结核病实验室诊断技术PPT课件
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探针杂交、熔解曲线、测序、基因芯片等
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免疫学方法
一 免疫层析法 原理：检测结核分枝杆菌分泌的抗原MPT-64 优点：快速（几分钟）、操做简单，成本低，对
阳性样本检出率较高 缺点： 只能鉴定结核分枝杆菌，只能检测固体
或液体培养基中的阳性标本，不能直接检测临 床标本
14
免疫学方法
二 结核抗体检测（IgG）
4
我国结核病概况
全球结核病第三高负担国家，结核病疫情表现有“六多” 。
感染人数多——5.5亿人感染过结核菌，约占全国人口
的45％，高于全球平均水平。 患病人数多——活动性肺结核、传染性肺结核患病率
分别为367/10万和122/10万， 新发患者多——全国每年新发活动性肺结核患者145
万， 其中传染性 肺结核患者65万。 死亡人数多——全国每年约有13万人死于结核病。 农村患者多——全国约有80％的结核病人集中在农村，
免疫斑点渗滤试验(DIGFA，金标法)，用H37Rv PPD-
IgG作为抗原，产生与LAM-IgG同样结果，国产、价格较廉，
优点简便、快速 3-15分钟 缺点有一定的假阳性和假
灵敏 阳性率60-95%
阴性假阳性率15-90%
特异 特异性80-95%
假阴性率5-65%
应用面广 各部位结核
结果判断带有主观性
优点：判读简单快速，集菌与荧光 染色相结合 阳性率可达50%
缺点：假阳性率较高 保存时间短，不到4个月 需购置荧光显微镜，增加成本
10
细菌学检查-培养(固体培养)
常用培养基：改良罗氏培养基，370C 培养 培养周期：56天 结果观察 ：接种后第3第7天各观察一次，以后每周观察一
次菌落生长情况，发现有菌生长，立即行抗酸染色，第 8周若仍无生长，报告为阴性。 菌落形态：典型菌落为干燥、坚硬、表面呈颗粒状，乳酪 色或淡黄色，形似菜花样
主要在经济不发达的中西部地 区。 耐药患者多——全国结核病耐药率高达28％。
2030终止结核 我们任重而道远！
5
结核病病因
• 由结核分枝杆菌复合群引起的慢性传染病 • 结核分枝杆菌（M.tuberculosis） • 牛分枝杆菌（M.bovis） • 非洲分枝杆菌（M.africanum） • 卡内蒂分枝杆菌（M.canetti） • 田鼠分枝杆菌（M.nicroti）
免疫学方法、分子生物学方法，质谱技术等 免疫学检测方法 免疫层析法 结核抗体检测 结核菌素皮肤试验（TST） γ-干扰素释放试验（IGRAs） 分子生物学方法 第一类：结核分枝杆菌特异性的分子检测 实时荧光定量PCR检测DNA：IS6110、HSP65、rpoB等 半巢式全自动荧光定量PCR检测：Xpert MTB/RIF 环介导等温扩增 （LAMP） 实时荧光核酸恒温扩增检测技术（SAT） 交叉引物扩增技术（CPA） 线性探针技术 第二类 通用PCR＋扩增后分析
缺乏有效的质控手段
15
免疫学方法
三 结核多抗体检测（微矩阵蛋白芯片法）
பைடு நூலகம்
CFP10蛋白滤液10，结核分枝杆菌MTB特有抗原 ESAT-6早期分泌型抗原靶6KD抗原， MTB特有抗原 LAM脂阿拉伯甘露糖，其它分枝杆菌不具备或其含量甚低 38KDa蛋白结核菌和卡介苗均产生38KDa蛋白，前者浓度较高 16KDa蛋白存在于结核分枝杆菌复合群，MTB特异性诊断抗原
6
7
抗原MPT-64
耐多药 泛耐药
细菌学检查
• 结核病人的细菌学检查不8 仅是发现传染源的主 要途径和手段，也是结核病确诊和制订化疗方 案，考核疗效、评价治疗效果的可靠标准。
• 涂片法 抗酸染色 荧光染色 液基夹层杯
• 培养法 改良罗氏培养 液体培养（BD960)
9
细菌学检查-涂片法
抗酸染色
此PPT下载后可自行编辑修改
结核病实验室诊断技术
医者人之司命，如大将提兵，必谋定而后战。
开始啦！请将手机调成静音，如有疑问可以随时打断我！
3
结核病 — 全球的公共健康问题（2018报告）
全球范围内，结核病是导致死亡的十大原因之一，每年有数百万人患上结核病。2017年， HIV阴性人群中，结核病导致约157万人死亡;而且在HIV阳性人群中，也有30万人死于结核。 2017年，估计有1000万人新感染结核:中国估计有88.9万人新感染结核。
优点：简便、快速、价廉 可长期保存
缺点：敏感性低:5000-10000条菌/ml 涂阳检出率低于5%，专业机构涂阳 率可达30%
痰菌容易假阴性 病变是封闭或开放； 病变性质和其中能够排出的菌量和排出 时间间歇；结核分枝杆菌形态多样性； 特异性差：所有分枝杆菌均可着色 无法区别死菌与活菌：均为阳性
荧光染色
优点：可自动孵育，自动检测，自动报告阳性或阴性结果 MGIT系统平均报阳时间4-11天
液体培养与罗固体培养的优势 敏感性：提高10%阳性检出率 可进行后续的菌型鉴定和药敏实验 报告进间： 培养10天 VS 28-42天 药敏11天 VS 28gd
结核病治疗：指南第四版，世界卫生组织 2010
12
其他检测方法
优点：金标准，灵敏度略高于涂片法；可以鉴定死菌与活 菌；可进一步进行菌种鉴定和药敏试验.
缺点：诊断周期长，最快也需要6周。 有一定的污染率 需人工肉眼观察， 工作强度大
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细菌学检查-培养(液体培养)
自动化液体培养 代表机型 ：MGIT BD960全自动培养及药敏系统
BacT ALERT 3D培养系统
• 菌株是革兰氏阳性菌，很难被染色，有 些甚至不能被染色，细胞壁含60%脂质， 一般用萋尼（Ziehl-Neelsen）抗酸染色法
• 棒状，无运动能力，专性需氧 • 生长缓慢 • 每16-20小时分裂一代，需4-6周才能长成
菌落。 由于结核分枝杆菌的遗传特性决定其生长
周期长，致使常规细菌学检查方法存在着灵 敏度低、操作复杂，需时间较长和影响因素 较多，不易标准化等缺陷，使细菌学诊断发 展缓慢，无法充分满足临床诊断的需要。
总体而言，90%的结核患者是成年人(≥15岁);9%同时伴随HIV感染(其中有72%是在非洲); 三分之二的结核患者来自8个国家:印度(27%)、中国(9%)、印度尼西亚(8%)、菲律宾(6%)、 巴基斯坦(5%)、尼日利亚(4%)、孟加拉国(4%)和南非(3%)。全球病例中只有6%出现在欧洲 地区(3%)和美洲地区(3%)。
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免疫学方法
一 免疫层析法 原理：检测结核分枝杆菌分泌的抗原MPT-64 优点：快速（几分钟）、操做简单，成本低，对
阳性样本检出率较高 缺点： 只能鉴定结核分枝杆菌，只能检测固体
或液体培养基中的阳性标本，不能直接检测临 床标本
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免疫学方法
二 结核抗体检测（IgG）
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我国结核病概况
全球结核病第三高负担国家，结核病疫情表现有“六多” 。
感染人数多——5.5亿人感染过结核菌，约占全国人口
的45％，高于全球平均水平。 患病人数多——活动性肺结核、传染性肺结核患病率
分别为367/10万和122/10万， 新发患者多——全国每年新发活动性肺结核患者145
万， 其中传染性 肺结核患者65万。 死亡人数多——全国每年约有13万人死于结核病。 农村患者多——全国约有80％的结核病人集中在农村，
免疫斑点渗滤试验(DIGFA，金标法)，用H37Rv PPD-
IgG作为抗原，产生与LAM-IgG同样结果，国产、价格较廉，
优点简便、快速 3-15分钟 缺点有一定的假阳性和假
灵敏 阳性率60-95%
阴性假阳性率15-90%
特异 特异性80-95%
假阴性率5-65%
应用面广 各部位结核
结果判断带有主观性
优点：判读简单快速，集菌与荧光 染色相结合 阳性率可达50%
缺点：假阳性率较高 保存时间短，不到4个月 需购置荧光显微镜，增加成本
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细菌学检查-培养(固体培养)
常用培养基：改良罗氏培养基，370C 培养 培养周期：56天 结果观察 ：接种后第3第7天各观察一次，以后每周观察一
次菌落生长情况，发现有菌生长，立即行抗酸染色，第 8周若仍无生长，报告为阴性。 菌落形态：典型菌落为干燥、坚硬、表面呈颗粒状，乳酪 色或淡黄色，形似菜花样
主要在经济不发达的中西部地 区。 耐药患者多——全国结核病耐药率高达28％。
2030终止结核 我们任重而道远！
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结核病病因
• 由结核分枝杆菌复合群引起的慢性传染病 • 结核分枝杆菌（M.tuberculosis） • 牛分枝杆菌（M.bovis） • 非洲分枝杆菌（M.africanum） • 卡内蒂分枝杆菌（M.canetti） • 田鼠分枝杆菌（M.nicroti）
免疫学方法、分子生物学方法，质谱技术等 免疫学检测方法 免疫层析法 结核抗体检测 结核菌素皮肤试验（TST） γ-干扰素释放试验（IGRAs） 分子生物学方法 第一类：结核分枝杆菌特异性的分子检测 实时荧光定量PCR检测DNA：IS6110、HSP65、rpoB等 半巢式全自动荧光定量PCR检测：Xpert MTB/RIF 环介导等温扩增 （LAMP） 实时荧光核酸恒温扩增检测技术（SAT） 交叉引物扩增技术（CPA） 线性探针技术 第二类 通用PCR＋扩增后分析
缺乏有效的质控手段
15
免疫学方法
三 结核多抗体检测（微矩阵蛋白芯片法）
பைடு நூலகம்
CFP10蛋白滤液10，结核分枝杆菌MTB特有抗原 ESAT-6早期分泌型抗原靶6KD抗原， MTB特有抗原 LAM脂阿拉伯甘露糖，其它分枝杆菌不具备或其含量甚低 38KDa蛋白结核菌和卡介苗均产生38KDa蛋白，前者浓度较高 16KDa蛋白存在于结核分枝杆菌复合群，MTB特异性诊断抗原
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抗原MPT-64
耐多药 泛耐药
细菌学检查
• 结核病人的细菌学检查不8 仅是发现传染源的主 要途径和手段，也是结核病确诊和制订化疗方 案，考核疗效、评价治疗效果的可靠标准。
• 涂片法 抗酸染色 荧光染色 液基夹层杯
• 培养法 改良罗氏培养 液体培养（BD960)
9
细菌学检查-涂片法
抗酸染色
此PPT下载后可自行编辑修改
结核病实验室诊断技术
医者人之司命，如大将提兵，必谋定而后战。
开始啦！请将手机调成静音，如有疑问可以随时打断我！
3
结核病 — 全球的公共健康问题（2018报告）
全球范围内，结核病是导致死亡的十大原因之一，每年有数百万人患上结核病。2017年， HIV阴性人群中，结核病导致约157万人死亡;而且在HIV阳性人群中，也有30万人死于结核。 2017年，估计有1000万人新感染结核:中国估计有88.9万人新感染结核。
优点：简便、快速、价廉 可长期保存
缺点：敏感性低:5000-10000条菌/ml 涂阳检出率低于5%，专业机构涂阳 率可达30%
痰菌容易假阴性 病变是封闭或开放； 病变性质和其中能够排出的菌量和排出 时间间歇；结核分枝杆菌形态多样性； 特异性差：所有分枝杆菌均可着色 无法区别死菌与活菌：均为阳性
荧光染色
优点：可自动孵育，自动检测，自动报告阳性或阴性结果 MGIT系统平均报阳时间4-11天
液体培养与罗固体培养的优势 敏感性：提高10%阳性检出率 可进行后续的菌型鉴定和药敏实验 报告进间： 培养10天 VS 28-42天 药敏11天 VS 28gd
结核病治疗：指南第四版，世界卫生组织 2010
12
其他检测方法
优点：金标准，灵敏度略高于涂片法；可以鉴定死菌与活 菌；可进一步进行菌种鉴定和药敏试验.
缺点：诊断周期长，最快也需要6周。 有一定的污染率 需人工肉眼观察， 工作强度大
11
细菌学检查-培养(液体培养)
自动化液体培养 代表机型 ：MGIT BD960全自动培养及药敏系统
BacT ALERT 3D培养系统
• 菌株是革兰氏阳性菌，很难被染色，有 些甚至不能被染色，细胞壁含60%脂质， 一般用萋尼（Ziehl-Neelsen）抗酸染色法
• 棒状，无运动能力，专性需氧 • 生长缓慢 • 每16-20小时分裂一代，需4-6周才能长成
菌落。 由于结核分枝杆菌的遗传特性决定其生长
周期长，致使常规细菌学检查方法存在着灵 敏度低、操作复杂，需时间较长和影响因素 较多，不易标准化等缺陷，使细菌学诊断发 展缓慢，无法充分满足临床诊断的需要。
总体而言，90%的结核患者是成年人(≥15岁);9%同时伴随HIV感染(其中有72%是在非洲); 三分之二的结核患者来自8个国家:印度(27%)、中国(9%)、印度尼西亚(8%)、菲律宾(6%)、 巴基斯坦(5%)、尼日利亚(4%)、孟加拉国(4%)和南非(3%)。全球病例中只有6%出现在欧洲 地区(3%)和美洲地区(3%)。