -
-
+ + +-
+-+
+ -
+--- ++---+++- -