ABO血型正、反定型

ABO血型正、反定型操作规程

[目的]

保证ABO血型鉴定准确，确保临床输血安全。

[适用范围]

XXX医院输血科

[职责]

具有专业技术的工作人员主要负责本院输血（或备血）标本的ABO血型鉴定（但只对该单份标本负责）。

[相关文件]

试剂采购、保存和使用管理程序

设备采购、使用管理程序

消毒与清洁管理程序

标本采集、运输、保存和报废管理程序

紧急用血管理程序

[相关记录]

仪器设备的采购、使用和维护记录

仪器的温度记录

恒温水温箱的换水和消毒记录

消毒液的配置记录

清洁消毒记录

试剂采购、使用记录

标本交接和报废记录

紧急用血记录

[实验原理]

ABO血型是根据红细胞表面存在的凝集原决定的。存在A凝集原的称为A型，存在B凝集原的称为B型。而血清中还存在凝集素。当A凝集原与抗A凝集素相遇或B 凝集原与抗B凝集素相遇时，会发生红细胞凝集反应。一般A型血清中含有抗B凝集素，B型血清中含有抗A凝集素，因此可以用标准血清中的凝集素与被测者的红细胞反应（称为正定型），用标准红细胞与被测者血清中的凝集素反应（称为反定型），以确定其ABO血型。

[仪器器械]

玻璃试管、玻片、记号笔、一次性塑料滴管、显微镜、普通离心机、试管架、恒温水温箱、试剂保存冰箱、标本保存冰箱。

[试剂]

抗A标准血清、抗B标准血清、A型标准红细胞、B型标准红细胞、O型标准红细胞、生理盐水。以上试剂均为有合格证件的正品。

[标本收集与处理]

1．受检者血清：采集受检者静脉血2~3ml，经1000r/min离心1分钟或室温静置1小时后取上清。

2．2~5%的受检者红细胞：采集受检者静脉血或末梢血，用生理盐水制成2~5％红细胞盐水悬液备用，制备方法见本节质量控制和注意事项。

3．标本出现中度以上溶血者，为不合格标本，不能用于检测。

[实验方法与步骤]

1.ABO血型的正定型（试管法）：

⑴、取2支试管，分别标上抗A和抗B；

⑵、制备待测标本2~5%的红细胞悬液（取1支试管，加入2ml生理盐水，再加入1滴待测标本红细胞，混匀备用）；

⑶、在抗A管中加入2滴抗A标准血清，在抗B管中加入2滴抗B标准血清；

⑷、在抗A和抗B管中分别加入1滴已制备好的待测标本2~5%红细胞悬液；

⑸、混匀后，立即对称放入离心机中进行1000r/min离心1分钟，或室温静置1小时，再轻轻摇动试管，使沉于管底的红细胞浮起，先肉眼观察有无凝集现象，如内眼不见凝集，应将反应物倒于玻片上，再以低倍镜检查。

⑹根据有无凝集现象判定结果如下。注意凝集强

度，此有助于A、B亚型、类B或cisAB的发现。

ABO血型抗A标准血清抗B标准血清

A型＋－

B型－＋

O型－－

AB型＋＋

⑺凝集强度判断标准

4十红细胞凝集成一大块，血清清晰透明。

3十红细胞凝集成数小块，血清尚清晰。

2十红细胞凝块分散成许多小块，见到游离红细胞。

1十肉眼可见大颗粒，周围有较多游离红细胞。

土镜下可见数个红细胞凝集在一起，周围有很多游离红细胞。

MF 混合凝集外观(mixed field)是指镜下可见少数红细胞凝集，而极大多数红细胞仍呈分散分布。

一表示阴性，镜下未见凝集，红细胞均匀分布。

2.ABO血型的反定型（试管法）：

⑴、取3支试管，分别标上A、B和O；

⑵、在3支试管中分别加入2滴待测标本的血清；

⑶、将ABO标准红细胞轻轻地充分混匀后，在A管中加入1滴A型标准红细胞，在B管中加入1滴B型标准红细胞，在O管中加入1滴O型标准红细胞；

⑷、混匀后，对称放入离心机中进行1000r/min离心1分钟（或3400 r/min离心15秒）；

⑸、取出后，先观察是否溶血（溶血可能是阳性结果，或者是细菌污染），再轻轻摇动试管，肉眼观察有无凝集现象，肉眼不易分辨的用显微镜观察；

⑹根据有无凝集现象判定结果如下。注意凝集强度，此有助于A、B亚型、类B 或cisAB的发现。

⑺凝集强度判断标准（同ABO血型的试管法正定型）

[质量控制和注意事项]

1、分型标准血清试剂必须为三证齐全的合格产品，质量性能符合要求，且在有效期内使用。试剂开封后必须贴上注有开封日期和开封人的标签，使用后应及时置于2~8℃专用冰箱中保存，以免细菌污染和变质而影响试验结果。试剂开封后有效期为一周。

2、商用分型标准红细胞试剂必须为三证齐全的合格产品，质量性能符合要求，且在有效期内使用；自制分型标准红细胞试剂必须以3个健康者同型新鲜红细胞混和，用生理盐水洗涤1~3次，以除却存在于血清中的抗体及可溶性抗原，再制成2~5%的红细胞悬液备用。试剂开封或制备后必须贴上注有开封或制备日期和开封人或制备人的标签，使用后应及时置于2~8℃专用冰箱中保存，以免细菌污染和变质而影响试验结果。试剂开封或制备后有效期为一周。

3、生理盐水启用后，有效期为二周。

4、所有试剂在使用时，必须检查是否有浑浊、变色、凝集等变质现象；凡可疑者，必须更换新的试剂进行检测。若分型标准血清使用时间较长后，最好用已知的ABO标准红细胞检查结果是否与已知的血型相符；若分型标准红细胞使用时间较长后，最好用已知的分型标准血清检查结果是否与已知的血型相符，以防标准血清或红细胞制品污染、变质失效而造成鉴定错误。

5、试管、滴管和玻片必须清洁干燥，防止溶血。

6、操作方法应按规定进行，一般应先加血清，后加红细胞悬液，以便容易核实是否漏加血清。

7、IgM抗-A和抗-B与相应红细胞的反应温度以4℃为最强，但为了防止冷凝集