甘草酸实验报告

甘草酸的提取、纯化、测定及残渣中甘草多糖的提取分离测定

实验报告

学院：生物科学与工程学院

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组别：第七组

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目录

一、实验目的 (3)

二、实验器材 (2)

三、实验原理 (2)

1.甘草简介 (2)

2. 甘草酸的提取方法 (3)

2.1 水提法 (3)

2.2 稀氨水提取法 (4)

2.3超声波提取法 (5)

3 甘草酸的分离与纯化 (5)

3.1 超滤法 (5)

3.2 结晶法 (6)

3.3 树脂法 (6)

4.多糖提取方法 (7)

5．多糖含量测定 (7)

四、实验内容及步骤 (8)

1.甘草酸的提取（稀氨水提取法） (8)

1.1 (8)

1.2 (8)

1.3 (8)

2. 甘草酸的纯化（大孔树脂吸附法） (9)

3.残渣中甘草多糖的提取分离（溶剂提取法） (9)

五、实验数据及处理 (11)

1.甘草酸标准曲线 (11)

2.测定样品甘草酸浓度，计算甘草提取率 (11)

3.甘草酸粗品质量 (12)

4.洗脱液中甘草酸的含量测定 (12)

5.纯化后甘草酸的质量2.132g (12)

六、实验结论及误差分析 (13)

实验结论： (13)

误差分析： (14)

一、实验目的

1.掌握甘草酸提取、纯化的原理和方法，了解甘草酸定量测定方法。

2.掌握多糖类的提取及测定方法。

3.熟悉皂甙的性质。

4.进一步熟悉物质提取与纯化的技术，掌握相关原理。

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二、实验器材

1.试剂：70%的乙醇、0.6%的稀氨水、3.5mol/l的浓硫酸、XAD9型树脂、6%盐酸、50%乙醇、95%乙醇、苯酚、铝片、碳酸氢钠、葡萄糖、标准甘草酸等。

2.器材：紫外分光光度计、石英比色皿、旋转蒸发仪、真空抽滤机、恒温水浴锅、1000ml量筒、玻璃棒、烧杯、纱布、玻璃漏斗、滤纸、烧杯等。

三、实验原理

1.甘草简介

甘草是蝶形花科（Fabaceae）、甘草属(Glycyrrhiza)植物，甘草地下部分是名贵中药材，地上部分是多年生牧草。甘草具有抗寒、耐热、耐旱、抗盐碱等优良特性，适生性和抗逆性强，生命力旺盛，为干旱、半干旱地区重要的植物资源之一。早甘草味甘、性平，有补脾益气、止咳祛痰、清热解毒的功能，用于脾胃虚弱、中气不足、咳嗽气喘、解毒等病症。现代研究表明，甘草还有肾上腺皮质激素样的作用，可治慢性肾上腺皮质机能低下症和胃、十二指肠溃疡，近年来又发现甘草可抗癌和防治艾滋病，又是预防和治疗SARS的复方组份之一。

甘草的主要有效成分为甘草酸(glycyrrhizic acid)及甘草次酸(glycyrrhetinic

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acid)等三萜类化合物、甘草黄酮类化合物以及甘草多糖等。药理研究表明，甘草酸及甘草次酸具有解毒、消炎、镇痛、抗肿瘤的作用。近年来，还用于防治病毒性肝炎、癌症以及艾滋病等。甘草酸约占甘草根茎的3-14%，分子式为C42H62O16，分子量822.92，熔点212 ºC -217 ºC，其结构式为五环三萜皂甙，结构图如图1-1所示：

图1-1 甘草酸结构分子式

纯品甘草酸为白色针状晶体，不溶于冷水，可溶于热水，故溶于热水后，经冷却则呈胶体状沉淀析出。加热、加压及在稀酸作用下可水解为一分子甘草次酸和两分子葡萄糖醛酸。甘草次酸与单葡萄糖醛酸结合成甘草酸苷元单葡糖苷酸（MGGR）。

2. 甘草酸的提取方法

2.1 水提法

水提法是最为古老、也是最为常用的一种提取方法。其操作简单，溶剂成本低廉，但得率较低，按1990年版中国药典中含量测定方法测得甘草酸得率仅约3.0%。据推测可能是因为水提法提取出的杂质较多，在去除杂质的过程中夹带

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了甘草酸，损失较大。工艺流程如1-2所示：

图1-2 水提法提取甘草酸的工艺流程

2.2 稀氨水提取法

甘草酸成铵盐后水溶性增加可增加提取率。稀氨水提取法常采取冷渗的方法。

工艺流程如下：

图1-3稀氨水提法工艺流程1.4.2.3 氨性醇提取法在对甘草提取工艺的研究中，发现用含氨0.8%的65%乙醇回流提取乌拉尔

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甘草的效果优于含氨0.6%的65%乙醇和0.6%的氨水，甘草酸的得率达21%，比水提法提高了两倍以上，节省了资源，降低了成本，也避免了糖类、淀粉等大量水溶性杂质的混入，便于精制。如果能够解决加热回流过程中氨气逸出造成的污染问题，氨性醇提取法将成为一种较为理想的方法。工艺流程如图1-4所示。

图1-4氨醇溶液提取甘草酸的工艺流程

2.3超声波提取法

谢果等研究了超声条件下不同因素对甘草酸得率的影响，通过选择，可以得到最佳提取工艺：溶剂为70%乙醇溶液、超声频率为18kHz、浸泡时间为90min、粒度为18~20目，在此工艺进行提取，甘草酸的提取率可以达到87.4%。

3 甘草酸的分离与纯化

3.1 超滤法

将甘草提取液酸析后所得的粗品用氨水溶解，然后在一定的压力下进行超滤，滤

液浓缩干燥得甘草酸铵。

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3.2 结晶法

结晶法是利用甘草酸转化为铵盐后在某些特定溶剂中溶解度下降而结晶出来，达到纯化的目的。较为常用的有晶种法和反复结晶法。

晶种法是先将甘草提取液进行酸析，再用适量甲醇回流提取沉淀物，提取液氨化后减压蒸干得糖浆状物，趁热加入适量冰醋酸使溶解、静置，投入甘草酸单铵盐晶种，隔日吸滤，冰醋酸洗涤，减压蒸干即得甘草酸单铵盐。

反复结晶法是先将甘草提取液进行酸析，再经乙醇或丙酮溶解提取，氨化成盐析出，再经活性炭脱色，反复重结晶得纯品。

3.3 树脂法

树脂法包括离子交换树脂法和大孔吸附树脂法，两种方法均是利用甘草酸与杂质理化性质的不同，通过吸附和解吸附的过程，达到纯化的目的。

离子交换树脂法：因为甘草酸中含有3个羧基，可与阴离子交换树脂上的阳离子结合而吸附在树脂上，其他一些非酸性的杂质不被吸附，从而得以与这些杂质分离。日本专利中以弱碱性树脂DuoliteA374吸附甘草酸水提液，再用2.0%氨水洗脱即得铵盐产品。原苏联专利是先用阴离子交换树脂AB-6G富集甘草酸，再用弱酸性阳离子交换树脂除去铵离子，从而得到高纯度的产品。

大孔吸附树脂法：大孔吸附树脂法是一种较为经济实用的方法。通常选用的树脂有Amblite XAD4, XAD8, XAD9,XAD11,DA201以及AB-8等。姚德佳等用以苯乙烯和二乙烯苯为骨架，由丙烯腈组成的主链上带有CN基的DA-201型大孔树脂柱吸附，以水或稀的低级醇洗脱，收集洗脱液，回收溶剂后得到的甘草酸