鸡蛋清溶菌酶的提取纯化工艺研究

点沉淀相结合的方法可除去大部分杂蛋 白，去除
蛋清的粘度 ，使溶菌酶得到初步的分离和纯化 。 鸡蛋清 溶壁小球菌 ７ ４ ２ 大孔弱酸性阳离子 ２１ ．２预处理条件的确定 ． 清 整 ： 鱼 上清液 垫变 上清 交换树脂 羧甲其纤维素Ｃ ＭＣ 标准溶菌酶 （ 酶活 原蛋 垫 旦 叠登 力＞１０ ０ ０ ０单位／ ｇ 牛肉浸膏 蛋白胨 Ｎ Ｃ（ ｍ ） ａＩ 分 析纯）琼脂 其它试剂均为分析纯 １ 主要仪 器 ． ２ 超净工作 台 隔水式电热恒温培养箱 恒温振荡器
山 东 食 晶 发 苕 莩
２１．（ ０ １４总第１３ ６ 期）
鸡蛋清溶菌酶的提取纯化工艺研究
李书丰
（ 州职业 技术 学 院粮油 食 品系 山东 德州 ２３ ３ ） 德 ５ ０４
摘
要 ：以新鲜 鸡蛋 清为原料 ， 以溶壁小球 菌的茵悬液 为底 物检 测溶茵酶 的活 力。 根据 溶茵酶具有耐热性 、 电点较 高的 等
特点， 用１ ａ Ｉ 先 ％Ｎ Ｃ进行盐溶 ， 再采 用热 变性 （５Ｃ ３ ｉ ７ 。， ｍｎ 等电点沉淀 （．） ）和 ４５ 法除去蛋 清 中大量杂蛋 白， 然后 用７ ４ ２ 弱酸阳
离子树 脂从蛋 清液中吸 附提取 溶 茵酶 ， 起始 缓冲液为１ １ ｍ ｌＬ 、 Ｈ ．４ ／ ｏ ） ｐ ６６ 的磷 酸缓冲液 。 ５（ ／ 再用１％ （ ｉ） Ｏ溶液进行 ｏ Ｎ ｌ Ｓ
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一
山 东 食 晶 发 酵
失活 ，选择以下参数为最佳：
表 ２预 处理最佳条件
合 并洗 脱 峰 处 的洗 脱 液 ，浓 缩 ｌ倍 后 进行 真 ０ 空 冷冻 干燥 。
３ ． ２离子交换树脂的使用
７ ４ 孔 弱 酸 性 阳离 子 交 换 树 脂 的预 处 理 、 ２大 ２１ ．－ 验步 骤 ３实 ２１ ． 鉴别 质 量 ：鸡蛋 清 的稠 度是 最重 要 的指标 ．． １ ３ 转 型
洗 脱 ， 用超 滤 法 对 洗 脱 液 进 行 脱 盐 、 浓缩 ，再 经 冷 冻干 燥得 到 溶 茵酶 产 品 。 采 用Ｃ Ｃ 甲基 纤 维素 对 洗 脱 液 进 行 分析 采 Ｍ羧
检测 。
பைடு நூலகம்
关键词 ：溶 茵酶 蛋清 ７ ４ 脂吸 附 超 滤 冻干 ２树
１ 材 料 与仪器 １ ． １主要 材料
收集７ ０ Ｌ ０ ｍ 蛋清 ，测其ｐ 值为８１（５ Ｈ ． ２ ℃）， 用单层纱布过滤掉蛋清中的脐带块和碎蛋壳。 ２ １３２ 按４ ．．． ％柠 檬酸 、２ ％Ｎａ １ Ｃ 的浓度关 系 向 ７０ Ｌ ０ ｍ 蒸馏水 中加人２ ｇ ８ 柠檬酸和 １ｇ ａ ｌ ４ Ｎ Ｃ ，然后 将该盐溶液与蛋清混合均匀 ，这时会 出现絮状蛋
３ ． 预处理 ：新买 的树脂使用前 的处理过程如 ．１ ２
之一 ，蛋清ｐ 的升高导致稠厚蛋清凝胶结构的破 下 Ｈ 坏 。所 以 ，蛋 清 的起 始ｐ Ｈ应在 ７ 左 右 。颜 色 、 ～９ 新 出厂 的树脂 一水浸泡２ ｈ ４ 一倾去水后洗至
气 味 无异 常 。
澄清一除去水后Ｊ ２ ３ Ｊ ～ 倍量２ ｏ Ｉ Ｃ －搅拌 （ Ｉ ］ ｍ ｌＨ １－ ／ － 或
圆
ｆ
圜 一 匝亟 一 匪亟窭 一 匝亟亟圃
ＡＥｌ 电子 分 析 平 Ｇ＆Ｇ系 列 电子 天 平 ６ １ １２ ０．Ａ型鼓 风干燥 器
２ 以蛋清 为原 料 的制备 工艺
液 塑！至 堡 蛋 液 旦！ 清
为 了得到蛋清液最佳的加热温度和时 间，对 这几个 因数作如下实验：
Ｃ ＳＳ Ｈ —
Ｆ Ｎ
将蛋 清用等量 的２ Ｎ Ｃ 溶液稀 释后， ％ ａ１ 调节
白沉 淀 。 ２１ ＿ ．３ ．３将上述蛋清液放人７℃水浴锅中进行加热， ５
梳洗 ）２ ｈ一除酸后水洗至中性一除水后加２ ３ ～ 倍
量２ ｌ Ｏ ￣搅拌 （ ｍｏ／Ｎａ Ｈ ｌ 或梳洗 ）２ 一除碱水洗 ｈ 至中性备用 ３ ． 转型 ：本实验使用的是弱酸性离子交换树 ．２ ２ 脂 ，选 择４ ５ ～ 倍量 的２ ｌ Ｏ ｍｏ／Ｎａ Ｈ转 型处 理 ，然 后 １
用 蒸 馏 水 洗 至 中性 ， 即成 为 Ｎａ 树 脂 ，最 后 用 型
ｐ ＝ ． （６９ ２１１ ｍｏ １ Ｈ ６ ６２ ．＂）／５（ ｌ ）的磷 酸缓冲溶液平 ４ （ ／ 衡过后即可使用 。
３３上 柱 吸附 ． ３３１实 验装 置 如 图： －．
维持５ ｎ 这时有大量杂蛋白沉淀出来。 ｍｉ， 立刻用流 动水将蛋清液迅速冷却至３℃以下。 ０ ２１ ． 在４ ０ ｒｍ离心 １ｍｉ，收集上清液约为 ．． ４ ３ ０ ０ｐ ０ ｎ ６ ０ ，测其ｐ 值为３１温度２ ℃，慢慢用胶头 ０ ｍＬ Ｈ ．１ ５ 滴管滴 加０５ 氢氧化钠调ｐ ． Ｎ Ｈ至４５ ．，注意应慢慢 滴 加 ，同时用玻 璃棒缓 慢搅拌 ，以防局 部过碱 使 蛋 白质变性 。离心除去等 电点在４ 左右的杂蛋
ｐ ＝ ，加热，然后用流动水冷却 ，离心去掉杂蛋 Ｈ３ 白后 ，测 定 不 同处 理 方法 的蛋 清 液 中蛋 白质含 量 和溶菌酶活力 ，结果如下：
表 １ 预处理工艺条件的确定
溶菌酶的提取工艺流程
吸物 附
洗 液 浓 液 冷干 溶酶 脱 竺 缩 冻 燥 菌
２１鸡蛋清 的预处理工艺 ． ２１１原 理 ．． 鸡蛋清中所含的蛋 白质种类很多 ，除含有溶 菌酶外 ，还混有其它蛋 白质 。但是与这些蛋 白质 相 比，溶菌酶具有耐热性 ，它在酸 ｌ条件下能经 生 从表 中可 以看 出，随着加热温度升高 ，加热
受较长时间的高温处理而不丧失活性 ，并且溶菌 时间延长 ，杂蛋 白去除率增大，但溶菌酶活力降 酶又有特别高的等 电点。因此，用热变性和等 电 低 ，综合考虑到去除杂蛋 白的效果和溶菌酶的不
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