霉菌检测

化妆品中霉菌和酵母菌的检验2014年8月26日下载(2008-05-22 15:45:21)

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杂谈

化妆品中霉菌和酵母菌的检验

科学2006-3-5 23:47

化妆品中霉菌和酵母菌的检验

1 概述

1.1 化妆品真菌污染的现状

真菌在自然界中分布甚广,化妆品的酸碱度,温度湿度和营养适合其生长繁殖。目前国内外有资料表明，化妆品中真菌污染是相当严重的。Wilson对眉目化妆品进行微生物检查，结果真菌污染率为12%，从睫毛油里检出茄病镰刀菌，密封的眼用化妆品染菌率为1.5%,在使用过程中急剧增至60%。所染真菌中曲霉，念珠菌居首。我国部分省市化妆品中霉菌染菌率也不低，一般为7～62.7%。有资料报道在100份化妆品中分离到真菌15个（属14种）。优势菌为酵母属，其次为青霉属和曲子霉属等。Kuehne等人对233名妇女眉笔眼影霉菌检查，结果有115人（份）检出不同真菌19属（种），计有草酸青霉、黄曲霉、交链孢霉和致病的白色念珠菌和新型隐球菌等。

1.2 化妆品的真菌病

1.2.1 念珠菌病：由白色念珠菌（白色假丝酵母）引起的急性、亚急性或慢性真菌病，可侵犯皮肤、粘膜或指甲，也可侵犯内脏或血行播散引起鹅口疮、唇炎、甲沟炎、泛发性皮肤念珠病、念珠性肉芽肿、支气管及肺念珠病、心内膜炎及脑炎和血行播散性念珠菌病等。

1.2.2 青霉病：由少数青霉菌引起呼吸道及肺部感染，使皮肤暴露部位出现湿疹样改变，还可致敏引起鼻炎及哮喘。

1.2.3 新型隐球菌病:由新型隐球酵母及其变种引起的一种深部真菌病,可侵犯肺、骨骼、皮肤淋巴结及内胖器官，主要侵犯中枢神经系统，引起隐球菌性脑膜炎。

1.2.4 曲霉病:由曲霉菌引起,可侵犯皮肤,指甲、外耳道、鼻窦、眼、气管、肺、心膜、子官、脑膜等器官形成炎性肉芽肿。

1.2.5 眼真菌病:真菌性角膜炎可由曲霉菌、镰刀菌、白色念珠菌等真菌引起角膜溃疡，见表3-2-1。

作者

年份

倒数

菌种及株数

Fazakas

1955

20

烟曲霉5，黄曲霉2，放线菌4，毛霉2，其他7

Gingerich

1963

125

曲霉16，白色念珠菌17，镰刀菌12，其他80

Palack

1971

33

镰刀菌15，头孢霉11，念珠菌2，弯孢霉21，曲霉2，其他2

渡道郁绪

1977

59

曲霉21，头孢霉16，白色念珠菌14，其他8

齐绪哲、谭玉章

1957～1965

13

白色念珠菌7，曲霉3，镰刀菌1，酵母菌1，头孢霉1

范德章

1978

204

曲霉123，镰刀菌43，其他39

1.2.6 真菌毒素中毒：引起皮肤光过敏性皮炎、湿疹及皮肤变态，严重者导致机体中毒。

1.3 化妆品霉菌检验的意义

1.3.1 霉菌广泛存在于自然界中，化妆品从原料到成品生产过程各环节都可能存在霉菌污染源。

1.3.2 化妆品是霉菌生长繁殖的良好培养基。霉菌适宜在中性和微酸性的条件下生长，而一般化妆品的pH在4～7之间。霉菌、酵母菌生长最适温度为20～30℃，而化妆品储藏条件是在此温度范围内。化妆品中皆具备霉菌生长需要的营养，有的还含有人参、蜂蜜、蛇油等营养丰富的物品。

1.3.3 霉菌可产生毒素，故化妆品除进行霉菌计数及分类鉴定外，必要时还应开展霉菌毒素测定。

1.4 几个概念

1.4.1 真菌及其在生物学上的地位

真菌是具有细胞壁、无根茎叶、不含叶绿素，以吸收方式吸取营养，具真核细胞的一类微生物。根据目前国际上广泛应用的Ainsworth分类系统及陈世骧等（1979）提出三个总界，下设五个界的分类系统，真菌在生物学上的地位如下：

1.4.2 霉菌

霉菌是指真菌中不形成子实体的丝状菌类。霉菌不是分类学上的名词，是一种俗称。霉菌常寄生于粮食、食品、化妆品等物品上，使其发霉变质。有的霉菌产毒，危害人体健康；有的霉菌应用于工业，造福人类。

1.4.3 霉菌的形态

一般霉菌鉴定主要靠形态分类。不同培养条件下生长的同一种霉菌形态也有差异，因此各种霉菌均有其标准培养基，如青霉和曲霉用察氏培养基、镰刀菌用马铃薯培养基、酵母菌用麦芽汁等。

霉菌的形态主要分菌丝和孢子。

在显微镜下观察霉菌的菌丝呈管状，直径2～10μm。有的霉菌（如根霉和毛霉）菌丝无隔膜，为多核细胞。大多数霉菌如青霉和曲霉菌丝有隔膜。有些霉菌的菌丝密集成团、坚硕称菌核。有些霉菌的菌丝特化成厚的壁呈球形的壳细胞。菌丝又有一定程度的分化。长在培养基内的称营养菌丝；在培养基上生出的称气生菌丝；产生孢子的气生菌丝又称繁殖菌丝，菌丝能产生不同色素，呈不同颜色。这些都是分类鉴定的依据。

霉菌的孢子是繁殖器管，孢子分为无性生殖孢子和有性生殖孢子。无性生殖孢子有叶状孢子、芽生孢子（酵母菌、念珠菌）；厚膜孢子（镰刀菌）；节孢子（白地霉）。分生孢子和孢子囊孢子均为无性生殖孢子器官。这些不同形态和不同着生状态的生殖器官是霉菌分类鉴定的重要依据。

霉菌的有性生殖是经两个细胞交配后产生的有性了解子。如卵孢子（水霉）、接合孢子（毛霉和根霉）、子囊孢子（醇母）。

2 霉菌及酵母菌总数的测定方法

2.1 霉菌数测定

霉菌数的测定是指化妆品检样在一定条件下培养后，lg或lml化妆品中所污染的活霉菌数量。藉此测定，判明化妆品被霉菌污染的程度及其一般卫生状况。

2.1.1 培养基和试剂

2.1.1.1 稀释液

成分：氯化钠 8.5g

吐温-80 7g

蒸馏水 1000ml

卵磷脂 1g

制法：先将卵磷脂用少量蒸馏水溶解，然后与氯化钠，吐温80加到蒸馏水中，混匀、溶解、分装、高压灭菌121℃20min。

2.1.1.2 虎红（孟加拉红）培养基（1）

成分：蛋白胨 5g

葡萄糖 10g

磷酸二氢钾 1g

硫酸镁（含7H20） 0.5g

琼脂 20g

1／30000虎红水溶液 100ml

蒸馏水 1000ml

制法：将上述各成分（除虎红外）加入蒸馏水中溶解后，再加入虎红溶液，分装后，高压灭菌121℃20min。

2.1.2 操作步骤（2）

似无菌操作称取检样10g（或10m1）加到90ml稀释液中，充分振荡，使之溶解并混匀，即为1:10稀释液。

用灭菌吸管吸取1m1 1:10稀释液，沿管壁注入装有9ml灭菌稀释液的试管中，另取1支lml 灭菌吸管反复吸吹，使之混匀，即为1:10稀释液，同法再作1:1000稀释液。

取1:10，1:100，1:1000的稀释液各1ml分别注入灭菌平皿内，每个稀释度各用2～3个平