《花粉培养》PPT课件

离心
花粉 植株
培养 接种花粉
加入培 养基
上清液
无菌 过滤
Xie Xie
两侧加石蜡 油，放盖片 形成“支柱”
加石蜡 “围墙”
5、条件培养法
概念：指在合成培养基中加入失活的花药提取 物，然后接入花粉进行培养的一种方法。
由于失活的花药提取物中含有促进花粉发育的物 质，所以加入花药提取物有利于花粉培养成功。
培养步骤
花药+
1周 取出花药，沸 研磨
培养基 花粉萌动 水杀死细胞
离心浓缩
花粉悬 浮液
含有2倍培养密度 的花粉悬浮液
等体积 混合
固培 加热熔化 冷却至35℃
加封口膜 25℃暗培养
含有单倍培养密度 的花粉培养液
花粉平板培养示意图
3、看护培养法
将完整的花药放在固体培养基上，然后将滤纸 片放置在花药上面，一会滤纸就被湿润，然后 迅速将花粉放置在滤纸片上，进行培养。对照 是把花粉粒直接放置在固体培养基上，其它操 作相同。
淀物
洗 涤
花粉 培养
3.剖裂释放法
这一技术需要借助一定工具剖裂药壁，使花粉释 放出来，而不是自然释放。
二、花粉培养方法
1.液体浅层培养 2.平板培养法 3.看护培养法 4.微室悬滴培养法 5.条件培养法
1、液体浅层培养
分离的小孢子经洗涤纯化，调整到所需浓度， 根据培养皿的大小，适量加入培养皿内进行培 养。待愈伤组织或胚状体形成后转移到分化培 养基或胚发育的培养基上使其生长。
2、平板培养法
将分离的花粉用液体培养基稀释或离心浓缩到 最终接种密度的2倍，把含0.6%到1%的琼脂的 培养用固体培养基加热熔化后，冷却到35℃， 置于恒温水浴锅中保持这个温度不变。然后将 这种培养基与花粉培养液等量混合，迅速注入 并使之铺展在培养皿内。用封口膜把培养皿封 严，最后将材料放在25℃下进行暗培养，诱导 产生胚状体或再生不定芽，并进而分化成小植 株。
2.研磨过滤收集法
将花蕾表面消毒后，放入含培养基或分离液的 无菌研磨器中研磨，使花粉释放出来，然后通 过一定孔径的网筛过滤、离心，收集花粉并用 培养基或分离液洗涤，然后用培养基将花粉调 整到理想的接种密度，移入培养皿进行培养。
消毒 无菌研磨 花粉+碎片 筛网过滤 花粉滤液 离心 花粉沉
花蕾 器研磨 混合物
4、微室悬滴培养法 微把室花制序作取方下，法表面消毒后用塑料薄膜包好，静
置一夜，待花药裂开、花粉散出，制成每滴含 花消有 内药毒 5进0行到静一悬80置夜滴粒培的养花花花药粉。粉裂 散悬开 落浮培收悬养集浮 基5，0悬~然8浮0粒后液/滴放在1滴微室载无玻菌片
盖片架于 “支柱”之 上形成“屋 顶”
花粉培养
安科院 园艺121班
花粉培养 也叫小孢子培
养，是指把花粉从花药中分 离出来，以单个花粉粒作为 外植体进行的离体培养技术
包含花粉的花药
花粉培养产生植ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ的途径
花粉 脱分化
胚状体
植株
再分化
愈伤组织
植株
花粉培养的优点
•花粉已是单倍体细胞，诱发后经愈伤组织或胚状体发 育成的小植株都是单倍体植株或双单倍体，不含有因 药壁、花丝、药隔等体细胞组织的干扰而形成的体细 胞植株
•由于起始材料是小孢子，获得的材料总是纯合的，不 管它是二倍体还是三倍体
•小孢子培养可观察到由单个细胞开始雄核发育的全 过程，是一个很好的遗传与发育研究的材料体系
•由于花粉能均匀地接触化学的和物理的诱变因素，花 粉是研究吸收、转化和诱变的理想材料
一、分离花粉的方法
1.自然释放法 2.研磨过滤收集法 3.剖裂释放法
1.自然释放法
将花蕾进行表面消毒后，无菌条件下取出花药， 放在固体或液体培养基上培养，花药会自然开 裂，将花粉散落在培养基上。然后将花药壁等 去除，即可进行花粉培养。
操作简单，但效率低
消毒
花蕾 灭菌 花药
固体培养 基
液体培养 基
裂开，花 粉散落
移走花药 花粉培养
花粉 散落
过滤 离心 浓缩
接种培 养