【医学】抗体制药-课件第三章

二、McAb制备的基本技术
（一）抗原的制备 制备针对特定抗原的单克隆抗体，首 先要制备用于免疫的适当抗原。 1、化学合成法制备高纯度的单一抗原 在已知抗原的化学组成和结构的情况下 进行。 2、由病原菌、病毒或肿瘤细胞制备 只能得到部分纯化，甚至是极不纯的 抗原混合物。
3、用整个细胞或病毒为免疫原刺激动物细 胞产生免疫反应 动物产生免疫反应后取其B淋巴细胞， B淋巴细胞融合杂交后，再经筛选、克隆化， 鉴别筛选出纯一的单克隆杂交瘤细胞系。
（二）免疫动物品系的选择 ①多采用与骨髓瘤细胞供体相同品系的动 物做为免疫动物。因种系距离越远，产生 的杂交瘤越不稳定。 常采用Bal B/C小鼠和Lou大鼠。 ②应考虑所选动物对所用抗原能否产生良 好的免疫应答，若不能，应改用其他品系 的小鼠或大鼠。
（三）动物免疫 1、体内免疫法 适用于抗原量多，免疫原性强的情况， 常用8~12周龄的雌性鼠。
1、抗体（Antibody，Ab）：指能与相应抗 原特异性结合的具有免疫功能的球蛋白。 抗体产生的原因：机体免疫系统因病 原菌、病毒感染，受抗原物质刺激后产生B 淋巴细胞，被活化的B淋巴细胞经增殖、分 化产生浆细胞，浆细胞合成和分泌抗体。
2、免疫球蛋白（Immunoglobulin，Ig）： 具有抗体活性及化学结构与抗体相似的球 蛋白统称为免疫球蛋白。 所有的抗体均是Ig，但并非所有的Ig都 是抗体。Ig是化学结构的概念，抗体是生 物学功能的概念。
（1）颗粒性抗原（细胞抗原） 免疫原性强，可不加佐剂，直接注入 腹腔刺激动物免疫。 ①初次免疫，腹腔注射107个细胞。 ②3周后，追加免疫1~2次，腹腔注射 1~5×106个在缓冲盐溶液中洗过的细胞。 ③融合前4~5天，静脉注射1~5×106个细 胞。
（2）可溶性抗原 ①按每只小鼠10~100µg抗原与福氏完全佐 剂等量混合皮下注射。 ②3~4周后，100µg抗原在福氏完全佐剂中 追加一次。 ③采集脾细胞前3天由静脉注射最后一次 100µg抗原。 因免疫后第3天B淋巴细胞的增殖率最 高，是处于迅速分裂期的细胞，有利于融 合后增殖。
二、临床实践中的作用
1、用于疾病的诊断 a、利用单克隆抗体检测与某些疾病相 关的抗原，辅助临床诊断。 b、用放射性标记的单克隆抗体进行肿 瘤显像，做免疫定位诊断。
2、McAb制剂用于疾病的治疗 a、针对分化抗原CD3的单克隆抗体对器官 移植排斥反应有显著的抑制效果。 b、以McAb作为载体的导向药物可对肿瘤 进行定向治疗。 近年来通过对McAb的改造，消除其鼠 源性（免疫原性）并降低其分子量，只保 留其同抗原特异性结合的活性，再用其制 备导向药物用于肿瘤治疗，进而提高了免 疫导向疗法的效果，使该领域得以迅速发 展，目前成为抗体应用研究的热点。
3、多克隆抗体：针对多种抗原决定簇的抗 体。 由于病原菌含有多种抗原决定簇的抗原 物质，由此刺激而产生的抗体制剂是多种 抗体的混合物（其产量低，难以满足临床 需要）。
4、单克隆抗体（Monoclonal Antibody， McAb）：采用B淋巴细胞杂交瘤技术，由 纯一的单克隆细胞系产生的，针对一个抗 原决定簇的，结构和特异性完全相同的高 纯度抗体称单克隆抗体。 特点： a、具有高度的特异性，均一性。 b、来源稳定，可大量生产，为抗体制备和 应用提供了全新的手段。
福氏完全佐剂是由矿物油、乳化剂和杀死 的分枝杆菌组成的油包水型的乳化佐剂， 对于刺激细胞免疫和某些实验性免疫尤其 有效。 为促进B淋巴细胞转化，提高脾细胞分泌抗 体的能力，可在注射抗原的同时加入细菌 脂多糖。
2、体外免疫 （1）特点 a、所用抗原量少（只需几µg），免疫 期短，仅4~5天，干扰因素少。 b、融合后产生的杂交瘤细胞不够稳定。 适用于不能采用体内免疫法的情况， 如制备人源性McAb；或者抗原的免疫原性 极弱且能引起免疫抑制时使用。
抗原 矿物油 ↓ ↓ 注射活鼠 注射BalB/c小鼠 刺激产生免疫反应 诱发产生骨髓瘤细胞 ↓ ↓制备 取鼠脾脏→ B淋巴细胞 × 骨髓瘤细胞(HGPR缺陷) ↓ ↓融合（PEG） 制取B淋巴细胞 分装多孔板选择性培（HAT） ↓ ↓亲株死亡 B淋巴细胞培养 杂交瘤细胞生长繁殖 ↓ ↓有限稀释、克隆化 制取多克隆抗体 分离出单克隆细胞系 → McAb
第二节 单克隆抗体的制备
单克隆抗体是将能产生抗体的B淋巴细胞与 具有无限增殖能力的骨髓细胞进行原生质 体融合，通过有限稀释法及克隆化使杂交 瘤细胞成为纯一的单克隆细胞系而产生的。
一、McAb制备的一般程序
B淋巴细胞 × 骨髓瘤细胞 ↓融合 杂交瘤细胞 ↓有限稀释 ↓克隆化 纯一的单克隆细胞系 ↓ McAb
第三章 Байду номын сангаас体制药
第一节 概述
一、抗体的概念 最早应用的预防和治疗传染病的抗体 药物为抗毒素血清（1890，Behring）。 1937年Tiselius等人用电泳法将血清蛋 白分为白蛋白、α-球蛋白、β-球蛋白、γ-球 蛋白（丙种球蛋白），并证明抗体活性主 要存在于丙种球蛋白组分。因此，在相当 一段时间内，丙种球蛋白成为抗体的同义 词。
（四）骨髓瘤细胞的来源和特性 1、来源 （1）骨髓瘤细胞的来源应同免疫动物的种 属一致，一般不选择产生自身免疫球蛋白 的细胞系。 （2）鼠类骨髓瘤细胞系主要来自于Bal B/C小鼠，少数来自于Lou大鼠。这些细胞 系能够在D-15或其他培养基中保存，在用 于融合前应保持其活力较高，目前这类细 胞系有商品供应。
（2）基本方法 ①采用4~8周龄BaL B/C小鼠的脾脏制成单 细胞悬液。 ②加入抗原使其浓度达到0.5~5µg/ml。 ③在5%CO2，37℃下培养4~5天。 ④分离脾细胞，进行细胞融合。
3、其它免疫方法 近年来，其它免疫方法研究的较多，有脾 内免疫、腹贮植入、淋巴结注射、足垫注 射等方法。 其目的主要是减少抗原用量和注射次数， 缩短免疫周期。