第十九章 分支杆菌属

七、防治原则
1、防——接种卡介苗
（1月龄免疫，20天产生抗体，可维持1~1.5年）。
2、治——抗结核药, 联合用药。 链霉素,利福平, 环丝霉素等。 患者休息,增加营养,供给新鲜空气, 补充维生素A、C、D等。
结核分支杆菌
人 牛 ++++ + ++++ -
牛分支杆菌
++++ ++++ ++++ ++++
3. 动物试验：将上述经处理的供分 离培养用的病料接种于动物，皮 下或腹腔注射0.5ml，
禽分支杆菌可使鸡致病； 结核杆菌对豚鼠有较强的致病性， 皮下注射3～5周可引起明显病变； 牛分支杆菌对兔有致病性，接种后3 周至3个月死亡。
• 4．变态反应 采用PPD皮内注射法，按 我国《动物检疫操作规程》规定
禽分支杆菌
结核分支杆菌
2. 分离培养：将病料中加入6％ 硫酸或 4％ NaOH溶液处理15min后，经中和、离心， 取少许沉淀物接种在培养基斜面上，每份 病料接4～6管，管口封严，置37℃培养8 周，每周观察一次，培养阳性时，需进行 培养特性和生化特性鉴定。
常用的罗杰二氏培养基国外已商品化。 菌落呈干燥、不规则、坚硬表面呈粗糙的颗粒状 。
禽分支杆菌
+ ++++ ++++
致病性
家禽 豚鼠 家兔
染色 形态染色
革兰氏染色阳性；抗酸染色阳性（结合杆菌为红色，其他细菌为蓝色） 在陈旧培养基或干酪变性病变组织，菌体可见分支。 病灶组织中，菌形比较一致，单个，成双，间或成丛。无荚膜，无芽胞。 细长、正直或微弯杆菌， 长1.5~4um,宽0.2~0.6um 比结核分支杆菌 短而粗 具有多形性，可呈杆状、 球菌状、链球状。
禽分支杆菌
结核分支杆菌
禽分支杆菌
结核分支杆菌
肺结核 (TEM x48,185)
牛型结核杆菌
M. bovis BCG
（二）培养特性
1、专性需氧菌，对营养要求严格，在添 加特殊营养的培养基上才能生长，如 在含血清、鸡蛋、牛乳、马铃薯和甘 油（牛型菌除外）的培养基中易于生 长。最适pH：6.4～7.0，最适温度： 37℃～37.5℃，在30℃～34℃可生长； 禽分支杆菌可在42℃生长。
（七）微生物学诊断 1、显微镜检查：取患病动物结节及病变 与非病变交界处组织直接涂片，抗酸 染色后镜检，如发现红色成丛杆菌时， 可做出初步诊断。 结核杆菌，菌体细长，直或微弯。 牛型菌比人型菌粗而短， 禽型菌呈多形性。菌体呈单个散在 排列，少数成对、成丛。
结核杆菌（抗酸染色）
禽分支杆菌
（五） 变异性 • 该菌可发生多种变异现象，产生耐药 菌株的现象令人重视。 • 卡氏(Calmette)和介氏(Guerin)将牛分 支杆菌在培养基上经13年230次传代， 使有毒菌株→毒力减弱菌株，对人、 牛无致病性，成为现在广泛应用的卡 介苗
（六）免疫性
1、传染性免疫(带菌免疫)，所谓传
染性免疫，结核菌在体内消失或 死亡后，其免疫也终止。 2、以细胞免疫为主,与变态反应同 时存在。
较快
+ + 具有单独的抗原结构
抗原性 抵抗力
含大量类脂和蜡质成分，抵抗力较强，干痰中可存活6~8个月； 对湿热抵抗力弱(60℃30min)，对低温抵抗力强，射线可影响其活力（阳光直射4h可杀灭）。 一般消毒剂对其杀菌力不大，链霉素、环丝氨酸、异烟肼、对氨水杨酸、利福平为常用药。
二、副结核分支杆菌（Mycobacterinm paratubercalosis）(自学) • 本菌主要引起反刍兽的慢性消耗性传 染病。牛的主要临床症状是持续性腹 泻与进行性消瘦。 • 该菌与禽分支杆菌有较多的相似性， 变态反应也与禽分支杆菌明显交叉反 应，因此有人主张将本菌改名为禽分 支杆菌副结核亚种(M.avium subsp.paratuberculosis)。
第十九章 分支杆菌属
（Mycobacteriium）
一般特性
菌体内含大量类脂和蜡质 成分，能抵抗含酸酒精的 脱色作用，故称：抗酸菌
• 1、 G＋，平直或微弯的杆菌，有时分支， 呈丝状，抗酸染色，常用齐尼二氏(ZiehlNeelson)染色法染色，本属菌染成红色， 非抗酸菌呈蓝色。 • 2、需氧，营养要求特殊，生长大多缓慢 • 3、无鞭毛、无芽胞、无荚膜，不产生外毒 素或内毒素，其致病性与菌体成分有关； • 4、致病多为慢性 病变，常有肉芽肿；
（一）形态染色
1、结核分支杆菌为细长、直或微弯的杆 菌，单在、少数成丛，牛分支杆菌菌体 较短而粗，禽分支杆菌呈多形性。在陈 旧的培养基或干酪性病灶内的菌体可 见分支现象。 2、抗酸性染色（结核杆菌为红色，其他
细菌为蓝色）。
3、细胞壁组成：本菌的细胞壁不仅有肽 聚糖，还有特殊的糖脂。
糖脂包围在肽聚糖层的外面，致使革兰氏染 色不易着染，而抗酸染色为红色。 糖脂包括阿拉伯半乳甘露聚糖、阿拉伯半乳 糖脂复合物及分支菌酸等，糖脂的含量超过菌 体总量的10％，远远超过其他细菌类脂的含量。 糖脂成分有效地刺激哺乳动物的免疫系统， 分支杆菌因此被制成免疫佐剂得到普遍应用。
3、牛分支杆菌→牛致病ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ猪、绵羊、山 羊均可感染得病），人（尤其是儿童） 常因喝牛奶被传染→肠结核。 • 实验动物中豚鼠、兔有高度敏感性。 对仓鼠、小鼠有中等致病力，对家禽 无致病性。
• 禽分支杆菌→禽结核，包括家禽与野 禽，也可引起猪的局限性病灶。实验 动物中小鼠有一定的敏感性。 • 结核杆菌→人的结核病，灵长类动物、 犬及其他与人接触的动物均可感染， 对家畜的毒力较低。实验动物中以豚 鼠、仓鼠为最敏感；
牛颈部皮内注射0.1m1(10万IU／m1)72h 后局部炎症反应明显，皮肿胀厚度差 ≥4mm为阳性； 如局部炎症不明显，皮肿胀厚度差在2～ 4mm间，为疑似； 如无炎症反应，皮肤肿胀厚度差在2mm 以下，为阴性。 凡判为疑似反应牛，30d后需复检一次， 如仍为疑似，经30～45d再次复检，如仍 为疑似可判为阳性。
• 1、形态及染色 • 短杆菌G+，在病料或培养基上，常以 成丛排列。无芽胞，无运动性，无荚 膜，抗酸染色时为阳性（菌体呈红 色）。
2、培养特性 • 需氧、最适温度37.5℃，pH 6.8-7.2。 • 初代分离常需在培养基中加入草分支 杆菌抽提液才能生长。（改良小川氏 培养基）。 • 病料（病肠段及肠淋巴结）先用酸或 碱处理，中和后，再接种培养。 • 初代培养6~8→灰白色细小菌落。
• 6、免疫与治疗
• 国外无毒活菌苗给犊牛（4周龄前）皮下接 种，无特殊药物治疗，对症治疗：止泻剂 （症状好转）。
（三）抵抗力
1.强的方面: 抗干燥；抗酸、碱或染料；
抗一般化学试剂。 粘附在尘埃上保持传染性8～10d，在干 燥痰内可存活6～8个月。
2.弱的方面: 怕热、怕酒精、怕阳光。
直接日光照射数小时可被杀死，可用于 结核患者衣服、书籍等的消毒。
（四）致病性
1、致病过程：以细胞内寄生和形成局部 病灶为特点。 • 细菌主要通过呼吸道→机体肺泡→巨 噬细胞吞噬→不被消化降解，相反在 其内繁殖→病灶→干酪样坏死→坏死 灶被吞噬细胞、T细胞与B细胞等包围， 形成结核结节。
• 3、抵抗力
• • • •
与结核菌大致相同。 4、致病性 反刍动物有易感性，一般不感染人。 胞内生长菌，在机体内首先产生细胞 免疫，然后出现体液免疫。细胞免疫 随病情进展而降低，体液免疫随病情 发展而增高。
5、微生物学诊断 • （1）显微镜检查 患持续性下痢和进 行性消瘦的病牛可多次采其粪便或直 肠刮取物，涂片、抗酸染色，如发现 红色成丛的两端钝圆的中小杆菌，即 可确诊。但如结果为阴性，需进行分 离培养。
• 本属菌分布广泛，许多是人和多种动 物的病原菌。 • 对动物有致病性的主要是：主要有： 结核分支杆菌（M.tuberculosis） 牛分支杆菌（M.bovis） 禽分支杆菌（M.avium） 副结核分支杆菌（Mycobacterinm paratubercalosis）
• 一、结核分支杆菌、牛分支杆菌、 禽分支杆菌 • 许多特性相近，一并介绍
专性需氧，营养要求严格，最适pH6.5~6.8，最适温度37~37.5℃，在含有鸡蛋、血清、牛乳 、马铃薯和甘油（牛型菌除外）易于生长。1~2周开始生长，3~4周才能旺盛发育。
培 养 特 性
生长速度
42℃发育 硝酸盐还原 尿素酶 烟酸形成性 甘油促进生长
居中
+ + + + 具有相同的抗原性
最慢
+ -
• （2）分离培养 • 生前→取粪便或直肠刮取物，死后→取病 变肠段或肠淋巴结→用酸或碱处理并中和 →固体培养基→ 37 ℃培养5～7周→发现有 菌落生长时进行抗酸染色、镜检。 • 作粪便检应注意：副结核杆菌的排出是周 期性的，（经不同间隔时取粪样作几次检 查，这样可以提高检出率。
• 3．变态反应 提纯的副结核菌素或禽 结核菌素(PPD) →皮内注射， →观察 注射部位炎症反应及测定皮厚差。 • 能检出大部分隐性病畜。副结核菌素 检出率为94％，禽结核菌素为80％左 右。隐性感染病牛无临床症状，有30 ％～50％是排菌者。 • 临床症状重剧的病牛，变态反应可能 消失，在检查时要注意。
• 结核菌素(tuberculin)——结核杆菌的蛋白 质组分之一，结核菌素进行皮内注射或滴 入眼结膜囊，可判定机体对结核杆菌是否 引致变态反应。常用的结核菌素有 –旧结核菌素(OT)——将结核杆菌培养于 甘油肉汤培养基中，4～8周后加热浓缩 过滤制成。 –纯蛋白衍生物(PPD)——OT经三氯醋酸 沉淀后的纯化物。
• 免疫低下者此种局限性病灶可能破 溃，菌体排入支气管，随痰咳出体 外；或者病灶液化，扩散进入血流 及其他器官，造成机体死亡。 • 免疫正常者，局限性病灶在活化的 巨噬细胞作用下，其内细菌停止生 长，病灶钙化而痊愈。
2、 致病作用 • 本菌的毒力因子尚不十分清楚。
细菌在吞噬细胞内寄生且顽强增殖 菌体成分致病：分支菌酸及其类似 物对于细菌在体内繁殖、持续感染 具有重要作用。
2、生长慢，初代分离1-2周才开始生长， 3-4周才能旺盛生长。生长速度：禽型菌 ＞人型菌＞牛型菌。 菌落粗糙、隆起、不透明、边缘不整齐，
呈颗粒、结节或花菜状，乳白色或米黄 色。
在液体培养基中，因菌体含类脂而具 疏水性，形成浮于液面有皱褶的菌膜。
3、常用的培养基
罗杰二氏(Lowenstein-Jensen)培养基 (内含蛋黄、甘油、马铃薯、无机盐及 孔雀绿等)、改良罗杰二氏培养基、丙 酮酸培养基和小川培养基。 5％～10％的CO2或5％甘油可刺激结 核杆菌的生长，但5％甘油对牛分支杆 菌生长有抑制作用。