母乳和奶粉中脂肪酸的测定

0.4
ND
96.89
74
0.1
41.56
269.3
74
0.1
228.40 270.2
74
0.1
1.00
3.434
74
0.1
679.64 1544
74
0.1
1.78
5.293
74
0.1
524.66 795.9
55
0.2
8.32
32.90
74
0.1
20.13
54.14
55
0.2
ND
ND
74
0.1
2534.27 2824
2%
C21:0
31.75
2%
C20:4n6 32.02
2%
C20:3n3 32.43
2%
C20:5
33.58
2%
C22:0
34.21
4%
C22:1n9 34.65
2%
C22:2
35.80
2%
C23:0
36.59
2%
C24:0
38.96
4%
C22:6ns 39.16
2%
C24:1
39.43
2%
总量
74
后，用气相色谱-质谱联用仪测定脂肪酸甲酯的含量，全扫描方式采集数据， 单个离子进行定量。结果表明该方法线性良好，方法简便快速。
引言
匀，5000转/分钟离心约5 min。取上清液作为试液，气相 色谱质谱仪测定。
样品的测定
上述衍生后的样品中，分析物浓度范围较宽，样品 直接进样、稀释10倍、100倍、1000倍后分别进样，各 组分分别以适合稀释倍数的样品进行定量。用Thermo Scientific全新一代的ISQ气相色谱-质谱联用仪进行全扫描 检测。样品中脂肪酸甲酯可以用保留时间、质谱图进行定 性分析，利用各物质特征离子峰面积进行外标法定量。
其进行完全分离分析常用的色谱柱为100 m的极性柱。但 60 mL水中，按此比例换算，各检测结果列于表1。
100 m的色谱柱分析时间较长，分析成本也较高，本方法
表1 母乳和奶粉中脂肪酸含量检测结果（mg/Kg）
化合物 保留时间 该组分在标 定量离子 仪器检测限 母乳样品
准品中的含量
（mg/L）
奶粉I
6.635
14.08
79
0.8
7.522
3.784
55
0.8
84.87
56.95
12554 13034
奶粉II 奶粉III
ND 5.508 8.675 0.1255 30.44 0.4212 63.13 3.129 6.444
ND 2140 17.62 9.889 5.749 514.3 4901 3173 ND 36.92 ND 444.4 20.43 2.706 2.668 57.22 2.233 ND 1.920 12.57 8.550 0.0611 ND 22.44 ND 8.876 11502
结论
实验结果表明，赛默飞世尔科技的全新一代ISQ单四 极杆气质联用仪可以较好的应用于母乳和奶粉样品中脂肪 酸的检测。
C22 : 6ns是二十二碳六烯酸（Docosahexaenoic Acid，DHA）， C20 : 5是二十碳五烯酸 （EicosaPentaenoic acid，EPA），C20 : 4n6是花生四烯 酸（Arachidonic acid，ARA）。研究表明母乳中的DHA 有益于婴儿的大脑和眼睛。DHA在视神经细胞及视网膜
标准物质的浓度为横坐标，以各标准物质的特征离子峰面 中两种组分的含量做为总量（C18：1n9）计算。
积为纵坐标，绘制标准曲线，得到各种脂肪酸甲酯的保留 时间、定量离子（表1）。
采用本方法测定了母乳和市售三种奶粉的脂肪酸含 量，为便于比较脂肪酸的含量，奶粉中的脂肪酸含量以冲
待检测的36种脂肪酸甲酯中包含着同分异构体，对 调好的奶粉溶液来计。按照奶粉冲调说明，8.5 g奶粉溶于
母乳样品 奶粉I 奶粉II 奶粉III
中长链饱和脂肪酸 长链饱和脂肪酸 单不饱和脂肪酸 多不饱和脂肪酸
7.57 31.11 38.13 23.19
16.76 34.27 31.36 17.61
0.39 24.89 43.04 31.69
14.84 16.15 48.90 20.11
组织中的含量高达40%-47%，如果食物中缺乏DHA， 可使视网膜组织中DHA含量下降，从而导致视力下降。 大部分婴儿配方奶粉中会添加这三种脂肪酸，研究表明 这三种脂肪酸对婴儿智力和视力发育起到关键作用。本 方法检测了市售三个品牌的III段奶粉中的脂肪酸含量， 结果见表1。由表1的结果可见，这三种脂肪酸在母乳 中的含量远远高于在III段奶粉中的含量。世界卫生组织 （WHO）坚持推荐有条件的妇女采用母乳喂养婴儿。
样品前处理方法
称取0.5 g待测样品于15 mL干燥螺口玻璃管中，加入 5.0 mL甲苯，加入10%乙酰氯甲醇溶液6.0 mL，旋紧螺旋 盖，振荡混合后于80 ℃±1 ℃水浴中放置2 h，期间每隔 20 min取出振摇一次，水浴后取出冷却至室温。将反应后 的样液转移至50 mL离心管中，分别用3.0 mL碳酸钠溶液 清洗玻璃管三次，合并碳酸钠溶液于50 mL离心管中，混
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脂肪是我们维持生命不可缺少的营养物质和基础代谢产物，它是机体内主 要的能量储存形式。研究表明，脂肪的营养价值由脂肪酸决定。母乳是婴儿最 好的食物。母乳中所含有的各种营养元素其种类、含量以及配比都是宝宝需要 的“黄金标准”。
母乳中脂肪酸的种类很多，中链及中长链饱和脂肪酸；长链饱和脂肪酸 （如棕榈酸）；单不饱和脂肪酸（如油酸）；多不饱和脂肪酸（如亚油酸， ARA,DHA，亚麻酸）。构成百分比分别为12.8%、29.6%、38.1%和19.5%。 这种构成完全是婴幼儿期对脂肪酸的特定需要。虽然现在配方奶粉在不断努力 朝着母乳化的方向发展，人们也越来越重视添加脂肪酸的种类、含量以及配比 接近母乳，但是普通婴幼儿奶粉还是普遍存在脂肪酸吸收率低的问题。本文测 定了母乳和奶粉中的脂肪酸的含量，计算其构成比例并进行比较。
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55
0.4
281.1
72.79
74
0.2
23.72
33.52
55
0.4
15.92
13.52
74
0.2
735.2
672.9
55
0.4
4378
3925
67
0.8
2396
1982
55
0.8
ND
ND
67
0.2
25.72
39.24
55
0.8
22.48
ND
74
0.2
179.7
227.8
55
0.2
66.08
34.50
图1 脂肪酸甲酯混合标准溶液的总离子流图
2
用标准样品配制成总浓度分别为2 µg/mL, 10 µg/mL, 采用30 m的WAX固定相极性柱，对36种脂肪酸甲酯也能
20 µg/mL, 50 µg/mL, 100 µg/ml的系列标准工作液，进样 达到较理想的分离，其中仅有两种同分异构体（C18：
1 µL，然后按照以上所述的测定方法进行GC-MS测定，以 1n9t 和C18：1n9c）未达到完全分离，因此在分析结果
脂肪酸根据碳链长短和饱和度可分为如下四类：中 链及中长链饱和脂肪酸（碳数≤12的饱和脂肪酸）；长链 饱和脂肪酸（碳数≥13的饱和脂肪酸）；单不饱和脂肪酸 （如油酸）；多不饱和脂肪酸（如亚油酸，ARA,DHA， 亚麻酸）。本文所检测的母乳样品和三个奶粉样品中脂 肪酸的成分百分比计算结果列于表2中。
表2 母乳和奶粉样品中脂肪酸构成百分比
C6:0
5.13
4%
C8:0
8.10
4%
C10:0
10.80
4%
C11:0
12.04
2%
C12:0
13.23
4%
C13:0
பைடு நூலகம்14.53
2%
C14:0
16.07
4%
C14:1
16.69
2%
C15:0
17.85
2%
C15:1
18.55
2%
C16:0
19.37
6%
C16:1
20.39
2%
C17:0
22.07
气相色谱-质谱条件：色谱柱TR-WAXMS, 30 m, 0.25 mm, 0.25 µm；载气为高纯氦气（纯度99.999%）； 流速1.2 mL/min。进样口为PTV进样口，进样模式PTV splitless，不分流时间：1 min。
柱温采用程序升温条件如下：60 ℃（保持 3 min）； 10 ℃/min 到160 ℃，3℃/min到250 ℃（保持5 min）。质 谱接口温度为250 ℃；EI电离，电子能量为70 eV；离子 源温度220 ℃；采用全扫描检测方式，质谱扫描范围为 35.00-350。
67
0.8
18.14
2.286
79
0.8
60.72
3.106
74
0.4
13.88
17.83
79
0.8
55.32
2.942
79
0.8
9.418
1.092
79
0.8
28.99
5.481
74
0.4
85.33
6.429
55
0.8
1.067
7.810
67
0.8
0.698
ND
74
0.8
16.94
14.42
74
0.8
Application Notes C_GCMS-5
母乳和奶粉中脂肪酸的测定
吕建霞 梁立娜 赛默飞世尔科技（中国）有限公司
关键词：母乳；奶粉；脂肪酸；GC-MS（气相色谱-质谱法） Key words：breast milk; milk powder; fatty acid; GC-MS
摘要： 以甲苯为溶剂，提取母乳和奶粉中的脂肪酸，经乙酰氯-甲醇进行甲酯化
2%
C17:1
22.62
2%
C18:0
24.41
4%
C18:1n9 24.82
6%
C18:2n6t 25.89
2%
C18:2n6c 26.07
2%
C18:3n6 26.60
2%
C18:3n3 27.45
2%
C20:0
29.27
4%
C20:1
29.71
2%
C20:2
30.85
2%
C20:3n6 31.50
41.12 325.2 228.4 0.4289 1679 1.348 475.1 2.548 3.605
ND 1355 14.31 5.384 4.864 497.2 7450 2728 ND 30.49 ND 326.8 24.11 1.677 1.639 72.48 1.204 ND 1.382 6.157 6.178 0.101 ND 27.01 ND 19.57 15333
结果与讨论
实验部分
标准样品中36种脂肪酸甲酯的色谱图如图1所示。
主要仪器设备与试剂
仪器：单四级杆气质联用仪，Trace GC Ultra ISQ，美 国ThermoFisher。
试剂：碳酸钠溶液，准确称取6 g无水碳酸钠，加水溶 解并定容至100 mL；甲苯，色谱纯；乙酰氯甲醇溶液：量 取40 mL甲醇于100 mL干燥的烧杯中，准确吸取5.0 mL乙酰 氯逐滴缓慢加入，不断搅拌，冷却后转移并定容至50 mL 干燥的容量瓶中；脂肪酸甲酯混合标准溶液，100 mg/L。