共表达猪瘟病毒E0、E2基因重组鸡痘病毒的遗传稳定性.

共表达猪瘟病毒E0、E2基因重组鸡痘病毒的遗传稳定性

2010-10-03

[目的]研究共表达猪瘟病毒E0、E2基因的重组鸡痘病毒rFPV-E0-E2的`遗传稳定性.[方法] 将重组鸡痘病毒rFPV-E0-E2在鸡胚成纤维细胞上连续传20代,取第5、10、15和20代重组病毒进行以下检测:用蓝斑试验鉴定各代重组病毒纯度;用PCR方法扩增猪瘟病毒E0、E2基因,进行基因序列分析;用间接免疫荧光实验检测各代重组病毒中猪瘟病毒E0、E2基因的表达.[结果] 各代次重组病毒产生的蚀斑均为蓝色,表明病毒纯度稳定.从各代重组病毒DNA中均扩增出了约700 bp和1 200 bp的条带,分别与E0和E2基因片段长度一致,基因序列分析发现,第5、10、15代重组鸡痘病毒中的E0、E2基因序列与原始转移载体序列完全一致,第20代重组病毒插入基因有2处发生了点突变 (即E0基因139位A→G,E2基因413位A→G),其编码的氨基酸也发生了相应变化(即E0蛋白47位Thr→Ala,E2蛋白138位Glu→Gly),但蛋白抗原表位未发生明显的变化.间接免疫荧光实验检测到各代重组病毒均能正常表达目的蛋白.[结论] 重组鸡痘病毒rFPV-E0-E2在鸡胚成纤维细胞上传20代以内,具有良好的遗传稳定性,插入的猪瘟病毒E0、E2基因能够正确稳定表达.

作者：张浩郭抗抗张彦明王养会尹宝英孙裴王文秀何雷作者单位：西北农林科技大学,动物医学院,陕西,杨凌,712100 刊名：西北农林科技大学学报(自然科学版) ISTIC PKU英文刊名：JOURNAL OF NORTHWEST A&F UNIVERSITY(NATURAL SCIENCE EDITION) 年，卷(期)：2008 36(8) 分类号：S852.65+1 关键词：猪瘟病毒重组鸡痘病毒遗传稳定性