甲氧西林耐药金黄色葡萄球菌的实验室诊断
耐甲氧西林金黄色葡萄球菌实验室诊断方法
ＤＯＩ ： １ ０ ． １ １ ６ ５ ５ ／ ｚ ｇ ｙ ｗｙ ｌ ｅ ２ ０１ ５ 个菌落溶入 ５ ０ １ 蒸馏水 ， ９ ９℃干浴 １ ０
ｍｉ ｎ ， ３ ０ ０ ０ ｒ ／ ｍ ｉ ｎ 离心 １ ｍｉ ｎ ， ２ Ｉ ｘ ｌ 上 清液 用 于 ２ ５ ｌ 的Ｐ Ｃ Ｒ反
ＡＴ Ｃ Ｃ２ ９ ２ １ ３ 。
注： 头孢西丁结果可以预测苯唑西林敏感 或者耐药
２ ． １ Ｄ Ｎ Ａ提 取 ： 取冻存实验菌株在 ５ ％的哥 伦 比亚 羊 血 平 板
１ ． ２ 微量 肉汤稀释法 ： 微量肉汤稀释法培养基用阳离子校正
ＭＨ肉汤 （ Ｃ Ａ ＭＨ Ｂ ） ，检测苯唑西林的 ＭＩ Ｃ值需要添加 ２ ％
Ａ Ｔ Ｃ Ｃ ４ ３ ３ ０ ０ ． ｍ ｅ ｃ Ａ 阳性 （ 抑 菌 圈直 径 ≤２ １ ｍｍ） 。
表 １ 金黄色葡萄球菌对苯唑西林的折点
Ｓ Ｃ Ｃ ｍｅ ｃ 基 因型别 ： 一般来说 ． 甲氧西林耐药 的金黄色葡 萄球菌 都携 带有 ｍ ｅ ｃ Ａ基 因 ，但其 耐药 程度 却不 尽一 致 ， Ｍｅ ｃ Ａ基因位于一个可移动 的元件上 ，被称为金黄色葡萄球
郝 崇华 万艳红 裴世静 张燕军 王淑峰 戎建荣
ca mrsa判定标准
ca mrsa判定标准CA-MRSA（community-associated methicillin-resistant Staphylococcus aureus）是一种常见的耐甲氧西林金黄色葡萄球菌感染，它是在社区环境中传播的病原体。
与传统的医院获得性MRSA（HA-MRSA）不同，CA-MRSA主要侵犯健康的个体，包括儿童、青少年和年轻成年人。
CA-MRSA在全球范围内呈增加趋势，给公共卫生造成了很大的挑战。
为了诊断CA-MRSA感染，需要遵循一系列的判定标准。
首先，CA-MRSA的判定需要基于临床表现。
患者通常在暴露于社区环境后的一到几周内出现症状。
典型的临床表现包括脓包、皮肤和软组织感染、肺炎和败血症等。
另外，流行病学信息也与该病的诊断有关。
CA-MRSA感染通常与个人密切接触、共用个人物品、参与体育活动等有关联。
此外，对没有与医疗环境接触的患者，医院获得性MRSA的诊断需要排除。
其次，实验室检测是判定CA-MRSA的关键。
CA-MRSA的诊断依靠对病原体的分离和鉴定。
在实验室中，采集患者的病原体标本，如皮肤脓液、血液和呼吸道样品等。
然后，通过培养技术使菌株增殖，其中金黄色葡萄球菌能在常见的培养基上生长。
在分离出菌株后，可以使用不同的方法进行鉴定。
传统的鉴定方法包括革兰染色、产酶试验和药敏试验。
除此之外，分子生物学技术也可以用于鉴定CA-MRSA，如聚合酶链式反应（PCR）和DNA测序等。
最后，药敏试验对MRSA耐药性的检测非常重要。
CA-MRSA的特点之一是其常对多种抗生素耐药，特别是对β-内酰胺类抗生素耐药。
因此，在治疗过程中了解MRSA的药敏性是至关重要的。
药敏试验可以通过纸片扩散法、肉汤微量法或自动微量法进行，用于测定细菌对抗生素的敏感性和耐药性。
通常，鉴定CA-MRSA的时候，应该评估其对甲氧西林和其他抗菌药物的敏感性，以确定治疗方法。
总结起来，CA-MRSA的判定标准主要包括临床表现、流行病学信息、实验室检测和药敏试验。
耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA) 检测(荧光PCR法)
汇报人：XX
01
03
05
02
04
荧光PCR法是一种 基于DN聚合酶链 反应的检测方法
荧光PCR法通过荧 强弱来定 量分析DN序列
荧光PCR法具有高 灵敏度、高特异性 、快速、简便等优 点
灵敏度高：能够检测到极低浓度的MRS 特异性强：能够准确区分MRS和其他细菌 快速简便：操作简便，检测时间短 结果准确：检测结果准确可靠，重复性好
护公众健康
灵敏度高：荧光PCR法具有 较高的灵敏度，能够检测到 极低浓度的MRS
特异性强：荧光PCR法具有 较高的特异性，能够准确区 分MRS和其他细菌
快速高效：荧光PCR法具 有快速高效的特点，能够在 短时间内完成MRS的检测
自动化程度高：荧光PCR法 可以实现自动化操作，提高 检测效率和准确性
荧光PCR法在MRS检测中的前景展望：提高灵敏度和特异性，提高检测准确性和 可靠性，降低检测成本，提高检测效率，推动MRS检测技术的发展。
汇报人：XX
临床诊断：用于检 测MRS感染，快速 准确
科研研究：用于研 究MRS的传播、变 异和耐药性
公共卫生：用于监 测MRS的流行病学 和防控策略
食品检测：用于检 测食品中的MRS污 染，保障食品安全
样本类型：血液、 尿液、痰液等
采集方法：无菌操 作，避免污染
保存条件：低温、 干燥、避光
处理方法：离心、 过滤、稀释等
样品采集：采集患者样本，如血液、痰液等
核酸提取：使用核酸提取试剂盒提取样本中的DN或RN
荧光PCR反应：将提取的核酸与荧光PCR反应试剂混合，进行 PCR反应
荧光PCR检测：使用荧光PCR检测仪检测反应产物，判断样本 中是否存在MRS
耐甲氧西林金黄色葡萄球菌院内感染和耐药性分析
５４０ ２ ２ ０广 东 雷 州 市 人 民 医院
摘 要 目的 ： 了 解耐 甲氧 西林 金 黄 色 为 葡萄球 菌（ Ｓ 院 内感染和耐 药情况 ， ＭＲ Ａ） 指 导 临 床 合 理 使 用 抗 生 素 。 方 法 ： 医 院 对 所 有 耐 甲氧 西 林 金 黄 色 葡 萄 球 菌 感 染 病 例进行 回顾 性 分 析。 结果 ： 年 分 离 出 ２ １２株 金 黄 色 葡 萄 球 菌 ， 中 ＭＲ Ａ １７ ９ 其 Ｓ ０ 株 ， 离率 ５ ．３ 。ＭＲ Ａ 感 染 率 高 的 分 ５ ７％ Ｓ 前 ５位 科 室 分 别 是 神 经 内科 、 经 外 科 、 神 ＩＵ 室 、 吸 科 、 通 外 科 。 身体 感 染 部 Ｃ 呼 普 位 以 呼 吸 道 感 染 为 主 。ＭＲ Ａ 对 万 古 霉 Ｓ 素和替 考拉 宁等糖肽 类抗 生素 无耐 药性 ， 敏 感 率 １０ ； 氯 霉 素 、 福 平 、 方 新 ０％ 对 利 复 诺 明较 为 敏 感 ； 其 他 抗 生 素 耐 药 性 较 对 高 。结 论 ： 医院 ＭＲ Ａ 分 离 率 高 ， 多 重 Ｓ 呈
李 建宁
曹 龙翎
ｓ ｌ ｅ ａ ｅ ｏ ｒ ｄｕ ｅ ｈｏ ｐ ｔｌ ｎ ｅ ｔｏ ｈａｌｂ ｔｋ ｎ ｔ ｅ ｃ ｓ ｉａ ｉｆ ｃｉｎ， ｄ ｖ ｌｐ ａ ｔｒａ ｄ ｕ ｒ ｓｓａ ｃ ａ ｉ ｅ ｅｏ ｂ ｃｅ ｉｌ ｒ ｇ ｅ ｉｔｎ ｅ ｎｄ ｎ— ｓｒ ｃ ｏ ｅ ｓ ｆａ ｔｂ ｏｉ ． ｔ ｔｐｒ ｐ ｒｕ ｅ ｏ ｎ ｉｉ ｔ ｕ ｃｓ
道分泌物最多（３３ ， ６．％）其次为皮肤分泌液
（１６ ）脓液 、 、 ２ ．％ ， 血液 尿液 、 水 、 脊 液 和 腹 脑 其 他 组 织 的 分 离 率 分 别 为 ６３ 、．１ 、 ．％ ２８％
耐甲氧西林金黄色葡萄球菌检测及其耐药性研究
１ １ ２ 抗 生 素 纸 片及 抗 生 素 头 孢 西 丁 （ ０ ｇ ． ． ３ ／
片 ） 苯 唑 西 林 纸 片 （ ｇ 片 ） 美 国 Ｂ 公 司 ） 及 １ ／ （ Ｄ 。
拉宁 、 万古 霉素以外 ， 其余抗生 素的耐药率 ， Ｓ ＭＲ Ａ组 均 明显
高 于 ＭＳ Ａ组 （ ＜ ． １ 。 结 论 头 孢 西 丁 纸 片 法 是 筛 选 Ｓ Ｐ ０Ｏ） 和 确 认 ＭＲ Ａ 菌 株 的 一 种 可 靠 、 便 的 方 法 ； Ｓ 为 多 重 Ｓ 简 ＭＲ Ａ 耐药菌株 ， 临床 应加 强 检 测 。 主 题 词 甲氧 西 林 抗 药 性 ； 萄球 菌 ， 黄色 ／ 离 和 提 纯 葡 金 分
维普资讯
安 徽 医科 大 学 学报
Ａ ｔ Ｕ ｉ ｒｔｔ ｅｉ ｎｌ ｎ ｕ ２０ ｃ；１ ５ ｃ ｎ ｅ ｉ ｉ Ｍ ｄｃ ａｉＡ ｈ ｉ ０ ６Ｏ ｔ （ ） ０ ｖ ｓａ ｓ ｉ ｓ ４
‘ ７ ・ ５９
耐 甲氧 西 林 金 黄 色 葡 萄 球 菌 检 测 及 其 耐 药 性 研 究
１ １ １ 菌株 来源 收 集 安 徽 医 科 大学 第 一 附属 医 ． ． 院、 安徽 中医学 院 附属 医 院 、 陵市 人 民医 院 、 北 铜 淮 市人 民医 院及 固镇县 人 民医 院等 １ 医 院 ２ ０ ２家 ０ ５年 临床分 离 的金黄 色 葡萄球 菌 １ ３株 。质 控菌 株 为金 ３
曹鸿 霞 熊 自忠 王 中新 徐 元宏 李 ， 一， ， ，
摘 要 目的 分析耐 甲氧 西林 的金黄 色葡 萄球 菌 （ Ｓ ＭＲ Ａ） 采 用 头 孢 西 丁 、 唑 西 林 纸 片 苯
旭
球菌 ， 与 以往苯 唑西林 纸 片 法 以及 Ｐ Ｒ法 进 行 了 并 Ｃ 比较 ， 同时对 金黄 色 葡萄球 菌 耐药性 进 行检 测 。
62株耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的耐药分析
ｎｕ ｉｒｇｒｓ ｔ ｔ ｆ Ｓ ． ｈ ｅｕ ｆ ｈ ｒｇｓｎ ｉｖｔ ｔ ｔ ｒ ａ ｔ ｗ ： ｔ ｃ ｃ ｎ （ ８ ７ ％ ） ｌ ｏ ｏ ａ ｉ ｌｈｄ ｅｉ ａ Ａ Ｔ ｅｒ ｌ ｏ ｅｄ ｅ ｓ ｉ ｙ ｅ ｅ ｓ ｅ ｏ ｓ ｔ ｒ ｙｌ ｅ ３ ． １ 、 ｖｆ ｘ ｃ ｕ ｓ ｎ ｏ ＭＲ ｓｅ ｔ ｕ ｔ ｉ ｓ ａ ｆ ｌ ｅａ ｉ ｅ ｌ ｎ
存在使 Ｍ Ｓ Ｒ Ａ呈 现 多 重 耐 药性 ， 引 起 广 大 医 务 人 员 的 高 度重 视 。 应
ｍｃ ｅＡ基因系 Ｍ Ａ所 特有 ， Ｓ 它的
【 关键词 】 耐甲氧西林金黄色葡萄球 菌 ； 耐药性 ；ｅＡ基 因 ｍｃ 【 中图分类号】 ４ ６ ５ Ｒ ４ ． 【 文献标识码】 Ａ 【 文章编号 】０４５ １ （０ ０ ０ —１００ １０ — １ ２ １ ） ３０ ６ －３ ５
重 耐 药 性 及 检 测 ＭＲ Ａ所 带 的 ｍｅＡ 基 因 ， Ｓ ｃ 以指 导 临 床 合 理 用 药 。 方 法 的 ｍｃ ｅＡ基 因检 测 采 用 Ｐ Ｒ扩 增法 。结 果 Ｃ 药物 敏感 试 验 采 用 Ｋ—Ｂ法 ；Ｍ Ｓ ＲＡ ６ ２株 ＭＲ Ａ呈 现 多 重 耐 药 性 ， 万 古 霉 素 、 考 拉 宁 、 奈 唑 烷 Ｓ 仅 替 利
没有 出现耐药 ， 它耐 药率 由高 到低依 次 为： 霉素 １０ 、 其 青 ０ ％ 红霉 素 ９ ． ３ 、 ０ ３ ％ 环丙 沙 星 ９ ． ６ 、 ０ １ ％ 庆大 霉素 ８．１ 、 ３ ６ ％ 左氧氟沙星 ７ ． ８ 、 霉素 ７ ．１ 、 ８ ５ ％ 克林 ５４ ％ 复方磺胺 ５ ．７ 、 ８ ０ ％ 四环素 ３ ． １ 、 霉素 ２ ． ５ 。８株 ８７％ 氯 ２９％ ＭＲ Ａ都检测 到 ｍ ｃ Ｓ ｅＡ基因 ， 大约在 ５３ｂ 位置产生 了相 同的条带 。结论 ３ ｐ
mrsa诊疗方案
mrsa诊疗方案MRSA（金黄色葡萄球菌耐甲氧西林菌株）是一种对抗生素产生耐药性的细菌，其感染可能导致严重的健康问题。
针对MRSA感染，医生和研究人员已经开发出了一系列诊疗方案。
本文将介绍一种常见的MRSA诊疗方案。
第一部分：诊断MRSA感染的诊断通常通过以下几种方法来确认：1. 临床症状：MRSA通常引起皮肤感染，如脓疱、疼痛和红肿。
其他感染症状可能包括发热、寒战和体力衰竭。
2. 临床检查：医生可能会对感染部位进行检查，观察是否存在典型的MRSA感染症状。
他们还可以收集病原体样本进行实验室检测。
3. 细菌培养：通过从感染部位采集样本，如皮肤分泌物或血液，医生可以进行细菌培养来确认MRSA感染。
第二部分：治疗方案MRSA感染的治疗方案通常包括以下几个方面：1. 药物治疗：针对MRSA感染，常规治疗方案是使用抗生素。
对MRSA耐药性较低的抗生素包括万古霉素、利奈唑胺和替考拉宁。
对于耐药性较强的MRSA感染，可能需要更强效的抗生素，如利奈唑胺/替考拉宁联合治疗。
2. 外科处理：对于严重的MRSA感染或局部感染病灶明显的情况，可能需要进行外科处理。
外科处理包括切开和引流脓肿、去除感染的组织等。
3. 隔离措施：由于MRSA具有强大的传播能力，感染病人通常需要进行隔离以防止传播给其他人。
隔离措施包括单独病房、佩戴个人防护装备以及严格的手卫生。
第三部分：预防措施预防MRSA感染的措施主要包括以下几点：1. 洗手卫生：保持良好的手卫生是预防MRSA感染的关键。
使用肥皂和温水充分洗手，尤其是在接触到感染病人或潜在污染物后。
2. 切勿共用个人物品：避免与他人共用个人物品，如毛巾、剃刀等。
这些物品可能潜藏着MRSA细菌，并通过共用传播给其他人。
3. 清洁和消毒：保持环境的清洁和消毒非常重要。
特别是在公共场所、医疗设施和居住环境中，经常对经常接触的表面进行清洁和消毒。
结论：MRSA感染是一种严重的健康问题，需要及时和有效的诊疗方案来应对。
耐甲氧西林金黄色葡萄球菌耐药性分析和mecA基因检测
耐甲氧西林的金黄色葡萄球菌（MRSA）是医院和社区感染的重要病原菌。
自20世纪90年代初起MRSA检出率有逐年上升趋势，已引起全世界重视。
MRSA不仅对β内酰胺类抗生素耐药，还常对喹诺酮类、氨基糖苷类和大环内酯类等抗菌药物耐药。
由于其多重耐药性，易造成医院感染的暴发流行，全身感染的病死率高达50％以上。
已成为临床抗感染治疗的一大难题［1］。
为正确掌握临床分离MRSA耐药性，给临床用药提供参考，我们分析了太原地区3所综合性医院临床分离的101株MRSA来源、分布、耐药监测情况并对其进行了mecA基因检测。
1材料和方法1．1菌株来源：收集2007—2008年太原地区3所综合性医院（山西省人民医院、山西医科大学第一医院、山西医科大学第二医院）临床分离的MRSA101株，剔除同一患者相同部位的重复菌株。
来源于住院和门诊患者的各类临床标本，包括痰、导管末段、血液、脓液、脑脊液、伤口分泌物、引流液、穿刺物等。
1．2主要试剂与仪器：金黄色葡萄球菌凝集试剂Slidex Staphplus，APIStaph葡萄球菌鉴定试条，VITEK-60全自动微生物分析系统均为法国生物梅里埃公司产品；药物敏感实验培养基为MH培养基购自天津金章生物技术公司现成品；抗生素药敏纸片为Oxoid公司产品。
聚合酶链反应（PCR）扩增所需试剂均为上海生工工程公司产品。
1．3药敏实验：采用纸片扩散法（Kirby-Bauer法）进行。
质控菌株为金黄色葡萄球菌ATCC25923。
药敏实验结果按美国临床实验室标准化委员会（CLSI）标准判断结果，采用Whonet5．4软件统计分析数据。
1．4MRSA检测：根据CLSI推荐的头孢西汀纸片扩散法检测。
应用标准的纸片扩散法实验条件，金黄色葡萄球菌孵育18h，使用反射光阅读头孢西汀抑菌圈直径。
判断标准是若抑菌圈直径≤21mm判断为MRSA。
抑菌圈直径≥22mm，判断为MSSA。
1．5mecA基因检测，用PCR法。
耐甲氧西林金黄色葡萄球菌SCCmec基因分型与耐药性研究
［］ ６漆
坚， 程
献 ． 绿 假 单 胞 菌 耐 药 性 分 析 ［ ］ 中华 医 院 感 染 学 铜 Ｊ．
杂 志 ，０ ７ １ （０ ：２ ５ ２ ０ ，７ １ ） １ ８ ．
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
［］ ａｈ ｎＪ Ｖｉ ．Ｔｒａｍｅ ｔ ｆ ｌｒｓ ｔｎ ｉｅｏ ａｔｒｂｕ ７Ｐ ｃｏ ， ｌ Ｊ ａ ｅｔ ｎ ｔｅｉ ａ ｔ ｎｔｂ ｃｅ ａ — ｏ ｍｕ ｉ ｓ Ａｅ ｍａ ｎｉｎｅｔ ｎ ［］ ｕｒＩｖｓ Ｄ ｕ ｓ２０ ，０：５ ． ｎ ｉｉｆｃｉ ｓＪ．Ｃ ｒ ｎｅｔ ｒｇ ，０ ９ １ １０ ｏ ［］ ｆｉｄｓＰ ，ｏ ｎ ｉｏ Ｎ， ａａａ ８ Ｒａａｌ ｉ Ｉｆａ ｎｄ ｕＥ Ｆ ｌｇ ｓＭＥ． ｉ Ａｍｐｅｌｎ ｓ ｌａｔｍ ： ｉｉｉ／ ｕｂ ｃａ ｌ ｃ ｒｅ ｔ ｔｔｓｉ ｅｅｅｂ ｃｅｉｌｎｅｔ ｎ［刀 ．Ｄｒｇ ，０ ７ ６ ： ｕｒｎ ａｕ ｓｖ ｒ ａｔｒ ｆｃｉ ｓ ｓ ｎ ａｉ ｏ － ｕ ｓ２ ０ ，７
中 国实 验 诊 断 学
２１ ０ ２年 ７月
第 １ ６卷
第 ７期
—
１１ ５ 一 ９
念 珠菌感 染 主要 危 险 因素 ， 其 耐 药 性 的分 析 有 助 对
于 肺部 真菌感 染 的诊 治［ １ 。
［］ ａ ｅ Ｆ ｒｅ Ａｎ ｒｌ ，ｔａ． ｎｉ ｔｒａｓｃ ｔｄｐ ｅ — ４ Ｂ ｕ ｒ Ｔ， ｅｒｒＲ， ｇｉ ｅ １Ｖｅ ｔａｏ－ｓｏｉ ｅ ｎｕ Ｔ ｌＪ ｌ － ａ ｍｏ ｉ： ｃｄｎ ｅｒ ｋｆｃｏ ｎ ． ｃｏ Ｍ ｏ ｙ［］ Ｓ ｍ ｉ ｅｐｉ ｎａｉ ｉｅｃ ，ｉ ａｔｒ ｄｍｉ ｂ ｇ Ｊ ． ｅ Ｒ ｓ ｎ ｓ ａ ｒ ｎ ｒ
ｇｅ ｏ ｒｖｎｉｎ Ｊ ． ｅｐｒＣ ｒ，０ ５ ５ ：２ ． ｉ ｆｒｐｅｅ ｔ ￣］ Ｒ ｓｉ ａｅ２ ０ ，０ ７ ５ ｓ ｏ ［］ ３曹 玉 ， 伟 ， 孙 冷 萍 ， Ｉ Ｕ 呼 吸 机 相 关 性 肺 炎 病 原 菌 的构 等．Ｃ
耐甲氧西林金黄色葡萄球菌耐药表型分型与耐药基因检测分析研究
耐药 ， 需加强 Ｍ Ｓ Ｒ Ａ对万古霉素 、 利奈唑胺 、 氯霉素 、 复方磺胺 、 平等常用药物最小抑菌浓度 （ Ｉ） 利福 Ｍ Ｃ 监测和临 床报告 ， 注万古霉素对 ＭＲ Ａ治疗不佳患者。 关 Ｓ
【 关键词 】 葡萄球菌， 金黄色；微生物敏感性试验；表型；抗药性
Ａｎ ｂ ｏ ｃ ｒ ｓｓａ ｃ ｈ ｎ ｔ ｐ ｎ ｅ ｅ ｄ ｔｃ ｉ ｎ ｏ ｅ ｈ ｃｌ ｎ ｒ ｓｓａ ｔ ｓ ｐ ｙ ｏ ｏ ｃ ｓ ａ ｌ ｅ ＧＵＯ Ｙ ｎ ｉ ｔ ｉ ｔ ｅ ｉ ｎ ｅ ｐ ｅ ｏ ｙ ｅ ａ ｄ ｇ ｎ ｅｅ ｔｏ ｆｍ ｔ ｉ ｉ ｉ ・ ｅ ｉｔ ｎ ｔ ｈ ｌｃ ｃ ｕ ｌ ｕ ｉ ｔ ｌ ａ ｒｓ ｕ—
基金项 目： 山西省 回国留学 人员科研资助项 目（０ ０９ ） ２ １—４
１ 菌株来源： ． １ 收集 ２０ 年 １ ０８ 月至 ２ １ 年 １ 由 ００ 月 山西省长治市人民医院临床分离 的 Ｍ Ｓ １ ， Ｒ Ａ ７ 株 同
一
病例仅采用第一分离株。菌株来源于住院和门诊
患者各类临床标本 ， 包括血液 、 痰液 、 脓液 、 口分泌 伤 物、 脑脊液 、 引流液等。 １ 仪器 与试 剂 ： ｉ ｏｃｎ ． ２ Ｍｃ ｓ 一 ｒ ａ ４自动微生物 鉴定仪
作者单位 ： ４００山西省 长治市人 民医院检验科 （ ０６０ 郭云龙 、 赵 先进 、 韩宏艳 、 孙静 、 张丽珍 ）山西省临床检验 中心科教处（ ； 戎建荣 ）
（ 国德灵公司产品）博 日定性基 因扩增仪 ， 美 ， 伯乐凝 胶成像仪 ， 细菌鉴定及最小抑菌浓度 （ Ｉ ） Ｍ Ｃ 药物敏
１ 材 料和方 法
起全世界重视。Ｍ Ｓ Ｒ Ａ不仅对 Ｂ内酰胺类抗生素耐 ． 药， 还常对喹诺酮类、 氨基糖苷类和大环 内酯类等抗
MRSA、VRE隔离措施、报告流程
MRSA的隔离措施、报告流程一、耐甲氧西林金黄色葡萄球菌传播途径，主要通过接触传播，目前对万古霉素敏感。
二、诊断：微生物实验室报告确诊三、报告流程：1、微生物实验室微生物实验室监测到MRSA菌株，立即报告科室，同时在报告单上注明“MRSA 多重耐药”的字样。
2、科室发现MRSA，立即报告科室主任、护士长，同时报告控感科，并对病人采取隔离措施，防止交叉感染。
四、隔离预防措施：在做好接触隔离的基础上采取以下方法1、单间隔离，同种病原体感染可住同室，床边悬挂蓝色隔离标记。
2、洗手或手消毒，接触病人前后用抗菌皂液洗手或快速手消毒剂擦手。
3、进入病房或接触病人时戴手套。
4、密切接触病人时穿隔离衣，以免沾污衣服。
5、离开病人床旁或房间把防护服脱下。
6、一般诊疗器械如：听诊器、体温表或血压计等专用。
7、尽可能使用一次性医疗用品，需重复使用必须消毒后再用，医疗废物严格分类收集，双袋密闭包扎，送医疗废物暂存处。
8、病房环境每天消毒，重症病人每班消毒，出院时终末消毒。
9、尽量限制探视人员并嘱探视者严格执行洗手或手消毒制度。
10、准确运送和管理病人检验标本。
11、连续3个标本（每次间隔24小时）均未培养出MRSA 或其他耐药菌，并经主管医师同意后方可解除隔离。
耐万古霉素场球菌（VRE）感染控制措施采用标准预防加接触预防。
所有工作人员、探视者或其他任何人员在进入病人房间时必须严格遵守标准预防和接触防护措施。
1、标准预防：应用于所有患者的预防措施，不管病人处于感染的还是疑似感染状态。
2、接触预防：作为标准预防的补充，以减少微生物通过直接或间接接触传播的危险性为目的的预防措施。
（接触传播：微生物通过手或仪器设备的直接接触传播或在感染者或定植者与易感染群之间间接接触传播。
）3、每天必须进行环境清洁，这是基础要求。
有污染用含有效氯1000mg/L的消毒剂擦拭。
4、工作人员接触感染或定植病人后要加强洗手，严格按照标准六步洗手法进行认真洗手；或用抑菌洗手液、速干手消毒剂。
耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的耐药机制及研究现状
其 中 内 酰胺 酶 为 ＭＲＳ 产 生 的 主 要 酶 类 。Ｂ内 酰 胺 酶 可 Ａ 一 以 特 异 性 的 的打 开 药 物分 子 结 构 中 的 口内 酰 胺 环 ， 其 完 全 一 使 失 去抗 菌 活 性 ； 可 与 某 些 抗 口内 酰 胺 酶 青 霉 素 结 合 ， 药 也 一 使 物 停 在 浆 膜 外 隙 ， 而 体 现 耐 药 性 。ＭＲ Ａ 的 主要 耐 药 机 制 从 Ｓ 是 由产 生 低 亲 和 力 的 Ｐ Ｐ ａ 代 替 了 其 他 Ｓ 菌 株 产 生 的 Ｂ ２， Ａ ＰＰ Ｂ 。Ｐ Ｐ ａ很 少 或 不 与 ０内 酰 胺 类 抗 生 素 结 合 ， 且 通 过 Ｂ２ 一 并
１ ＭＲＳ 的 流 行 特 点 Ａ
金 黄 色 葡 萄 球 菌 由 于 获 得 了 携 带 ｍｅＡ 基 因 的葡 萄 球 ｃ 菌 盒式 染 色 体 （ Ｃ ｍｅ） 并 通 过 其 不 断 积 累 抗 生 素 耐 药 基 Ｓ Ｃ ｃ，
因 。近 年 来 ， 内 外 学 者 已 从 金 黄 色 葡 萄 球 菌 中检 测 出 耐 消 国 毒 剂 的 菌 株 。 ＿ ６ 研 究 发 现 Ｓ Ｃ ｃ可 分 为 Ｉ、 Ｃ ｍｅ Ⅱ、 、 、 型 ， Ｃ ｍｅ Ⅲ Ⅳ Ｖ ＳＣ ｃ
其 所 产 生 的 内 酰 胺 酶 水 解 药 物 ， 使 在 ｐ 内 酰 胺 类 抗 生 素 即 一
［］ ａ ｅｓＨＦ Ｔｈ ｈ ｎ ｉｇｅ ｉｅ ｏｏ ｙｏ ｔｐ ｙｏｏｃ ｓａ — ３Ｃｈｍｂｒ ． ｅｃａ ｇｎ ｐｄｍｉｌｇ ｆｓａ ｈ ｌｃｃｕ ｕ ｒｕＥ］ ｍｅｇＩｆｃ Ｄｉ，０ １ ７ １ ８ ｅ ｓＪ ？Ｅ ｒ ｎｅｔ ｓ２ ０ ， ：７ ． ［ ］ 键 奇 ， 龙 洙 ． 葡 菌 调 节 基 因 ｍｅＡ 高 表 达 对 苯 锉 西 林 耐 药 ４连 崔 金 ｃ 性 的 影 响 ［］ 中 华 微 生 物 和 免疫 杂 志 ，０ ６ ２ （ ） ６ ３ Ｊ． ２ ０ ，６ ７ ：０ ． ［］ 支密 ， ５黄 仵 蕾． Ｓ ＭＲ Ａ对 消毒 剂 盒 常 用 抗 菌 药 的 耐 药 性 及 相 关
耐甲氧西林金黄色葡萄球菌耐药菌株的检出现状与分析
耐甲氧西林金黄色葡萄球菌耐药菌株的检出现状与分析作者：葛美层来源：《中外医疗》 2014年第4期葛美层河南省濮阳市中医院检验科，河南濮阳 457001[摘要] 目的探讨耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA）耐药菌株的检出率与当前耐药现状，为临床合理应用抗生素提供依据。
方法回顾式分析自2010年1月—2013年1月该院检验科分离检出的金黄色葡萄球菌耐药菌珠210珠，按照常规方法把耐药菌珠分离，并进行药敏试验。
统计分析耐甲氧西林金黄色葡萄球菌珠的分布和检出率、耐药率。
结果分离出耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA）91株，占43.3%（91/210）。
MRSA几乎全部菌珠对青霉素类、红霉素类、头孢菌素类、亚胺培南耐药率高，对万古霉素、替考拉宁、替加环素、利福平、复议新诺明、环丙沙星耐药率低。
对青霉素类敏感度为0，但是对替加环素、替考拉宁、万古霉素敏感度为100%。
结论万古霉素类为MRSA的首选药物。
临床用药以加强MRSA耐药检测，以药敏试验为前提，能有效保障临床应用抗生素的合理性。
[关键词] 金黄色葡萄球菌；耐甲氧西林金黄色葡萄球菌；耐药现状[中图分类号] R917 [文献标识码] A [文章编号] 1674-0742（2014）02（a）－0189-02[作者简介] 葛美层（1978.9-），女，河南省濮阳县人，本科，主管检验师，研究方向：临床检验。
耐甲氧西林金黄色葡萄球菌属于是属于金黄色葡萄球菌的一种，也是革兰氏阳性球菌，是1961年英国学者Jevons发现的一种新型的耐青霉素酶的耐药菌珠[1]。
自从这枚耐药菌珠发现在今天为止，感染遍及全球，成为医院获得性感染和社区获得性感染的重要致病菌。
而且耐药菌珠检出率越来越高，几乎对所有的青霉素类药物耐药；耐药面越来越广，累及到红霉素类，氨基苷类抗生素，对临床用药带来很大的困难，加强MRSA耐药性监测，对合理选择抗生素，有效控制耐药菌珠的流行和扩散具有重要意义。
耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)
期与CA-MRSA感染或寄植者有接触； (4)属于CA-MRSA寄植率增加的相关人群； (5)流感并发或流感后肺炎； (6)以前有反复发生的疖或皮肤脓肿病史或家族史（在
过去6个月内发生≥2次）
耐甲氧西林金黄色葡萄球菌肺炎诊治与预防专家共识
• 不均一耐药性 • 广谱耐药性 • 生长特殊性 • 固有耐药 • 获得性耐药
CHENLI
8
1 不均一耐药性
• MRSA菌落内细菌存在敏感和耐药 两个亚群，即一株MRSA中只有一小部 分对甲氧西林高度耐药，在50 μg/ml甲 氧西林条件下尚能生存，而菌落中大多
数细菌对甲氧西林敏感，在使用抗生素
后的几小时内大量敏感菌被杀死，但少
• 医院获得性肺炎 (hospital-acquired pneunlonia，HAP)，指 患者入院时不存在、也 不处于感染潜伏期，而 于入院≧48h在医院内 发生的肺炎，包括在医 院内获得感染而于出院 后48h内发病的肺炎。
• 耐甲氧西林金黄色葡萄 球菌肺炎诊治与预防专 家共识
CHENLI
13
• 社区相关性MRSA肺炎 （CA-MRSA肺炎）：又称 为社区获得性MRSA肺炎 （CommunityAcquired MRSA Pneumon ia），是指肺炎患者在 门诊或入院48 h内分离 出MRSA菌株，并且在1年 内无住院或与医疗机构 接触史，无MRSA感染或 定植史，无留置导管和 其他经皮医用装置使用 史
疗药物）及伤口处理者； （4）在医院或血液透析 门诊接受透析治疗者
化疗或伤口护理者；（4） 到医院或透析门诊定期 接受血液透析者。
• 耐甲氧西林金黄色葡萄球菌肺炎 诊治与预防专家共识
mrsa定义及判断标准
mrsa定义及判断标准
MRSA（Methicillin-Resistant Staphylococcus Aureus），即耐甲氧西林金黄色葡萄球菌，是一种对甲氧西林和其他类似药物具有耐药性的金黄色葡萄球菌菌株。
判断MRSA的标准包括以下几个方面：
1. 临床症状：与常规的金黄色葡萄球菌感染相似，可能包括红肿、疼痛、渗出液等。
但MRSA感染较常规金黄色葡萄球菌感染更难治疗。
2. 细菌培养：从感染部位的样本中进行培养，并鉴定是否为金黄色葡萄球菌。
通过抗生素敏感性试验判断细菌是否耐甲氧西林。
3. 分子生物学检测：通过PCR等分子生物学技术检测细菌的基因，确认是否为MRSA。
4. 抗生素敏感性检测：对细菌进行抗生素敏感性测试，确定其对常用抗生素的耐药性情况。
5. 判断耐药基因：通过检测细菌的耐药基因，确定其是否携带了与甲氧西林耐药相关的基因。
需要注意的是，MRSA的判断需要进行细菌培养和特殊检测方法，不能只依靠临床症状诊断。
耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的检测及耐药性分析
ＷＵ ｕ ａ Ｈｏ ｂ ｉ
【 摘
要】 目的 鉴定及 分析耐甲氧 西林金黄 色葡萄球 茼的耐药性 。方法
菌株按《 全国临床检验操作规程》 进行 培
养和鉴定。药物敏感试验采 用纸片扩散法。结果 检 出金黄 色葡 萄球 茵 ２６株 ， 中耐 甲氧 西林金 黄 色葡萄球 菌 ｌ０ ， ０ 其 ｌ株
现代医院 ２ １ ７月第 ｌ 第７期 ０ ０年 Ｏ卷
专 业 技 术 篇
Ｍ ｄ ｍ ｏｐｔ ｕ ０ ０Ｖ ｌ ０Ｎ ｏｅ Ｈ ｓｉｌ ｌ １ ｏ ｏ ａＪ ２ ｉ ７
耐 甲氧 西林 金 黄色 葡萄 球 菌 的检 测及 耐 药 性分 析
吴 侯 柏
ＤＥ ＣＴＯＮ ＡＮＤ Ｒ ＳＩＴ ＴＥ Ｉ Ｅ Ｓ ＡＮＣＥ ＡＮ Ｙ Ｓ ＯＦ Ｍ Ｅ ＡＬ ＳＩ ＴＨＩ Ｌ Ｉ —Ｒ ＳＩＴ Ｔ ＣＩ ＬＮ Ｅ Ｓ ＡＮ Ｓ 。 ＨＹ ＯＣ０ＣＣＵＳ ＡＵＲＥ １ ＡＰ Ｌ ＵＳ
ｄ ｉ１ ． ９ ９ ｉｉｓ ． ６ １—３ ２ ２ １ ． ７ ０ ０ ｏ ：０ ３ ６ ／ ．ｓｎ １ ７ ３ Ｘ． ０ ０ ０ ． ４
金黄色葡萄菌是临床最常见的致病菌之一 ， 在临床致病 菌 中分离率位 居前列 ， 中以耐 甲氧西林金 黄色葡 萄球菌 其
（ Ｓ 尤为重要 ， ＭＲ Ａ） 由于其多重耐药性和易造成医 院内感染 的暴发流行 ， 已成 为临床抗 感染 治疗 的难 点 ］ 。为 了解本 院耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的医院感染现状及其耐药性 ，
株 ， ６ ６ 。金黄色葡萄球 菌对 １ 占４ ．％ ３种抗菌 药物的药敏实
验结果 见表 １ 。
表 ｌ 金黄色葡萄球菌对各种抗菌药物的耐药率 （ ） ％
我们对分离 的金黄色葡萄球菌进行 了耐药性分析 。
MRSA耐药机制及检测方法
• MRSA，methicillin resistant Staphylococcus aureus（耐甲氧西林金黄色葡萄球菌）
1961年在英国由Jevons 首次发现，是引起医院 感染的重要病原菌之一
overview
• MRSA是携带mecA基因、编码低亲和力青霉 素结合蛋白，导致耐甲氧西林、所有头孢菌 素、碳青霉烯类、青霉素类+青霉素抑制剂 抗生素的葡萄球菌
•femC的作用引起谷氨 酰胺合成酶基因glnA
转录和活化及异谷氨
酰胺的酰胺化，其失
活时，糖肽的交叉连 接降低，MRSA对β-内
酰胺酶类抗生素耐药 性降低
femF基因的编码产物 涉及L-赖氨酸与胞壁酰 二肽链的连接，其突变 失活时引起的耐药性的 改变得具体机制还有待 研究。 femD和femE对细菌的 确切作用还未阐明
影响mecA表达的因素
• mecA基因的基本调节基因为mecI和mecR1
mecI基因编码mecI蛋白为抑制因子，当其
结合到mecA基因的启动子上时，抑制mecA基 因地转录，从而不能产生PBP2a
mecR1基因编码mecR1蛋白为诱导因子，
当其接触到诱导剂β-内酰胺类抗生素时被活化， 活化的mecR1蛋白能够去除mecI蛋白对mecA 基因地阻遏作用，使mecA编码产生PBP2a蛋 白
Detection for MRSA
传统方法
药物敏感试验方法 NCCLS推荐使用药 敏纸片法、苯唑西林 (oxacillin)盐琼脂筛 查法、β-内酰胺酶检 测、E-test 试验和试 管双倍稀释法等 缺点：易受培养基成 分影响，较耗时，且 错误应用抗生素会引 起更为严重耐药的耐 药菌株的出现
MALDI- TOF MS细菌指纹图谱法
胶东地区耐甲氧西林金黄色葡萄球菌耐药性的研究
（ ． 台 经 济 技 术 开 发 区 医 院 检 验科 ， １烟 山东 烟 台 ２ ４ ０ ； ． 岛市 市 立 医 院 ； ． 岛 大 学 医 学 院 附 属 医院 ） ６０６ ２青 ３青
摘要 ： 目的 了解 胶 东 地 区 耐 甲 氧 西 林 金 黄 色 葡 萄 球 菌 （ Ｓ 的 耐 药 情 况 。方 法 采 用 ＶＩ Ｅ ｏ ａ ｔ ＭＲ Ａ） Ｔ Ｋ２ ｃ ｍｐ ｃ 微
ｍｕ ｔ ａ ｔ ｉ ｔ ｓ ｉ ｈ ｏ ａ ｒ ａ Ｍ ｅｈ ｄ Ｔｈ ｅ ｔ ｉ ａｉ ｎ ａ ｄ ｄ ｕ ｕ ｃ ｐ ｉ ｉ ｔ ｅ ｔｗｅ ｅ ｐ ｒ ｏ ｍｅ ｙ ＶＩ ｌｉ ｎ ｉ ｏ ｉ ｎ ｔ ｅ ｌ ｃ ｌ ｅ ， ｔ ｏ ｓ ～ ｂ ｃ ａ ｅ ｉ ｎ ｉ ｃ ｔｏ ｎ ｒ ｇ ｓ ｓ ｅ ｔｂ ｌ ｙ ｔ ｓ ｒ ｅ ｆ ｒ ｄ ｂ ＴＥＫ２ ｄ ｆ ｉ ｃ ｍ ｐ ｃ ｕ ｏ ｔ ｃ ｏ ｉ ｌ ｎ ｌ ｓｓ ｓ ｓ ｅ Ｔｈ ＲＳ ｗｅ ｅ ｖ ｒｆ ｄ ｂ ａ ｏ ｉｉ ｉｋ ｄ ｆｕ ｉ ｎ ａ ｄ ｐ ｎ ｃｌ ｎ ｂ ｎ ｉ ｇ ｏ ａ ｔａ ｔ ｍａ ｉ ｍｉｒ ｂ ａ ａｙ ｉ ｙ ｔ ｍ． ｅ Ｍ ｃ ａ Ａ ｒ ｅ ｉｉ ｙ ｃ ｆ ｘ ｔ ｄ ｓ ｉｆ ｓ ｎ ｅ ｉｉ ｉ ｉ ｄ ｎ ｅ ｎ ｏ ｌ ｐ ｏ ｅｎ ２ ａ ｅ ｇ ｌ ｔｎ ｔ ｎ Ｔｈ ｒ ｔ ｒ ｍ ｙ ｉ ｎ ｕ ｉ ｌ ｌ ｄ ｍｙ ｉ ｅ ｉｔ ｎ ｓ ｔ ｓ ｅ ｙ Ｄ－ ｅ ｔ Ｒｅ ｕ ｔ Ｔｈ ｒ ｒ ｔ ｉ ａ ｌｔ ｘ ａ ｇ ｕ ｉａ ｉ ． ｅ ｅ ｙ ｈ ｏ ｃｎ ｉ ｄ ｃｂ ｅ ｃ ｉ ａ ｃｎ ｒ ｓｓ ａ ｃ ｗａ ｅ ｔ ｄ ｂ ｔ ｓ ． ｓ ｌ ｏ ｎ ｓ ｅｅ ａ ｅｎ ｉｎｆ ａ ｃ （ ｒ ｏ ｓｇ ｉ ｃ ｎ ｅ Ｐ＞ ０ ０ ） ｂ ｔ ｅ ａ ｏ ｉ ｎ ｄ ｓ ｉ ｕ ｉ ｎ ａ ｄ ｐ ｎ ｃｌ ｎ ｂ ｎ ｉ ｇ ｐ ｏ ｅｎ ２ ａ ｅ ｇ ｌ ｔｎ ｔｏ ｏ ｉ ．５ ｅ ｗｅ ｎ ｃ ｆ ｘ ｔ ｉｋ ｄ ｆ ｓｏ ｎ ｅ ｉｉ ｉ ｉ ｄ ｎ ｒ ｔ ｉ ａ ｌ ｔ ｘ ａ ｇ ｕ ｉ ａ ｉｎ ｆ ｒ ｉ ｆ ｌ
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
◆
和（或）ＶＡ筛选平 皿上有菌落生长
并且ＶＡ筛选平皿
可能是ＶＩＳＡ／ＶＲＳＡ
可能是ＶＩＳＡ／ＶＲＳＡ
报告很可能为ＶＳＳＡ４
上
核查菌株的纯度
上
进一步鉴定确认为金葡菌
｛ｉＬ…ＳＩ．金葡菌历古孑享节掌、 敏感：ＭＩＣ≤２ｍｇ／Ｌ
Ｌ ＶＳＳＡ Ｊ
中介：ＭＩＣ ４～８ｍｇ／Ｌ（ＶＩＳＡ） 耐药：ＭＩＣ／＞１６。。ｇ，Ｌ（ＶＲＳＡ）
Ｖａｌｅｎｔｉｎｅ ｌｅｕｋｏｃｉ—
群谱型分析法（ＰＡＰ）被公认为检测ｈＶＩＳＡ的金标 准，确认标准为ＶＳＳＡ：（ＡＵＧ，｛测菌株／ＡｕｃＭ∞比值）＜
０．９；ｈＶＩＳＡ：０．９≤（ＡＵＣ待测菌株／ＡＵＣ Ｍ。３比值）＜１．
３；ＶＩＳＡ：（ＡＵＣ待测菌株／ＡＵＣＭ。３比值）≥１．３ Ｌ“。然 而，ＰＡＰ费时费力、需要特殊仪器，不适合常规实验 室开展，当临床上遇到万古霉素治疗ＭＲＳＡ无效病 例时可用此方法检测以明确治疗方向。ＢＨＩＡ筛选 法的结果需要进一步用ＰＡＰ加以确认，不适合临床 确认ｈＶＩＳＡ，但适合于大规模筛查ｈＶＩＳＡ／ＶＩＳＡ。 我们以前的研究结果显示Ｌ５］，ＢＨＩＴ５（含替考拉宁５ ｍｇ／Ｌ的脑心浸液琼脂平皿）的敏感性为８８．９％，特 异性为１７．３％；ＢＨＩＶ６（含万古霉素６ ｍｇ／Ｌ的脑心 浸液琼脂平皿）的灵敏度和特异度则分别为３．７％ 和９８．８％。ＭＥＴ相比较于ＢＨＩＡ筛选法敏感性和 特异性较高，实验室问一致性也较好，但昂贵。目前 国际公认的折点为ＭＩＣ万占霉素≥８ ｍｇ／Ｌ且ＭＥＴ ＭＩＣ替考拉宁≥８ ｍｇ／Ｌ或ＭＥＴ ＴⅢＣ替考拉宁≥１２ ｍｇ／Ｉ］…。 （二）万古霉素中介耐药的金葡菌（ＶＩＳＡ）
ＶＩ—
ｄｉｎ，ＰＶＬ），可引起多发脓肿、坏死性肺炎等。ＣＡ— ＭＲＳＡ致病力相关的毒素还有肠毒素、皮肤剥脱毒 素和ＴＳＳ毒素一１等。因此ＣＡ—ＭＲＳＡ所致感染较 ＨＡ—ＭＲＳＡ凶险。与ＨＡ—ＭＲＳＡ相比，ＣＡ—ＭＲＳＡ 通常产ＰＶＬ毒素、携带Ⅳ、Ｖ或Ⅵ型ＳＣＣｍｅｃ基因 盒。尽管ＣＡ—ＭＲＳＡ有不同于ＨＡ—ＭＲＳＡ的一些 特征，但是ＣＡ—ＭＲＳＡ确认应遵从ＣＤＣ的定义，主 要是指分离自社区感染患者的ＭＲＳＡ。 我们可以采用ＰＣＲ检测ｐｖｌ基因，ｐｖｌ引物序
基金项目：本项目由国家自然科学基金（编号：３０９７１５７１）、北京市 自然科学基金（７１０２１３０）、首都医学发展科研基金（２００７— ２０１５），教育部新世纪优秀人才（ＮＣＥＴ １＠０２０５）提供部分 资助。 作者单位：１．北京大学人民医院检验科，北京
１０００４４；
ｍｇ／Ｌ或头孢西丁ＭＩＣ值≥８ ｍｇ／Ｌ报告ＭＲＳＡ。不 携带ｍｅｃＡ基因的ＭＲＳＡ很少见，但是苯唑西林的 ＭＩＣ≥４ ｍｇ／Ｌ，即使不携带ｍｅｃＡ基因也应该报告为 ＭＲＳＡ。质控菌株为金葡菌ＡＴＣＣ２９２１３。 （三）琼脂稀释法琼脂稀释法检测ＭＲＳＡ采用 的培养基是ＭＨＡ，检测苯唑西林、甲氧西林的ＭＩＣ值 需要添加２％ＮａＣｌ，其他操作和微量肉汤稀释法相同。
二、ＣＡ—ＭＲＳＡ的检测
Ｓ．ａ“ｒＰ“ｓ，ＶＲＳＡ）较少，但ｈＶＩＳＡ可能
更常见，尤其在治疗失败的持续性ＭＲＳＡ菌血症和 心内膜炎中。对于ｈＶＩＳＡ检测而言，目前还没有适 合常规实验室的标准方法。 检测ｈＶＩＳＡ的方法有脑心浸液琼脂（ｂｒａｉｎ
ｈｅａｒｔ ｉｎｆｕｓｉｏｎ
ａｇａｒ，ＢＨＩＡ）筛选法、宏量稀释Ｅ试
上
采用ＭＩＣ法重新检ＮＶＡ敏感性
上
保存菌株
通知感控、医师、当地医政部门和ｃ。ｃ可能为ＶＩｓＡ／ＶＲＳＡ
将ＶＡ
１ＶＡ代表万古霉素。
ＭＩＣ≥８
ｍｒ／Ｌ的金葡菌送往参考实验室进行ＭＩＣ确认和ｖａｎ基因的检测
２实验室采用自动化ＭＩＣ检测仪器不能确证ＶＲＳＡ，采用纸片扩散法应该加做商品化的ＢＨＩＡ ＶＡ琼脂筛选平皿（６ ｍｇ／Ｌ）。
Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ ｄｉａｇｎｏｓｉｓ ｏｆ
ｍｅｔｈｉｃｉｌｌｉｎ—ｒｅｓｉｓｔａｎｔ Ｓｆｎｐ ＺｙＺｏｃｏｃｃＨｓ
ａｕｒｅｕｓ
ＷＡＮＧ Ｈｕｉ，ＣＨＥＮ Ｈｏｎｇｂｉｎ．（Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ
ｐｉｔａｌ，Ｂｅｉｊｉｎｇ １０００４４，Ｃｈｉｎａ）
Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，Ｐｅｋｉｎｇ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｐｅｏｐｌｅ
（一）异质性万古霉素中介耐药的金葡菌（ｈｅｔｅ—
ｒｏｇｅｎｏｕｓ
ｖａｎｃｏｍｙｃｉｎ－ｉｎｔｅｒｍｅｄｉａｔｅ Ｓ．ａｕｒｅｕｓ，ｈＶＩＳＡ）
万方数据
４２２
中国感染与化疗杂志２０１１年１１月２（）日第１１卷第６期Ｃｈｉｎ Ｊ Ｉｎｆｅｃｔ Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒ，Ｎｏｖ
２０１１，Ｖｏｌ
１１，Ｎｏ
６
可接受的初始检测方法包括
图１
美国ＣＤＣ推荐的金葡菌万古霉素敏感性试验报告策略
（三）万古霉素耐药的金葡菌（ＶＲＳＡ）
依据
［３］
ｈｔｔｐ：｛｝Ⅶｗｗ．ｃｄｃ．ｇｏｖ／ｈａｉ／ｏｒｇａｎｉｓｉｍｓ／ｖｉｓａ—ｖｒｓａ／ｖｉｓａ—ｖｒｓａ．ｈｔ—
ｍ１．
ＣＬＳＩ的标准，万古霉素ＭＩＣ值≥１６ ｍｇ／Ｌ即可判 断为ＶＲＳＡ。万古霉素纸片扩散法仅仅对于检测含 ｖａｎＡ耐药基因的金葡菌（ＶＲＳＡ）是可靠的，在纸片
利用头孢西丁检测ｍｅｃＡ介导的苯唑西林耐药 所推荐的质控菌株是金葡菌ＡＴＣＣ２５９２３ ｍｅｃＡ阴 性（抑菌圈直径２３～２９ ｒａｍ）和金葡菌ＡＴＣＣ４３３００一 ｍｅｃＡ阳性（抑菌圈直径４２１
ｒａｍ）。
（二）微量肉汤稀释法微量肉汤稀释法用阳离 子校正ＭＨ肉汤（ＣＡＭＨＢ）作为培养基，检测苯唑西 林、甲氧西林的ＭＩＣ值需要添加２％ＮａＣｌ，３３～３５℃ 孵育２４ ｈ，透射光下判读结果。苯唑西林ＭＩＣ值≥４
流程见图１。
ＳＡ是指万古霉素的ＭＩＣ为４～８ ｍｇ／Ｌ。ＣＩ．ＳＩ采
用含６ ｍｇ／Ｌ万古霉素脑心浸液（ＢＨＩ）琼脂筛选万
古霉素ＭＩＣ≥８ ｍｇ／Ｌ的金葡菌。具体步骤如下： 制备含６ ｍｇ／Ｉ。万古霉素脑心浸液（ＢＨＩ）琼脂，将 待测菌株调至０．５麦氏单位细菌悬液，用加样枪吸 取１０肚Ｉ。菌悬液点种到制备好的ＢＨＩ琼脂板上，或 者是用菌悬液浸湿棉签并拧干多余的菌液，在制备 好的琼脂板上点种直径１０４１５ ｍｍ的面积，（３５± ２）℃空气孵育２４ ｈ。＞１个菌落或薄膜生长即为 阳性。进一步的试验是用确证的ＭＩＣ方法检测在 筛选平皿上生长的金葡菌对万古霉素的ＭＩＣ值。 此筛选法不能检测万古霉素ＭＩＣ为４ ｍｇ／Ｉ。的金 葡菌。对于金葡菌，在较长时间用万古霉素后，敏感 菌株可能变成ＶＩＳＡ，因此建议３～４ ｄ后应检测相 同部位分离出的金葡菌，看是否仍对万古霉素敏感。
上
ＭＩｃ法（加做ＶＡＩ筛选平皿）２
上
纸片扩散法联合ｖＡ筛选平皿３
上
ＶＡＭＩＣ≤２ｍｇ／Ｌ
上
ＶＡ ＭＩＣ≥４ ｍｇ／Ｌ
ＶＡ抑菌圈＜１５
ｍｍ
ＶＡ抑菌圈≥１５ 上有菌落生长
，
ｍｍ
ＶＡ抑菌圈≥１５ｍｍ 并且ｖＡ筛选平皿 上无菌落生长
◆
并且ＶＡ筛选平皿上 无菌落生长 ● 报告ｖｓｓＡ。
和（或）ＶＡ筛选平皿 上有菌落生长
４２０
中国感染与化疗杂志２０１１年１ １月２０日第１Ｉ卷第６期Ｃｈｉｎ Ｊ Ｉｎｆｅｃｔ Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒ，Ｎｏｖ
２０１１，ＶｏＩ
１１，Ｎｏ
６
・专家论坛・
甲氧西林耐药金黄色葡萄球菌的实验室诊断
王 辉１， 陈宏斌！
诊断，实验室；论坛 文章编号：１（）（）９—７７０８（２０１１）０６—０４２０—０３ 关键词：金黄色葡萄球菌，甲氧西林耐药； 中图分类号：Ｒ３７８．１１ 文献标志码：Ａ
验法（ｍａｃｒｏｄｉｌｕｔｉｏｎ Ｅ—ｔｅｓｔ，ＭＥＴ）和菌群谱型分析
法（ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎ ａｎａｌｙｓｉｓ ｐｒｏｆｉｌｉｎｇ，ＰＡＰ）。目前，菌
按照美国ＣＤＣ的定义，ＣＡ—ＭＲＳＡ是指在门诊 或人院４８ ｈ内检出的ＭＲＳＡ，并且此前无ＭＲＳＡ 感染或定植史，１年内无住院或住托儿所、护理院、 收容所史，无手术、透析及护理史、无留置导管和其 他经皮医用装置［２］。ＣＡ—ＭＲＳＡ通常产生由ｐｖｌ基 因编码的杀白细胞毒素（Ｐａｎｔｏｎ
Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒ，Ｎｏｖ
２０１１，Ｖｏｌ
１
１，Ｎｏ
６
４２１
（四）苯唑西林平皿筛选法
６
用含４％ＮａＣｌ和
ｈＶＩＳＡ被认为是ＶＩＳＡ的前体，它是指子代中含 有少量对万古霉素耐药性中介（ＭＩＣ≥４ ｍｇ／Ｌ）的 亚群，而其母代细菌对万古霉素敏感（ＭＩＣ≤２ ｍｇ／ Ｉ。）。目前，尽管ＶＩＳＡ（ｖａｎｃｏｍｙｃｉｎ—ｉｎｔｅｒｍｅｄｉａｔｅ Ｓ．ａＲｒｅＲｓ）和万古霉素耐药的金葡菌（ｖａｎｃｏｍｙｃｉｎ
歹０如下，ｐｖｌ—ＵＰ：５，＿ＡＴＣＡＴＴＡＧＧＴＡＡＡＡＴＧＴ—
ＣＴＧＧＡＣＡＴＧＡＴＣＣＡ一３’；ｐｖｌ—ＤＮ：５’一ＧＣＡＴＣ—
ＡＡＳＴＧＴＡＴＴＧＧＡＴＡＧＣＡＡＡＡＧＣ一３’，片段长度
４３３
ｂｐ。网站ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ．ｎｅｔ或
ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ＳＣＣｍｅｃ．ｏｒｇ／提供了ＳＣＣｍｅｃ的最新 信息和分型方法，在这个网站上我们可以找到合适 的基于多重ＰＣＲ的ＳＣＣｍｅｃ分型方法。 三、万古霉素敏感性下降的金葡菌（ｈＶＩＳＡ、 ＶＩＳＡ和ＶＲＳＡ）的检测 为了提高对低水平耐万古霉素金葡菌的检出和 保持实验室与临床的一致性，ＣＬＳＩ ２００６年修订了 万古霉素对金葡菌ＭＩＣ折点（见图１）［３］。纸片扩 散法检测万古霉素的药敏不可靠，不能将ＶＳＳＡ和 ＶＩＳＡ区分开，目前已取消此法中万古霉素的判定 折点。因此ＣＬＳＩ ２００９年推荐用ＭＩＣ法测定金葡 菌对万古霉素的敏感性，美国ＣＤＣ推荐的具体操作