培养基的认识及选择
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培养基的认识及选择
培养基的成分
碳源和能源 无糖 氮源 氮源和碳源
• 营养物质：水、蛋白胨、肉浸 液、牛肉膏、糖醇类、血液、 无机盐、鸡蛋、动物血清、生 长因子（Vit、aa、嘌呤、嘧啶 等）。
氯化钠：维持酶的活性、调节菌体内外渗透压 磷酸盐：缓冲作用
培养基的成分
• 凝固物质：最常用的为琼脂(agar)，它是从 石花菜中提出来的一种半乳糖胶，100℃溶 解，40℃凝固，可利用琼脂来改变培养基 的物理性状(固体或半固体)，它是理想的固 体培养基的赋形剂，其本身不被细菌分解 利用，也无营养作用。
EMB平板
• • • • 弱选择性培养基 抑制革兰阳性菌 伊红和美蓝两种染料一酸一碱作为指示剂 细菌分解乳糖时产酸，使伊红美蓝结合成 紫红色化合物，有时呈金属光泽 • 不分解乳糖的细菌菌落为无色或灰白色 • 有的细菌产碱过多而出现蓝色菌落
TCBS平板
硫代硫酸盐柠檬酸盐胆盐蔗糖琼脂培养基
• 霍乱弧菌和副溶血弧菌分离培养 • 碱性琼脂 • 胆酸钠、牛胆粉、硫代硫酸钠和柠檬酸钠及较高 的pH可抑制革兰氏阳性菌和大肠菌群 • 氯化钠可刺激弧菌的生长 • 以麝香草酚兰和溴麝香草酚兰为指示剂 • 霍乱弧菌分解蔗糖产酸，菌落呈黄色半透明，圆 形扁平，带有黏性不易挑起 • 副溶血弧菌不分解蔗糖，菌落呈蓝绿色半透明， 大而扁平，带有黏性
培养基的选择
• 大部分细菌培养标本：血平板、巧克力平板
• 大便培养标本：EMB、SS、MAC、TCBS • 酵母样真菌培养标本：念珠菌显色平板
• 淋球菌培养标本：淋球菌平板
• 中段尿标本：血平板
培养基接种划线
• 方法：平板分区划线
沾取标本均匀涂布于平板培养 基边缘一小部分（为一区）； 然后将接种环火焰灭菌，待冷 后只通过一区2 ～3 次后连续划 线（为二区）；依次可供划线 3 ～5 区，火焰灭菌接种环。
• 目的：分离出单个菌 落
培养基接种划线
• 方法：穿刺接种
用经灭菌后的接种针挑取菌落或培养物，由培养基中央刺到距管底约 0．3 ～0．5cm 处，然后沿穿刺线退出接种针。
• 目的：用于微量生化管接种
培养基接种划线
• 方法：液体接种
用左手持培养基与菌种管，右手持接种环，其小指与无名指及无名指 与中指之间各拔取并夹持一个棉塞，火焰灭菌试管口， 以灭菌冷却后 的接种环沾取菌种，倾斜液体培养基管，先在管壁与液面交界处研磨 （研磨处以试管直立后液体能淹没接种物为主），然后再在液体中摆 动2 ～3 次接种环，塞好棉塞后轻轻混合即可。
血琼脂平板
• 适用于各类细菌生长 • 观察细菌菌落形态 • 判断溶血情况
α-溶血环：菌落周围呈绿 色，红细胞不完全溶解 β-溶血环：菌落周围的培 养基内红细胞完全被破坏 γ溶血：不溶血
巧克力平板
• 主要用于嗜血杆菌的分离：含有Ⅴ、Ⅹ因子
• 添加万古霉素抑制革兰阳性菌，但有时α-溶 血的链球菌会形成草绿色溶血环 • 大多数革兰阴性菌都会生长
M-H平板
水解酪蛋白琼脂
• 用于细菌药敏试验琼脂扩散法（K-B法）
• 胸腺嘧啶核苷酸含量低，不干扰磺胺类药 物测定
• 控制钙、镁离子浓度，不干扰氨基糖苷类 药物测定
M-H血平板
• M-H琼脂中加入5%脱纤维羊血
• 用于链球菌药敏试验
转运培养基
• 阿米斯转运培养基：支原体培养 • 拭子 • Cary-Blair运送培养基：弯曲菌、沙门菌、 志贺菌的标本采集和保存 • 缓冲甘油盐水保存液：粪便标本保存 • 改良Cary-Blair运送培养基：厌氧菌标本
培养基的成分
• 抑菌剂和指示剂： 不是细菌生长繁殖的必需物质，是制备 细菌的选择、鉴别培养基和判断结果的需 要。 常用的指示剂有：酚红、中性红、甲基 红、溴甲酚紫、溴麝香草酚蓝、中国兰等 酸碱指示剂，美兰为常用的氧化还原指示 剂。 常用的抑菌剂有：胆盐、煌绿、亚硫酸 钠、亚硒酸钠及一些染料和某些抗生素等。
• 目的：细菌增菌及保存
培养基接种划线
• 方法：涂布接种
用无菌棉签浸满菌液，在试管壁上挤去少量菌液后均匀涂布于平板上。
ห้องสมุดไป่ตู้
• 目的：用于纸片扩散法药敏试验、院感监 测
培养基接种划线
• 斜面接种 • 倾注平板 • 定量接种
培养基的分类
按 物 理 性 状
液体培养基：牛肉汤(牛肉浸液+1%蛋白胨 +0.5%NaCl pH7.4) 半固体培养基：液体培养基+0.2~0.5% agar
固体培养基：液体营养物+ 2% agar
培养基的分类
基础培养基：是其他培养基的基础，如普通肉
汤、 普通琼脂平板、斜面、高层
按 用 途
营养培养基：BAP、罗—琴培养基、吕氏血清斜面
选择培养基：SS平板、BS平板、Mac平板等
鉴别培养基：糖发酵管、MIU、KIA、TSI等
特殊培养基：厌氧培养基、高渗培养基等
常用的培养基
• • • • • • • • • • • 血琼脂平板 巧克力平板 淋球菌平板 念珠菌显色平板 MAC平板 SS平板 EMB平板 TCBS平板 M-H平板 M-H血平板 转运培养基
淋球菌平板
• 用于分离淋病奈瑟菌
• 加入万古霉素和多粘菌素B溶液 • 抑制革兰阳性菌和真菌生长
念珠菌显色平板
• 分离酵母样真菌 • 鉴别培养基：不同的真菌显示出不同颜色 的菌落
MAC平板
• 选择性培养基：供肠道致病菌分离培养 非发酵菌鉴别
• 抑制剂——胆盐：抑制革兰阳性菌 • 指示剂——中性红：区分分解乳糖和不分解乳糖 的细菌 • 肠道致病菌不分解乳糖，非致病菌分解乳糖
SS平板
• 强选择性培养基：用于志贺菌和沙门菌的分离 • 抑制剂——枸橼酸钠、胆盐、硫代硫酸钠协同 作用与煌绿共同抑制肠道非病原菌及大部分大 肠埃希菌。其中胆盐还能抑制革兰阳性菌。 • 指示剂——中性红 • 沙门菌菌落特点：无色半透明，产H2S与培养 基内三价铁离子反应呈黑色中心。 • 志贺菌菌落特点：无色不透明或透明，边缘整 齐
培养基的成分
碳源和能源 无糖 氮源 氮源和碳源
• 营养物质：水、蛋白胨、肉浸 液、牛肉膏、糖醇类、血液、 无机盐、鸡蛋、动物血清、生 长因子（Vit、aa、嘌呤、嘧啶 等）。
氯化钠：维持酶的活性、调节菌体内外渗透压 磷酸盐：缓冲作用
培养基的成分
• 凝固物质：最常用的为琼脂(agar)，它是从 石花菜中提出来的一种半乳糖胶，100℃溶 解，40℃凝固，可利用琼脂来改变培养基 的物理性状(固体或半固体)，它是理想的固 体培养基的赋形剂，其本身不被细菌分解 利用，也无营养作用。
EMB平板
• • • • 弱选择性培养基 抑制革兰阳性菌 伊红和美蓝两种染料一酸一碱作为指示剂 细菌分解乳糖时产酸，使伊红美蓝结合成 紫红色化合物，有时呈金属光泽 • 不分解乳糖的细菌菌落为无色或灰白色 • 有的细菌产碱过多而出现蓝色菌落
TCBS平板
硫代硫酸盐柠檬酸盐胆盐蔗糖琼脂培养基
• 霍乱弧菌和副溶血弧菌分离培养 • 碱性琼脂 • 胆酸钠、牛胆粉、硫代硫酸钠和柠檬酸钠及较高 的pH可抑制革兰氏阳性菌和大肠菌群 • 氯化钠可刺激弧菌的生长 • 以麝香草酚兰和溴麝香草酚兰为指示剂 • 霍乱弧菌分解蔗糖产酸，菌落呈黄色半透明，圆 形扁平，带有黏性不易挑起 • 副溶血弧菌不分解蔗糖，菌落呈蓝绿色半透明， 大而扁平，带有黏性
培养基的选择
• 大部分细菌培养标本：血平板、巧克力平板
• 大便培养标本：EMB、SS、MAC、TCBS • 酵母样真菌培养标本：念珠菌显色平板
• 淋球菌培养标本：淋球菌平板
• 中段尿标本：血平板
培养基接种划线
• 方法：平板分区划线
沾取标本均匀涂布于平板培养 基边缘一小部分（为一区）； 然后将接种环火焰灭菌，待冷 后只通过一区2 ～3 次后连续划 线（为二区）；依次可供划线 3 ～5 区，火焰灭菌接种环。
• 目的：分离出单个菌 落
培养基接种划线
• 方法：穿刺接种
用经灭菌后的接种针挑取菌落或培养物，由培养基中央刺到距管底约 0．3 ～0．5cm 处，然后沿穿刺线退出接种针。
• 目的：用于微量生化管接种
培养基接种划线
• 方法：液体接种
用左手持培养基与菌种管，右手持接种环，其小指与无名指及无名指 与中指之间各拔取并夹持一个棉塞，火焰灭菌试管口， 以灭菌冷却后 的接种环沾取菌种，倾斜液体培养基管，先在管壁与液面交界处研磨 （研磨处以试管直立后液体能淹没接种物为主），然后再在液体中摆 动2 ～3 次接种环，塞好棉塞后轻轻混合即可。
血琼脂平板
• 适用于各类细菌生长 • 观察细菌菌落形态 • 判断溶血情况
α-溶血环：菌落周围呈绿 色，红细胞不完全溶解 β-溶血环：菌落周围的培 养基内红细胞完全被破坏 γ溶血：不溶血
巧克力平板
• 主要用于嗜血杆菌的分离：含有Ⅴ、Ⅹ因子
• 添加万古霉素抑制革兰阳性菌，但有时α-溶 血的链球菌会形成草绿色溶血环 • 大多数革兰阴性菌都会生长
M-H平板
水解酪蛋白琼脂
• 用于细菌药敏试验琼脂扩散法（K-B法）
• 胸腺嘧啶核苷酸含量低，不干扰磺胺类药 物测定
• 控制钙、镁离子浓度，不干扰氨基糖苷类 药物测定
M-H血平板
• M-H琼脂中加入5%脱纤维羊血
• 用于链球菌药敏试验
转运培养基
• 阿米斯转运培养基：支原体培养 • 拭子 • Cary-Blair运送培养基：弯曲菌、沙门菌、 志贺菌的标本采集和保存 • 缓冲甘油盐水保存液：粪便标本保存 • 改良Cary-Blair运送培养基：厌氧菌标本
培养基的成分
• 抑菌剂和指示剂： 不是细菌生长繁殖的必需物质，是制备 细菌的选择、鉴别培养基和判断结果的需 要。 常用的指示剂有：酚红、中性红、甲基 红、溴甲酚紫、溴麝香草酚蓝、中国兰等 酸碱指示剂，美兰为常用的氧化还原指示 剂。 常用的抑菌剂有：胆盐、煌绿、亚硫酸 钠、亚硒酸钠及一些染料和某些抗生素等。
• 目的：细菌增菌及保存
培养基接种划线
• 方法：涂布接种
用无菌棉签浸满菌液，在试管壁上挤去少量菌液后均匀涂布于平板上。
ห้องสมุดไป่ตู้
• 目的：用于纸片扩散法药敏试验、院感监 测
培养基接种划线
• 斜面接种 • 倾注平板 • 定量接种
培养基的分类
按 物 理 性 状
液体培养基：牛肉汤(牛肉浸液+1%蛋白胨 +0.5%NaCl pH7.4) 半固体培养基：液体培养基+0.2~0.5% agar
固体培养基：液体营养物+ 2% agar
培养基的分类
基础培养基：是其他培养基的基础，如普通肉
汤、 普通琼脂平板、斜面、高层
按 用 途
营养培养基：BAP、罗—琴培养基、吕氏血清斜面
选择培养基：SS平板、BS平板、Mac平板等
鉴别培养基：糖发酵管、MIU、KIA、TSI等
特殊培养基：厌氧培养基、高渗培养基等
常用的培养基
• • • • • • • • • • • 血琼脂平板 巧克力平板 淋球菌平板 念珠菌显色平板 MAC平板 SS平板 EMB平板 TCBS平板 M-H平板 M-H血平板 转运培养基
淋球菌平板
• 用于分离淋病奈瑟菌
• 加入万古霉素和多粘菌素B溶液 • 抑制革兰阳性菌和真菌生长
念珠菌显色平板
• 分离酵母样真菌 • 鉴别培养基：不同的真菌显示出不同颜色 的菌落
MAC平板
• 选择性培养基：供肠道致病菌分离培养 非发酵菌鉴别
• 抑制剂——胆盐：抑制革兰阳性菌 • 指示剂——中性红：区分分解乳糖和不分解乳糖 的细菌 • 肠道致病菌不分解乳糖，非致病菌分解乳糖
SS平板
• 强选择性培养基：用于志贺菌和沙门菌的分离 • 抑制剂——枸橼酸钠、胆盐、硫代硫酸钠协同 作用与煌绿共同抑制肠道非病原菌及大部分大 肠埃希菌。其中胆盐还能抑制革兰阳性菌。 • 指示剂——中性红 • 沙门菌菌落特点：无色半透明，产H2S与培养 基内三价铁离子反应呈黑色中心。 • 志贺菌菌落特点：无色不透明或透明，边缘整 齐