免疫学实验实验一免疫血清制备

抗血清保存有三种方法：
第一种 是4℃保存，将抗血清除菌后，可以液体状态保存于普通冰箱，存 放3个月到半年，效价高时，一年之内不会影响使用。如需要长期保存 时要加入0.1％～0.2％NaN3以防腐和加入半量的甘油保存期延长。
第二种 是低温保存，放在－20℃－80℃，一般保存5年效价不会有明显 下降，但应防止反复冻融，反复冻融几次则效价明显降低。因此低温 保存应用小包装，以备取出后在短期内用完。
• 高效价、高特异性的免疫血清可作为免疫学诊断的试剂( 如用于制备免疫标记抗体等)，也可供特异性免疫治疗用。
三、实验材料
1. 动物：小白鼠8周左右体重18克，2-3kg的健康雄家兔或 未怀孕的雌家兔
2. 抗原：小牛血清白蛋白（BSA） 3. 佐剂：完全福氏佐剂 (抗原，羊毛脂,石蜡油,卡价苗
75mg／ml) 4. 器材：一次性注射器，碘酒酒精棉球，塑料管,镊子等
四、实验的步骤与方法
1、抗原制备
抗原1 羊毛脂5 石蜡油1 卡价苗0.5百度文库l
1ml BSA
1ml完全福氏佐剂
搅拌（注射器交替推动）
完全乳化
滴于水中经久不散
2、动物免疫 • 针头—使用9# ～12# • 一次注入的剂量0.5mg╱kg • 接种的部位--将完全乳化的抗原注射到兔子的双后足垫和背部
皮下4-6点，每处约20-50 ul（接种处先用碘酒、酒精消毒） • 第一次相隔2周，以后相隔1周，免疫3-4次。
3、采血和分离血清：心脏采血法
① 家兔仰面，四肢由助手抓住四肢固定。 ② 剪去左胸部兔毛，消毒皮肤。 ③ 用左姆指摸到胸骨剑突处，食指及中指放在右胸处轻轻向左
推，使心脏固定于左胸侧位置。然后，以左拇指触摸心脏搏 动最强的部位。 ④ 用2-10 ml注射器(连接9号针头)，倾针45°角度，对准心搏 最强处刺入心脏抽血。 ⑤ 将抽取的血液立即注入无菌三角烧瓶中或无菌离心管中，待 凝固后将三角烧瓶的血置37℃温箱1小时，再置4℃冰箱3～ 4小时或直接过夜。然后用毛细滴管吸取血清，如还有红细 胞则离心用3000rpm离心15分钟，取上清液。
第三种 是冰冻干燥，最后制品内水分不应高于0.2％，封装后可以长期保
存，一般在冰箱中5～10年内效价不会明显降低。
抗血清的鉴定
• 动物血采集后分离出血清，此抗血清在保存或应用前，必 须作效价和特异性鉴定。
实验一 免疫血清的制备
一、目的要求
1、熟悉佐剂的制备和动物免疫的常用方法 2、制备兔抗牛血清白蛋白（BSA）的免疫血清
二、实验原理
• 免疫血清的制备是一项常用的免疫学实验技术。为制备抗 体通常将适当的抗原物质注入动物体内，经过一定时间， 动物血清中可出现大量特异性抗体，这种含抗体的血清称 为免疫血清。