血清丙氨酸氨基转移酶IFCC推荐方法测定

血清丙氨酸氨基转移酶IFCC推荐方法测定

1.实验原理

国际临床化学学会(IFCC)推荐的紫外连续监测法。

ALT

L-丙氨酸+ -酮戊二酸丙酮酸+ L-

LDH（乳酸脱氢酶）

谷氨酸

丙酮酸+ NADH + H+L-乳酸+ NAD+ + H2O 加入磷酸吡哆醛（P-5-P）是为了稳定ALT活性，避免样品中因内源性磷酸吡哆醛不足造成测定结果假性偏低。(如心肌梗死、肝病和特别监护病人的结果)[1]

2. 标本：

2.1 病人准备：12小时禁食。

2.2 类型：血清，肝素或EDTA血浆。

3. 标本存放：3天内的活性损失：2～8℃保存：<10%；15～25℃保存：<17%；标本稳定性：-20℃保存至少可稳定4周。

4. 标本运输：常温条件下保存运输。

5. 标本拒收标准：标本溶血、细菌污染的标本。

6. 实验材料

6.1 试剂奥林巴斯ALT测定试剂盒试剂1 + 试剂2

6.1.1 试剂准备：试剂为即用式。

6.1.2 试剂稳定性与贮存：试剂保存于2～8℃，若无污染，可稳定至失效期。试剂不可冰冻。

6.1.3变质指示：当试剂有看得见的微生物生长，有浊度，或者未开盖的液体有沉淀时，表明试剂已变质，不能继续使用。

6.1.4 注意事项：试剂中含叠氮钠（0.95g/L）为防腐剂。不可入口！避免接触皮肤及粘膜。应采取必要的预防措施使用试剂。

6.2 校准品：使用奥林巴斯公司提供的校准品对自动分析仪进行校准，具体参见生化检验校准品和质控品.SOP 文件。

6.3 质控品：具体参见生化检验校准品和质控品.SOP文件。

7. 仪器：奥林巴斯AU2700生化分析仪

8. 操作步骤

8.1 项目基本参数：参见生化检验奥林巴斯AU2700生化分析仪项目测定参数.SOP文件

8.2 仪器操作步骤：参见生化检验奥林巴斯AU2700生化分析仪操作规程.SOP文件

9. 检验结果的判断与分析

10. 质量控制：在每一批标本中都应把非定值血清水平I 与II质控做为未知标本进行分析，以2S为质控警告限，3S为失控限，绘制质控图，判断是否在控。质控规则参见生化室室内质控操作规程.SOP文件。

11. 计算方法：以TruCal U复合校准品ALT校准值校准仪器后，在病人结果可报告范围内，仪器直接报告可靠的检测结果，以U/L报告。

12. 参考值范围[4]

不含磷酸吡哆醛含磷酸吡哆醛

女性<31U/L 10～35U/L

男性<41U/L 10～50U/L

参考值因性别、年龄、饮食和地域的不同而有所差别。根据好的实验室经验，每个实验室应建立自己的参考值。

13. 临床意义[1,2]：丙氨酸氨基转移酶（ALT）旧称谷丙转氨酶（GPT），天门冬氨酸氨基转移酶（AST）旧称谷草转氨酶（GOT）。它们是氨基转移酶类的典型代表。氨基转移酶催化氨基从氨基酸转移给 -酮酸的反应。ALT是肝脏的特异性酶，仅在肝胆疾病时显著升高。而AST水平的升高和心肌或骨骼肌损伤，以及肝组织损害等都有关。因此同时进行ALT和AST的检测，可用于鉴别肝损伤和心肌或骨骼肌损伤。AST/ALT比率用于肝病的鉴别诊断。比率<1预示中度的肝损伤；比率>1和严重肝病有关，常见慢性肝病。

14. 操作性能

14.1 线性范围4～800U/L

14.2 精密度：精密度的评估是根据NCCLS推荐的标准方法，AU2700批内精密度小于3%，总精密度小于3%。用于分析的质控血清和数据处理符合以上的NCCLS的规则。

不含磷酸吡哆醛

含磷酸吡哆醛

14.3 方法学比较：不含磷酸吡哆醛

本公司不含磷酸吡哆醛的试剂盒(y)与某商品化试

剂盒(x)，同时对78个样品进行ALT活力检测，将检测结果作方法学比较，其统计结果如下：y=1.00x+0.00U/L；r=0.999。

含磷酸吡哆醛

本公司含磷酸吡哆醛的试剂盒(y)与某商品化试剂盒(x)，同时对80个样品进行ALT活力检测，将检测结果作方法学比较，其统计结果如下：y=1.00x+0.00U/L；r=0.994。

14.4 灵敏度：本试剂的检测限为4U/L。

14.5 病人结果可报告范围4U/L-800U/L

15. 超出范围结果处理本法对ALT活力检测的最大ΔA/min在340、334nm为0.16,在365nm为0.08。当样品测定值超过上限时，应将样品用9g/L氯化钠溶液作1：9稀释，重新测定，结果乘以10。

16. 病危报警值的处理

17. 方法局限性

17.1 本法对ALT活力检测的最大ΔA/min在340、334nm 为0.16,在365 nm为0.08。当样品测定值超过上限时，

应将样品用9g/L氯化钠溶液作1：9稀释，重新测定，结果乘以10。

17.2 干扰物质：当样品中抗坏血酸浓度≤1704μmol/L，胆红素浓度≤684μmol/L，血红蛋白浓度≤4.00g/L，甘油三酯浓度≤22.6mmol/L时没有观察到干扰。

18. 补救措施：当仪器发生故障时，迅速联系仪器厂家进行维修。

19. 参考文献

1.T homas L. Alanine aminotransferase(ALT), Aspartate aminotransferase(AST). In: Thomas L, editor. Clinical Laboratory Diagnostics. 1s t ed. Frankfurt: TH-Books Verlagsgesellschaft; 1998.p.55-65.

2.M oss DW, Henderson AR. Clinical enzymology. In: Burtis CA, Ashwood ER. editors. Tietz Textbook of Clinical Chemistry. 3rd ed. Philadelphia: W. B. Saunders Company; 1999. P.617-721.

3.B ergmeyer HU, Horder M, Rej R. International