小麦cDNA文库构建方法的改进及优化
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天 津农业科 学 Ｔ ｎｉ ｇｉ ｌ ｒ ｃ ｎｅ ｉ ｊｎ ｒ ｕｔ ａ Ｓ ｉ ｃｓ ａ Ａ ｃ ｕｌ ｅ
・植 物 生理 与 生 物 技 术
wenku.baidu.com
小麦 ｃ Ｎ Ｄ Ａ文库 构 建 方 法 的改 进 及 优 化
许延芳 ， 丽娜， 晓颖 ， 潘 刘 王振 英
（ 津师 范大学 生命 科学学 院 ， 津 ３ ０ ８ ） 天 天 ０３７
（ ｏ ｅｅｏ ｉ ｃ ｎｅ ｉ ｊ ｒ ａ ｎｖｒｉ ，Ｔａｊ ０ ３ ７， ｈｎ ） Ｃ ｌ ｇ ｆＬｆ Ｓｉ ｃ ，Ｔａ ｉ Ｎｏｍ ｌ ｉｅｓｙ ｉｎｉ ３ ０ ８ Ｃ ｉａ ｌ ｅ ｅ ｎｎ Ｕ ｔ ｎ
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ｃＮ Ｄ Ａ文库 是 真核 生物 ｍＲ Ａ集 群 的 ｃ Ｎ Ｎ Ｄ Ａ拷
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现新 基 因和研 究 基 因结 构 及 功 能 的基 础 工具 ［３ １１ －。 ｃ Ｎ 文库 构 建 的关 键 在 于获 得 全 长 ｃ Ｎ ［， Ｄ Ａ Ｄ Ａ ４目 １
Ｉ 酶是一 种特殊 的限制性 内切酶 ，其对 酶切位 点中间的碱基要求不严格 ，而对两端 的序列要求 严格 ， 因此 ， 可改变酶切位 点 中部 的碱基 序列 （ 即
Ｉ Ａ和 Ｉ Ｂ均为 Ｉ 酶切位点 ， 它们 中部碱基 但 前， 获得 全 长 ｃ Ｎ Ｄ Ａ文 库 的方 法 主要 有 Ｏｉ — ａ— 序列 为不 同的限制性酶切位点 ）通过对 目的 ｃ — ｌｏ ｃｐ ｇ ， Ｄ ｐｎ ［ 】Ｃ Ｐｕｅ法 、 Ｍ Ｒ ￣法 ［、 Ａ Ｔ ａ ｐｒ ｉｇ 、 Ａ ｔｒ ｌＳ Ａ Ｔ ４ Ｃ Ｐ— ｒｐ ｅ Ｎ １ Ａ进 行 单 酶 切 （ Ｉ 切 ） 即可 得 到 两 种 不 同 的 酶 ， 法 ［ １等 。其 中较 为 常 用 的 是 Ｓ Ｒ Ｙ 法 ８ ． ＭＡ Ｔ Ｍ
摘 要： 基于 Ｓ Ｒ ＭＡ Ｔ法 ， 优化 ｃ Ｎ Ｄ Ａ文库构建方法 。将常规 Ｓ Ｒ ＭＡ Ｔ法 中的限制性 内切酶 Ｓ ｌ ｌ ｉ 替换 成 Ｂ ａ， 引物两侧 分别加 ｓＩ在 入 Ｂ ａ－ ｏ 和 Ｂ ａ— ａ Ｉ ｓＩＸｈＩ ｓＩＢ ｍＨ 酶切位点 ， 仅使用 Ｂ ａ 单酶切即可获得两 不同的粘性末端 ， ｓＩ 可用于连接任 意载体 。应用此方法构
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建 了小麦 ｃ Ｎ Ｄ Ａ文库 ， 获得 ２ ｘ Ｏ 个独立克隆 ， ． ｌ４ ７ 文库平均长度 ５０ｂ 。 ０ ｐ 关键 词 ：Ｄ Ａ文库 ； Ｍ Ｒ ｃＮ Ｓ Ａ Ｔ法 ； ｓＩ Ｂａ
中 图 分 类 号 ： ５ ２１ ￥１． 文献标识 码 ： Ａ Ｄ Ｉ编 码 ：０３ ６ ／ ｉ ｎ１０ － ５０２ １ ．３０ ５ Ｏ １ ， ９ｊ ｓ 。０ ６ ６０ ．０ ２０ ．０ ９ ．ｓ
・植 物 生理 与 生 物 技 术
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小麦 ｃ Ｎ Ｄ Ａ文库 构 建 方 法 的改 进 及 优 化
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（ 津师 范大学 生命 科学学 院 ， 津 ３ ０ ８ ） 天 天 ０３７
（ ｏ ｅｅｏ ｉ ｃ ｎｅ ｉ ｊ ｒ ａ ｎｖｒｉ ，Ｔａｊ ０ ３ ７， ｈｎ ） Ｃ ｌ ｇ ｆＬｆ Ｓｉ ｃ ，Ｔａ ｉ Ｎｏｍ ｌ ｉｅｓｙ ｉｎｉ ３ ０ ８ Ｃ ｉａ ｌ ｅ ｅ ｎｎ Ｕ ｔ ｎ
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Ｉ 酶是一 种特殊 的限制性 内切酶 ，其对 酶切位 点中间的碱基要求不严格 ，而对两端 的序列要求 严格 ， 因此 ， 可改变酶切位 点 中部 的碱基 序列 （ 即
Ｉ Ａ和 Ｉ Ｂ均为 Ｉ 酶切位点 ， 它们 中部碱基 但 前， 获得 全 长 ｃ Ｎ Ｄ Ａ文 库 的方 法 主要 有 Ｏｉ — ａ— 序列 为不 同的限制性酶切位点 ）通过对 目的 ｃ — ｌｏ ｃｐ ｇ ， Ｄ ｐｎ ［ 】Ｃ Ｐｕｅ法 、 Ｍ Ｒ ￣法 ［、 Ａ Ｔ ａ ｐｒ ｉｇ 、 Ａ ｔｒ ｌＳ Ａ Ｔ ４ Ｃ Ｐ— ｒｐ ｅ Ｎ １ Ａ进 行 单 酶 切 （ Ｉ 切 ） 即可 得 到 两 种 不 同 的 酶 ， 法 ［ １等 。其 中较 为 常 用 的 是 Ｓ Ｒ Ｙ 法 ８ ． ＭＡ Ｔ Ｍ
摘 要： 基于 Ｓ Ｒ ＭＡ Ｔ法 ， 优化 ｃ Ｎ Ｄ Ａ文库构建方法 。将常规 Ｓ Ｒ ＭＡ Ｔ法 中的限制性 内切酶 Ｓ ｌ ｌ ｉ 替换 成 Ｂ ａ， 引物两侧 分别加 ｓＩ在 入 Ｂ ａ－ ｏ 和 Ｂ ａ— ａ Ｉ ｓＩＸｈＩ ｓＩＢ ｍＨ 酶切位点 ， 仅使用 Ｂ ａ 单酶切即可获得两 不同的粘性末端 ， ｓＩ 可用于连接任 意载体 。应用此方法构
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建 了小麦 ｃ Ｎ Ｄ Ａ文库 ， 获得 ２ ｘ Ｏ 个独立克隆 ， ． ｌ４ ７ 文库平均长度 ５０ｂ 。 ０ ｐ 关键 词 ：Ｄ Ａ文库 ； Ｍ Ｒ ｃＮ Ｓ Ａ Ｔ法 ； ｓＩ Ｂａ
中 图 分 类 号 ： ５ ２１ ￥１． 文献标识 码 ： Ａ Ｄ Ｉ编 码 ：０３ ６ ／ ｉ ｎ１０ － ５０２ １ ．３０ ５ Ｏ １ ， ９ｊ ｓ 。０ ６ ６０ ．０ ２０ ．０ ９ ．ｓ