肿瘤外泌体的提取与鉴定
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［４１］ ＶｉｎｃｅｎｚｉＥ，ＲｏｓｓｉＡ，Ｚｏｃｃｏｌｉ，ｅｔａｌ．Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｎｇｔｕｍｏｒｃｅｌｌｉｎｓｏｆｔ ｔｉｓｓｕｅｓａｒｃｏｍａｓｐａｔｉｅｎｔｓ［Ｊ］．ＡｎｎａｌｓｏｆＯｎｃｏｌｏｇｙ，２０１２，２３：４８９． （编校：文玉洁）
肿瘤外泌体的提取与鉴定
叶冬熳，于 韬
Ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎａｎｄｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎｏｆｔｕｍｏｒｅｘｏｓｏｍｅｓ
【Ａｂｓｔｒａｃｔ】Ｅｘｏｓｏｍｅｓａｒｅｖｅｓｉｃｌｅ－ｌｉｋｅｓｔｒｕｃｔｕｒｅｓｐｒｏｄｕｃｅｄｂｙｖａｒｉｏｕｓｃｅｌｌｓ，ｉｎｃｌｕｄｉｎｇｐｒｏｔｅｉｎｓ，ｌｉｐｉｄｓ，ｇｅｎｅｔｉｃｓｕｂ ｓｔａｎｃｅｓｓｕｃｈａｓｍＲＮＡ，ｍｉＲＮＡｓ，ｅｔｃ，ｃａｎｐａｒｔｉｃｉｐａｔｅｉｎｔｈｅｏｃｃｕｒｒｅｎｃｅ，ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ，ｉｎｖａｓｉｏｎａｎｄｍｅｔａｓｔａｓｉｓｏｆ ｔｕｍｏｒｓ．Ｔｈｅｅｘｏｓｏｍｅｓｈａｖｅａｎｉｍｐｏｒｔａｎｔｅｆｆｅｃｔｏｎｔｈｅｅａｒｌｙｄｉａｇｎｏｓｉｓ，ｔｒｅａｔｍｅｎｔａｎｄｐｒｏｇｎｏｓｉｓｏｆｔｈｅｔｕｍｏｒ．Ａｃｃｏｒｄｉｎｇ ｔｏｔｈｅｉｒｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓ，ｅｘｏｓｏｍｅｓｃａｎｂｅｄｅｔｅｃｔｅｄｉｎｂｏｄｙｆｌｕｉｄｓ．Ｔｈｉｓａｒｔｉｃｌｅｗａｓｏｕｔｌｉｎｅｄｏｎｔｈｅｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ ｏｆｅｘｏｓｏｍｅｓ，ｓｅｖｅｒａｌｍｅｔｈｏｄｓｏｆｅｘｔｒａｃｔｉｏｎａｎｄｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎｏｆｅｘｏｓｏｍｅｓ． 【Ｋｅｙｗｏｒｄｓ】ｔｕｍｏｒｅｘｏｓｏｍｅｓ，ｅｘｏｓｏｍｅｓｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ，ｅｘｏｓｏｍｅｓｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ
目前我国癌症的发生率及致死率较高，近 ３０年来，中国 癌症在死因中构成比达到 ２２．３２％，死亡率达到 １３５．８８／１０ 万，其中常见的 肿 瘤 包 括：肺 癌、胃 癌、肝 癌、食 管 癌、结 直 肠 癌、胰腺癌、乳腺 癌、脑 瘤、白 血 病、淋 巴 瘤，占 全 部 癌 症 死 亡 的 ８４．２７％［１］。而目前诊断癌症的检查方法，主要是影像学 检查、实验室检查、活组织检查等，而多数患者就诊时已为晚
期。目前，一种更为精确的可以用来进行癌症的早期诊断的 检查方法受到国内外学者们的关注，即外泌体检测。外泌体 近年来成为学者们研究的热点，它对于肿瘤的早期发现、诊 断、预后监测治 疗 上 都 有 着 重 大 的 意 义。那 么，如 何 提 取 外 泌体并进行检测鉴定在研究过程中也变得尤为重要，本文就 外泌体的提取及鉴定方法作简要综述。 １ 外泌体介绍
【收稿日期】 ２０１８－０１－０５ 【修回日期】 ２０１８－０２－０５ 【作者单位】 中国医科大学肿瘤医院 辽宁省肿瘤医院超声科，辽宁
沈阳 １１００４２ 【作者简介】 叶冬熳（１９９３－），女，辽 宁 丹 东 人，在 读 硕 士，主 要 从
事肿瘤相关的超声诊断研究工作。Ｅ－ｍａｉｌ：ｃｍｕ＿ｙｄｍ ＠１６３．ｃｏｍ 【通讯作者】 于韬（１９７３－），男，吉林人，主任医师，硕士生导师，主 要从事肿瘤的医学影像诊断与介入治疗研究工作。Ｅ －ｍａｉｌ：ｙｕｔａｏ＠ｃａｎｃｅｒｈｏｓｐ－ｌｎ－ｃｍｕ．ｃｏｍ
现代肿瘤医学 ２０１８年 １０月 第 ２６卷第 ２０期 ＭＯＤＥＲＮＯＮＣＯＬＯＧＹ，Ｏｃｔ２０１８，ＶＯＬ２６，Ｎｏ２０
·３３４１·
ｔｙｒｏｓｉｎｅｈｙｄｒｏｘｙｌａｓｅｍＲＮＡｆｏｒｓｅｎｓｉｔｉｖｅｄｅｔｅｃｔｉｏｎｏｆｎｅｕｒｏｂｌａｓｔｏ ｍａｃｅｌｌｓｉｎ ｂｌｏｏｄ ａｎｄ ｂｏｎｅｍａｒｒｏｗ［Ｊ］．ＣｌｉｎｉｃａｌＣｈｅｍｉｓｔｒｙ， ２００３，４９（１）：１０４－１１２． ［３９］ ＨａｒｏｕａｋａＲ，ＫａｎｇＺ，ＺｈｅｎｇＳＹ，ｅｔａｌ．Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｎｇｔｕｍｏｒｃｅｌｌｓ：Ａｄ ｖａｎｃｅｓｉｎｉｓｏｌａｔｉｏｎａｎｄａｎａｌｙｓｉｓ，ａｎｄｃｈａｌｌｅｎｇｅｓｆｏｒｃｌｉｎｉｃａｌａｐｐｌｉ ｃａｔｉｏｎｓ［Ｊ］．Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ＆ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ，２０１４，１４１（２）：２０９－ ２２１．
ＭｏｄｅｒｎＯｎｃｏｌｏｇｙ２０１８，２６（２０）：３３４１－３３４４
【指示性摘要】外泌体是由各种细胞产生的囊泡样结构，包含蛋白质、脂质、遗传物质如 ｍＲＮＡ、ｍｉＲＮＡ等，能 参与到肿瘤的发生、发展、侵袭、转移中。外泌体对于肿瘤的早期诊断、治疗、预后检测均有重要的作用。根 据其生物学特性，外泌体可以在体液中检测到，本文就外泌体的收集、提取及鉴定外泌体的方法进行概述。 【关键词】肿瘤外泌体；外泌体提取；外泌体鉴定 【中图分类号】Ｒ７３０．４ 【文献标识码】Ａ ＤＯＩ：１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１６７２－４９９２．２０１８．２０．０４２ 【文章编号】１６７２－４９９２－（２０１８）２０－３３４１－０４
［４０］ ＷａｒｄＫ，ＡｍａｙａＣ，ＶｅｒｍａＫ，ｅｔａｌ．Ｅｐｉｔｈｅｌｉａｌｃｅｌｌａｄｈｅｓｉｏｎｍｏｌｅ ｃｕｌｅｉｓｅｘｐｒｅｓｓｅｄｉｎａｓｕｂｓｅｔｏｆｓａｒｃｏｍａｓａｎｄｃｏｒｒｅｌａｔｅｓｔｏｔｈｅｄｅ ｇｒｅｅｏｆｃｙｔｏｌｏｇｉｃａｌａｔｙｐｉａｉｎｌｅｉｏｍｙｏｓａｒｃｏｍａｓ［Ｊ］．Ｍｏｌｅｃｕｌａｒａｎｄ ＣｌｉｎｉｃａｌＯｎｃｏｌｏｇｙ，２０１５，３（１）：３１－３６．
１９８６年，外泌体最早被发现于网织红细胞上清液中，呈 囊泡样结构［２］。很多细胞都可以分泌外泌体，如血细胞、树 突状细胞、内皮细胞、神经细胞、肿瘤细胞等，外泌体被认为 是细胞间进行交流、交换信息的重要介质，这也是它能影响 肿瘤生长的重要生物学基础，外泌体含有蛋白、脂类物质，遗 传物质如 ｍＲＮＡ、ｍｉｃｒｏＲＮＡ、ＤＮＡ片 段 等［３，４］。肿 瘤 细 胞 分 泌的外泌体参与肿瘤发展的多个方面，包括肿瘤的侵袭、逃 避外泌体收集
ＹｅＤｏｎｇｍａｎ，ＹｕＴａｏ
ＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＤｉａｇｎｏｓｔｉｃＵｌｔｒａｓｏｕｎｄ，ＣａｎｃｅｒＨｏｓｐｉｔａｌｏｆＣｈｉｎａＭｅｄｉｃａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，ＬｉａｏｎｉｎｇＣａｎｃｅｒＨｏｓｐｔｉａｌ＆Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ，ＬｉａｏｎｉｎｇＳｈｅｎｙ ａｎｇ１１００４２，Ｃｈｉｎａ．
肿瘤外泌体的提取与鉴定
叶冬熳，于 韬
Ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎａｎｄｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎｏｆｔｕｍｏｒｅｘｏｓｏｍｅｓ
【Ａｂｓｔｒａｃｔ】Ｅｘｏｓｏｍｅｓａｒｅｖｅｓｉｃｌｅ－ｌｉｋｅｓｔｒｕｃｔｕｒｅｓｐｒｏｄｕｃｅｄｂｙｖａｒｉｏｕｓｃｅｌｌｓ，ｉｎｃｌｕｄｉｎｇｐｒｏｔｅｉｎｓ，ｌｉｐｉｄｓ，ｇｅｎｅｔｉｃｓｕｂ ｓｔａｎｃｅｓｓｕｃｈａｓｍＲＮＡ，ｍｉＲＮＡｓ，ｅｔｃ，ｃａｎｐａｒｔｉｃｉｐａｔｅｉｎｔｈｅｏｃｃｕｒｒｅｎｃｅ，ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ，ｉｎｖａｓｉｏｎａｎｄｍｅｔａｓｔａｓｉｓｏｆ ｔｕｍｏｒｓ．Ｔｈｅｅｘｏｓｏｍｅｓｈａｖｅａｎｉｍｐｏｒｔａｎｔｅｆｆｅｃｔｏｎｔｈｅｅａｒｌｙｄｉａｇｎｏｓｉｓ，ｔｒｅａｔｍｅｎｔａｎｄｐｒｏｇｎｏｓｉｓｏｆｔｈｅｔｕｍｏｒ．Ａｃｃｏｒｄｉｎｇ ｔｏｔｈｅｉｒｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓ，ｅｘｏｓｏｍｅｓｃａｎｂｅｄｅｔｅｃｔｅｄｉｎｂｏｄｙｆｌｕｉｄｓ．Ｔｈｉｓａｒｔｉｃｌｅｗａｓｏｕｔｌｉｎｅｄｏｎｔｈｅｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ ｏｆｅｘｏｓｏｍｅｓ，ｓｅｖｅｒａｌｍｅｔｈｏｄｓｏｆｅｘｔｒａｃｔｉｏｎａｎｄｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎｏｆｅｘｏｓｏｍｅｓ． 【Ｋｅｙｗｏｒｄｓ】ｔｕｍｏｒｅｘｏｓｏｍｅｓ，ｅｘｏｓｏｍｅｓｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ，ｅｘｏｓｏｍｅｓｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ
目前我国癌症的发生率及致死率较高，近 ３０年来，中国 癌症在死因中构成比达到 ２２．３２％，死亡率达到 １３５．８８／１０ 万，其中常见的 肿 瘤 包 括：肺 癌、胃 癌、肝 癌、食 管 癌、结 直 肠 癌、胰腺癌、乳腺 癌、脑 瘤、白 血 病、淋 巴 瘤，占 全 部 癌 症 死 亡 的 ８４．２７％［１］。而目前诊断癌症的检查方法，主要是影像学 检查、实验室检查、活组织检查等，而多数患者就诊时已为晚
期。目前，一种更为精确的可以用来进行癌症的早期诊断的 检查方法受到国内外学者们的关注，即外泌体检测。外泌体 近年来成为学者们研究的热点，它对于肿瘤的早期发现、诊 断、预后监测治 疗 上 都 有 着 重 大 的 意 义。那 么，如 何 提 取 外 泌体并进行检测鉴定在研究过程中也变得尤为重要，本文就 外泌体的提取及鉴定方法作简要综述。 １ 外泌体介绍
【收稿日期】 ２０１８－０１－０５ 【修回日期】 ２０１８－０２－０５ 【作者单位】 中国医科大学肿瘤医院 辽宁省肿瘤医院超声科，辽宁
沈阳 １１００４２ 【作者简介】 叶冬熳（１９９３－），女，辽 宁 丹 东 人，在 读 硕 士，主 要 从
事肿瘤相关的超声诊断研究工作。Ｅ－ｍａｉｌ：ｃｍｕ＿ｙｄｍ ＠１６３．ｃｏｍ 【通讯作者】 于韬（１９７３－），男，吉林人，主任医师，硕士生导师，主 要从事肿瘤的医学影像诊断与介入治疗研究工作。Ｅ －ｍａｉｌ：ｙｕｔａｏ＠ｃａｎｃｅｒｈｏｓｐ－ｌｎ－ｃｍｕ．ｃｏｍ
现代肿瘤医学 ２０１８年 １０月 第 ２６卷第 ２０期 ＭＯＤＥＲＮＯＮＣＯＬＯＧＹ，Ｏｃｔ２０１８，ＶＯＬ２６，Ｎｏ２０
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ｔｙｒｏｓｉｎｅｈｙｄｒｏｘｙｌａｓｅｍＲＮＡｆｏｒｓｅｎｓｉｔｉｖｅｄｅｔｅｃｔｉｏｎｏｆｎｅｕｒｏｂｌａｓｔｏ ｍａｃｅｌｌｓｉｎ ｂｌｏｏｄ ａｎｄ ｂｏｎｅｍａｒｒｏｗ［Ｊ］．ＣｌｉｎｉｃａｌＣｈｅｍｉｓｔｒｙ， ２００３，４９（１）：１０４－１１２． ［３９］ ＨａｒｏｕａｋａＲ，ＫａｎｇＺ，ＺｈｅｎｇＳＹ，ｅｔａｌ．Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｎｇｔｕｍｏｒｃｅｌｌｓ：Ａｄ ｖａｎｃｅｓｉｎｉｓｏｌａｔｉｏｎａｎｄａｎａｌｙｓｉｓ，ａｎｄｃｈａｌｌｅｎｇｅｓｆｏｒｃｌｉｎｉｃａｌａｐｐｌｉ ｃａｔｉｏｎｓ［Ｊ］．Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ＆ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ，２０１４，１４１（２）：２０９－ ２２１．
ＭｏｄｅｒｎＯｎｃｏｌｏｇｙ２０１８，２６（２０）：３３４１－３３４４
【指示性摘要】外泌体是由各种细胞产生的囊泡样结构，包含蛋白质、脂质、遗传物质如 ｍＲＮＡ、ｍｉＲＮＡ等，能 参与到肿瘤的发生、发展、侵袭、转移中。外泌体对于肿瘤的早期诊断、治疗、预后检测均有重要的作用。根 据其生物学特性，外泌体可以在体液中检测到，本文就外泌体的收集、提取及鉴定外泌体的方法进行概述。 【关键词】肿瘤外泌体；外泌体提取；外泌体鉴定 【中图分类号】Ｒ７３０．４ 【文献标识码】Ａ ＤＯＩ：１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１６７２－４９９２．２０１８．２０．０４２ 【文章编号】１６７２－４９９２－（２０１８）２０－３３４１－０４
［４０］ ＷａｒｄＫ，ＡｍａｙａＣ，ＶｅｒｍａＫ，ｅｔａｌ．Ｅｐｉｔｈｅｌｉａｌｃｅｌｌａｄｈｅｓｉｏｎｍｏｌｅ ｃｕｌｅｉｓｅｘｐｒｅｓｓｅｄｉｎａｓｕｂｓｅｔｏｆｓａｒｃｏｍａｓａｎｄｃｏｒｒｅｌａｔｅｓｔｏｔｈｅｄｅ ｇｒｅｅｏｆｃｙｔｏｌｏｇｉｃａｌａｔｙｐｉａｉｎｌｅｉｏｍｙｏｓａｒｃｏｍａｓ［Ｊ］．Ｍｏｌｅｃｕｌａｒａｎｄ ＣｌｉｎｉｃａｌＯｎｃｏｌｏｇｙ，２０１５，３（１）：３１－３６．
１９８６年，外泌体最早被发现于网织红细胞上清液中，呈 囊泡样结构［２］。很多细胞都可以分泌外泌体，如血细胞、树 突状细胞、内皮细胞、神经细胞、肿瘤细胞等，外泌体被认为 是细胞间进行交流、交换信息的重要介质，这也是它能影响 肿瘤生长的重要生物学基础，外泌体含有蛋白、脂类物质，遗 传物质如 ｍＲＮＡ、ｍｉｃｒｏＲＮＡ、ＤＮＡ片 段 等［３，４］。肿 瘤 细 胞 分 泌的外泌体参与肿瘤发展的多个方面，包括肿瘤的侵袭、逃 避外泌体收集
ＹｅＤｏｎｇｍａｎ，ＹｕＴａｏ
ＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＤｉａｇｎｏｓｔｉｃＵｌｔｒａｓｏｕｎｄ，ＣａｎｃｅｒＨｏｓｐｉｔａｌｏｆＣｈｉｎａＭｅｄｉｃａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，ＬｉａｏｎｉｎｇＣａｎｃｅｒＨｏｓｐｔｉａｌ＆Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ，ＬｉａｏｎｉｎｇＳｈｅｎｙ ａｎｇ１１００４２，Ｃｈｉｎａ．