waters e高效液相色谱
Waterse2695高效液相验证方案
Waters e2695高效液相色谱仪验证方案编码：TS-52-01有限责任公司验证立项申请表参加验证人员验证方案审批表有限责任公司目录1．目的2．范围3．责任4．验证4．1．公用系统检查4．2运行确认4．2．1目的4．2．2方式4．2．3内容4．2．3．1设备使用原理4．2．3．2确认标准操作规程的可行性4．2．3．3确认设备正常运行的项目4．3性能确认4．3．1输液系统4．3．1．1泵流量设定值误差与流量稳定性误差4．3．1．2定性、定量测量重复性误差4．3．1．3系统适用性试验4．3．2紫外检测器性能4．3．2．1基线漂移与基线噪声5．拟订验证周期6．验证结果评价与结论7．附件为确认Alliance e2695型高效液相色谱仪测试数据准确可靠，性能稳定，特制订本验证方案，对高效液相色谱仪进行验证。
验证过程应严格按照本方案规定的内容进行，若因特殊原因确需变更时，应填写验证方案变更申请及批准书，报验证小组批准。
2 范围：适用于美国Waters 公司Alliance e2695型高效液相色谱仪系统的验证。
3 责任：3．1验证小组3．1．1负责验证方案的批准。
3．1．2负责验证的协调工作，以保证本验证方案规定项目的顺利实施。
3．1．3负责验证数据及结果的审核。
3．1．4负责验证报告的审批。
3．1．5负责发放验证证书。
3．1．6负责验证周期的确认。
3．2设备部。
3．2．1负责建立设备档案。
3．2．2负责仪器、仪表的校正。
3．3质量部3．3．1负责制定验证方案。
3．3．2负责验证的实施。
3．3．3负责拟定验证周期。
3．3．4负责收集各项验证、试验记录，起草验证报告，报验证小组。
4．1 公用系统检查4．2运行确认4．2．1目的试验并证明设备的各部分及整体，能在预期的及设计范围内准确的运行，并能完全达到规定的技术指标和使用要求。
4．2．2方式通过对输液系统、紫外检测器性能的检测，确认本机器运行正常。
4．2．3内容4．2．3．1设备概述4．2．3．1．1本仪器为Waters公司Alliance2695型高效液相色谱仪，包括四元梯度泵，e2695检测器和自动进样器、柱温箱、empower色谱管理工作站组成。
e2695高效液相色谱仪
仪器功能介绍：
Waters e2695可进行有机化合物的定性定量分析，尤其是沸点较高和热稳定性
较差的化合物的分析。
具有分离效能高、检测灵敏度高、选择性高、分析速度快的特点。
仪器主要技术参数：
四元梯度泵带脱气机：流速精度≤0.075％RSD ，流速准度±1％，梯度精度≤0.15％RSD，系统滞后体积＜650μl，不随后压变化
柱温箱：4 –60℃
控温自动进样器：4 –40℃
仪器使用注意事项：
1.使用本仪器需要预约，使用者请与仪器负责人联系，请不要擅自使用该仪器。
2.样品请标明样品名称、待测成分名称和结构、待测成分重要理化性能（溶解性、沸点、光谱特征）参数；
3.液体样品不少于1mL，0.45um膜过滤；固体样品不少于2mg。
waters超高效液相色谱仪操作步骤
第一部分：仪器准备1. 确保waters超高效液相色谱仪处于正常工作状态，检查仪器是否连接电源，是否有故障指示灯显示。
2. 打开色谱仪软件，检查仪器参数设置是否符合实验要求，包括流速、温度、检测波长等。
3. 准备所需的色谱柱、色谱柱连接器、进样器以及其他实验所需的耗材。
第二部分：样品准备1. 准备实验所需的样品，确保样品已经滤过或者处理过以去除杂质。
2. 根据实验要求，将样品溶解在适当的溶剂中，并进行稀释或者稀释。
第三部分：超高效液相色谱仪操作步骤1. 开始操作前，先进行系统平衡。
具体操作步骤为：将色谱柱连接至色谱柱连接器上，然后连接至色谱仪，用洗脱液平衡色谱柱。
2. 设置色谱仪的操作参数，包括流速、温度、检测波长等。
3. 进行样品进样，具体操作步骤为：将进样器连接至色谱仪，将稀释好的样品注入进样器中，设置好进样量。
4. 开始进行实验，监控色谱图谱的变化，记录实验数据。
5. 实验结束后，对色谱柱和色谱仪进行清洗和维护，确保仪器干净、整洁。
第四部分：数据处理和分析1. 对实验获得的数据进行处理和分析，比对标准曲线，计算样品中所含物质的浓度或者纯度。
2. 对实验结果进行统计分析，进行数据呈现，如绘制色谱图谱、制作数据统计图表等。
3. 通过数据处理和分析，得出实验结论，对实验结果进行解释和讨论。
第五部分：实验安全及注意事项1. 在操作过程中，注意个人安全，避免发生化学品溅泼或者接触有害物质。
2. 操作过程中需严格按照实验要求和操作规程进行，如有疑问请及时向实验指导老师或专业人士请教。
3. 实验结束后，及时清理实验台面和仪器设备，妥善存放试剂和耗材。
通过以上步骤的操作，可以保证在使用waters超高效液相色谱仪进行实验时，能够得到准确、可靠的实验结果，为科研工作和学术研究提供有力支持。
第六部分：精密控制与调试1. 在进行实验操作前，要确保色谱仪的各项参数已经精确调试完毕。
这包括流速、温度、压力、检测波长等参数的精准控制。
Waters e2695高效液相色谱仪维护保养规程V1.0
1 目的掌握Waters e2695高效液相色谱仪的维护保养规程，使仪器处于良好工作状态。
2 范围适用于Waters e2695高效液相色谱仪的操作。
3 责任质量检验部负责本程序的执行，质量保证部负责监督实施。
4 定义无。
5 内容5.1 色谱仪应该进行适当的维护保养，维护保养按照维护频率分为每周维护及每月维护。
每周维护、每月维护活动均应记录在仪器使用记录本上。
5.1.1 每周维护内容5.1.1.1 更换清洗液：HPLC系统可使用10%甲醇溶液作为清洗液，每周更换1次。
5.1.1.1.2 压力检查：开启排放阀(purge阀)，检查系统压力是否正常。
5.1.1.1.3 检查溶剂过滤器是否堵塞或变色。
若有，采用5.1.2.3的方法清洗。
5.1.1.1.4 检查系统是否有漏液情况、缓冲盐结晶情况。
若有，采用适当的的方法处理解决。
5.1.2 每月维护检查内容5.1.2.1 清洗溶剂瓶，清洗完毕放入烘箱中（设置温度80℃）灭菌，2小时候取出放置至室温备用。
5.1.2.2 泵维护：拆下泵入口单向阀阀芯，用100%色谱甲醇超声15分钟，再用纯化水超声不少于15分钟，洗净。
5.1.2.3 清洗溶剂过滤器：用纯水冲洗残留之溶剂后，玻璃过滤器用浓硝酸（35％）的烧杯里浸超过一小时，再用超纯水彻底冲洗过滤器，玻璃过滤器不能用超声波清洗；不锈钢溶剂过滤头可用甲醇超声波清洗15分钟，再用超纯水彻底冲洗。
5.1.2.4 清洗管路：移除色谱柱，接两通。
使用40℃-50℃的纯化水以1.5ml/min的流速分别冲洗4个管路，单个管路冲洗不少于15分钟。
6 附件无。
7 相关文件无。
8 参考资料无。
9 变更记载。
waters-e高效液相色谱ppt课件
保存柱子，而应该用有机相(如甲醇等)，因为纯水极性太强且易长霉。 。 6.开机时，流速和柱压要逐渐增加。 7.要注意柱子的PH值范围，不得注射强酸强碱的样品，特别是碱性样品。
流动相流出检测器可被送至废液瓶，或按需被收集。 当流动相含有一个分开的化合物谱带，高效液相色谱可以收集含有纯
化的化合物的该洗脱组分，用于进一步分析。
注意高压管路和附件用来连接泵、进样器、色谱柱和检测器单元，形 成流动相、样品和化合物分离谱带的通路。
高 检将效测电器信液连号相接转计换色算为谱机色数谱如据图站 ，何在，工显高示效作屏液上相展色现谱出系来统。单元先记录电信号，再
液相色谱的基本流程图
流动相
进样阀 泵
色谱柱
泵输液 进样
分离
检测器
检测
AB C
DE
G
F
记录
液 液相相流色色动谱谱相实：的验种所类各需及的部配基比分本，参示等数度-意-或亦梯图称度色谱条件
固定相：色谱柱类型及内径、长短 流动相输送系统参数：流速 检测器参数：紫外检测波长，灵敏度等 温度控制 进样量
四元梯度洗脱的溶剂输送动进样系统 柱温箱 液晶显示器 内置的柱塞杆密封垫清洗系统 溶剂瓶托盘 键盘用户界面及软盘驱动器
打开电源至on位置，开机依次接通 2695 分离单元、检测
2器开、机计算机和打印机的电源。接通后，约 20s 仪器开始自
检，约 1min 后，显示主屏幕，此时继续各部件的初始化。
溶 流【剂动M管相en理脱u/气系St确a统tu认s的所】有，准溶进备剂入管“路St都at充us满（溶1 剂），”按屏幕
Waters高效液相色谱e2695-2489技术参数
美国Waters公司高效液相色谱仪技术参数1四元梯度输液泵（Alliance 2695型）1.1工作模式：相互独立、电子控制的双柱塞直线驱动装置，双压力传感器反馈回路，无需混合器和阻尼器1.2溶剂数：1—41.3流速范围：0.010—10.000ml/min, 以0.001ml/min 为增量1.4流速精度：≤0.075%RSD1.5流速准确度：±1.0%1.6*延迟体积：<650µL，不随反压变化1.7混合范围：0.0—100.0% 以0.1% 增量1.8*梯度准确度：± 0.5%，不随反压变化1.9*梯度精度：±0.15%，不随反压变化1.10压缩补偿：自动，连续1.11*梯度曲线：多种梯度曲线，线性、步进、凸线和凹线1.12控制器：内置程序控制器，液晶显示，按键操作，E2PROM程序存储器1.13*延迟体积、梯度准确度和梯度精度指标不随反压变化2进样器（Alliance 2695型）2.1自动进样方式2.2*样品瓶数：120位，由5个样品盘组成，24个2mL样品瓶/盘2.3进样次数：每个样品1—99次进样2.4进样精度：≤0.5%RSD2.5样品污染度：<0.1%，最少程度的交叉污染，保证热不稳定样品的完整性2.6进样准确度：±1uL2.7进样范围：0.1—2000µL2.8进样线性度：>0.9992.9*进样针清洗：针内外每次进样后通过专用流路自动清洗3紫外可见检测器（2489型）3.1波长、极性和灯源开关均可时间编程控制3.2内置硝酸铒滤光片，紫外光、可见光都可以校正。
3.3可变波长范围：190～700nm3.4*检测通道：2个3.5光源：氘灯3.6波长准确度：±1nm3.7带宽：5nm3.8测量范围：0.0001～4.0000AUFS3.9基线噪音：±0.25x10-5AU，230nm，10Hz，1.0s3.10漂移：1 x 10-4AU/hour，254nm在1mL/min（甲醇）3.11梯形狭缝的光路设计，从硬件上消除示差折光效应3.12*具有操作面板，可以独立设定工作参数、显示运行状态4色谱软件（2011年版Empower3型）4.1是在最新Windows 7操作系统下编写和测试，支持多窗口、多任务的操作模式。
Waters e2695高效液相色谱仪操作规程
Waters e2695下效液相色谱仪支配规程之阳早格格创做1 手段指挥战典型Waters e 2695下效液相色谱仪的支配.2适用范畴该支配规程适用于Water e 2695下效液相色谱仪的支配.3工做考验员应按支配规程举止仪器支配，品量监督员控造监督该支配规程的粗确实止.4支配本仪器由Waters e 2695分散单元、Waters 2998两极管阵列检测器、Waters ELSD 2424挥收光集射检测器、Empower3色谱处事站战挨印机组成. Waters e2695分散单元包罗四元梯度洗脱的溶剂输支系统，四通道正在线实空脱气，可容纳120个样品瓶的自动分散单元，柱温箱，内置的柱塞杆稀启垫荡涤系统，溶剂瓶托盘；隐现器，键盘用户界里.4.1.2.1依次交通Waters e 2695分散单元、检测器、估计机战挨印机的电源.4.1.2.2交通Waters e2695分散单元后，约20s仪器开初自检，约3mn内各部件的初初化完成，待主屏幕上圆题目区出现“Idle”时，仪器加进待命状态.确认所有溶剂管路皆充谦溶剂，按[Menu／Status】，加进“Status(1)”屏幕，光标选“Degasser”，按[Enter】.当色谱仪流路不溶剂大概系统中有气氛时，需举止搞灌注(DryPrime)，注进震动相.可则，举止干灌注(Wet Prime)以驱除气泡.搞灌注：按主机里板上[Menu／Status】，加进“Status(1)”隐现，按[Direct Function】，采用“Dry Prime”，选溶剂通道，如Open A，选“DurationIIi按数字键输进5分钟，按”COntinue”，待规定时间中断后，沉复支配，使所需的溶剂通道注谦震动相.干灌注：加进“Status(1)”隐现，选溶剂通道，输进100％，按[DirectFunction]，选“Wet Prime”，按【OK】，根据里板提示树坐流速即时间(默认流速为7．5ml／min，普遍不必变动，时间可树坐为5min)，按【0K】.正在“status(1)”，屏幕下，光标选“Composition”，输进震动相的组成.按【Direct Function]，光标选“Purge Injector”，按【Enter]，隐现“Purge Injector”屏幕，输进“Sam ple Loop Volumes6．0”，光标下移“Compression Check”，按任性数字键，按【OK].正在主屏幕下，按【Diag]，隐现“Diagnostics”屏幕，按【Prime Ndl Wash】，隐现“Prime Needle Wash”屏幕，按[Start]，30s内应睹溶剂从兴液排搁心流出.按【Close】、【Exit】.正在主屏幕下，按【Diag]，隐现”Diagnostics”屏幕，按【Prime Seal Wash】，隐现“Prime Seal Wash”屏幕，按[Start]，30s内应睹溶剂从兴液排搁心流出.按【Close】、【Exit】.待排搁心有火流出，按【Half】、【Close】、【Exit】.挨开样品舱门，隐现"Door is Open"屏幕，将样品盘与出，把样品瓶拔出样品盘后，拆进样品盘，按【Next】直至所有样品盘拆毕，关好舱门.换上考验所需的色谱柱战震动相，加进"Status(1)”隐现，采用流路、设定流速、柱温，按【Enter】开初注进震动相，常常情况下约1 5～30分钟色谱柱可达到仄稳，不妨开初进样，支集数据.5 Empower 3硬件的应用5.1 建数据支集要领5.1.1单打电脑屏幕上的"Empower"快速图标，出现Empower登录界里，输进用户名战暗号.5.1.2单打下档键，采用用户典型战QuickStart界里.5.1.3采用QuickStart界里，面打“决定”，而后采用选定的支配名目以及色谱系统(仅查看数据可采用色谱系统中的“不系统”)，单打“决定”.5.1.4登录Empower的QuickStarlt界里.5.2 编写仪器要领战要领组（以e2695_2998为例）.5.2.1．支集栏单打“要领组编写背导”：5.2.2采用“新建”选项.5.2.3弹出仪器要领编写器.5.2.4单打“2695”，弹出2695编写界里.5.2.4.1 Aliance系统(包罗2695、2795战2695D)通用编写页里中，可采用“单次输支体积”，请针对于分歧的流速选定适合的单次输支体积，以保证最好的流速粗度与准度.5.2.4.2查看脱气选项，确认树坐粗确.5.2.4.3流量选项中树坐“泵模式”、“总流量”以及震动相配比.5.2.5单打2998，弹出2998编写界里.5.2.5.1 3D数据支集：正在通用栏中采用开用3D数据，输进检测波少的范畴；5.2.5.2支集2D数据，面打“2D通道”，最多可共时支集8个分歧波少的通道的数据.5.2.6面打“文献”，采用“另存为”：输进仪器要领称呼，面打“保存”；面打“文献”，采用“退出”.5.2.7正在被选项中采用所需的仪器要领称呼，面打“下一步(N)”.5.2.8正在下推菜单中采用所需的处理要领战报告要领（如果不符合的要领采用“无处理”、“无报告”)，面打下一步.5.2.9输进要领组称呼，单打“完成”.面打加进“仄稳系统／监视基线”界里，采用相映的仪器要领，面打“仄稳／监视器，正在监视窗心监视基线至系统仄稳，停止系统监视状态，面打“进样”.5.3.1．单进样：面打，加进“定义单进样参数”编写界里，输进样品名、功能、要领组等参数，面打“进样”.5.3.2使用背导建坐样品组战样品组要领.5.3.2.1采用“运止样品”，而后单打“样品行列”，加进样品列表.5.3.2.2单打“新建样品组背导”，建坐样品组.5.3.2.3采用创造样品组要领典型为“Lc大概PDA”，而后面打“定义样品板”.5.3.2.4正在“采用尺度进样正在何处开初”中采用符合的选项.查看开初加载样品瓶的位子是可粗确，面打“下一步”.5.3.2.5正在形貌标样中需要树坐一下实量：样品组中的标样数：×；每瓶标样进样次数：X；进样体积：x；运止时间：XX；要领组XXX；面打“选项”：输进下一进样延缓时间X；面打下一步.5.3.2.6样品数：X；每瓶样品进样次数：X；进样体积：X；运止时间：X；要领组X；面打选项：输进下一进样延缓时间X；面打下一步.5.3.2.7正在辨别尺度样界里中，输进标样称呼，删量后缀使用1．正在辨别样品界里中，输进样品称呼，删量后缀使用a.面打下一步.5.3.2.8运止模式选项中采用“只尝试”.查看纲要，面打下一步.【注：弹出组分编写器，输进标样中每个组分的称呼(内标不需要输进含量).不妨直交关关该窗心，正在处理数据的时间再增加】.5.3.2.9面打完成，正在菜单栏中采用文献.5.3.2.10为要领组命名并保存样品组要领.5.3.2.11单打“样品行列”，挨开运止样品窗心，面打运止目前样品组要领键，采用运止.5.3.2.11采用需运止的样品组称呼，面打运止.5.3.2.13样品组运止历程中，正在“正正在运止”栏中正正在运止以及运止完成的样品以红色隐现.(注：以背导建坐的样品组尾止功能普遍为扫除矫正，普遍正在运止样品前简略该止大概改为“仄稳”.)5.4.1 2D数据处理要领5.4.1.1单打“欣赏名目”键，正在“样品组”中采用目标样品组.5.4.1.2正在样品组上面打鼠标左键采用“查看相关→通道”，样品组正在单个通道中隐现.5.4.1.3采用定最矮浓度的标样，面打鼠标左键，采用下推菜单中的查看，会隐现已处理的色谱图形.5.4.1.4面打处理要领背导快速键，采用创造新处理要领，面打决定.5.4.1.5确认处理典型为LC，积分办法可采用为保守，再面打使用处理要领背导，采用决定.5.4.1.6常按鼠标左键，采用色谱图上最窄峰.(注：正在色谱图天区圆不妨搁大某个需要监测的峰.面打鼠标左键齐视图不妨还本色谱图.)5.4.1.7正在色谱图的积分界里采用一段典型基线动做积分的阈值，面打下一步.5.4.1.8常按鼠标左键，正在基线上采用积分的起止时间面.5.4.1.9提议采用最小峰下，采用所要积分的下度最小峰(大概键进相映数值).小于此峰下90％的峰将不被积分.面打下一步.5.4.1.10定量要领采用里积，组分疑息采用含量，矫正典型采用线性.面打下一步.5.4.1.11跨通道内标样界里面打可.5.4.1.12果为采用的是标样，面打峰1不妨瞅到一个下推菜单采用相映的组分称呼大概者键进运止样品相映的称呼.增加组分称呼相匹配的尺度含量，而后面打下一步.5.4.1.13如果是多面矫正样品，跳过增加含量的窗心直交面打下一步.(单面矫正可正在那里增加含量).5.4.1.14采用中标法：5.4.1.15采用简单内标样，需要正在下推菜单中采用大概键进内标相映的称呼，而后面打下一步.5.4.1.16采用多沉内标需要输进所有内目标称呼.5.4.1.17为处理要领命名，面打完成.色谱图界里会隐现该处理要领应用后的色谱结果，包罗积分.5.4.1.18如需为积分要领增加积分事变，鼠标左键面打色谱图窗心，采用增加积分事变.积分事变所示功能会坐刻应用于处理要领中.5.4.1.19编写处理要领的下档功能需要采用快速键.有所有变动均需再次保存处理圆法.5.4.1.20面打峰表底部可预览2D通道战峰.5.4.1.21面打“欣赏名目”键，采用“通道”大概“样品组”标签栏，左键面打目标样品组大概通道并采用处理.5.4.1.22正在处理界里，采用使用指定的处理要领，采用相映的处理要领称呼，面打浑除矫正，采用矫正并定量.5.4.1.23面打决定，数据处理，爆收截止.可正在截止栏中查看.5.4.2.1面打“欣赏名目”键，正在“样品组”中采用目标样品组.5.4.2.2正在样品组上面打鼠标左键采用查看相关通道，样品组中各个数据正在单个通道中隐现.5.4.2.3采用定量最矮浓度的标样，面打鼠标左键，采用下推菜单中的查看.5.4.2.4正在预览界里采用“表面线”标签栏，会隐现已处理的表面图.5.4.2.5从处理大概左键下推菜单中采用提与色谱选项.5.4.2.6键进所需要提与的波少，按回车键，得到该波少的色谱图.5.4.2.7面打处理要领快速键，采用创造新处理要领，确认处理典型为PDA，积分办法可采用为保守，再面打使用处理要领背导，面打决定.5.4.2.8常按鼠标左键，采用色谱图上最窄峰.(注：正在色谱图天区内不妨搁大某个需要监测的峰.面打鼠标左键采用齐视图不妨还本色谱图.)5.4.2.9正在色谱图的积分界里采用一段仄滑的基线动做积分的阈值，面打下一步.5.4.2.10常按鼠标左键，正在基线上采用积分的起止时间面.5.4.2.11提议采用最小峰下，采用所要积分的下度最小峰(大概键进相映数值).小于此峰下90％的峰将不被积分.面打下一步.5.4.2.12定量要领采用里积，组分疑息采用含量，矫正典型采用线性.面打下一步.5.4.2.13跨通道内标样界里面打可.5.4.2.14果为采用的是标样，面打峰1不妨瞅到一个下推菜单采用相映的组分称呼大概者键进运止样品相映的称呼.增加组分称呼相匹配的尺度含量，而后面打下一步.5.4.2.15如果是多浓度面的一组标样，跳过增加含量的窗心直交面打下一步.(简单浓度不妨正在那里增加含量).5.4.2.16采用中标法：5.4.2.17采用内标法简单内标样矫正，需要正在下推菜单中采用大概键进内标相映的称呼，而后面打下一步.5.4.2.18采用多沉内标需要输进所有内目标称呼.5.4.2.19 PDA杂化及匹配选项：5.4.2.20为处理要领命名，面打完成.色谱图界里会隐现该处理要领应用后的色谱结果，包罗积分.5.4.2.21正在“文献”下推菜单中采用“另存为”要领组，将该处理要领存进要领组.(注：3D数据必须用要领组处理.)5.4.2.22如需为积分要领增加积分事变，鼠标左键面打色谱图窗心，采用增加积分事件.积分事变所示功能会坐刻应用于处理要领中.5.4.2.23编写处理要领的下档功能需要采用快速键.5.4.2.24面打“欣赏名目”键，采用“通道”大概“样品组”标签栏，左键面打目标样品组大概通道并采用处理.5.4.2.25正在处理界里，采用使用指定的处理要领，采用相映的处理要领称呼，面打浑除矫正，采用矫正并定量.5.4.2.26面打决定，数据处理，爆收截止.可正在截止栏中查看.6查看截止战视图筛选6.1采用“截止”标签栏，使用视图筛选器从下推菜单中采用即日.6.2采用需查看的截止，左键面打采用查看.6.3查看截止面打快速键，查看每个组分的矫正直线.切换至主窗心面打.7预览截止并创造报告要领7.1面打“预览名目”切换回截止表隐现状态.7.2选中一个大概多个截止，面打鼠标左键采用预览.7.3若采用一个截止，正在预览窗心采用使用一下要领：使用缺省单个报告，单打决定.7.4预览报告并查看数据.面打“编写要领”键建改报告要领.7.5单打色谱图大概峰截止表编写报告属性.7.6面打文献，采用保存，为新建的报告要领命名.面打预览报告.7.7如需将报告保存为PDF要领，面打.8要领组的建坐以上道解了怎么样建坐仪器要领、处理要领战报告要领，推拢不妨得到一个要领组.8.1监视区单打要领组编写背导：8.2弹出新要领组：采用仪器要领界里.采用相映的仪器要领，面打下一步.8.3采用缺省要领界里采用相映的处理要领战报告要领，导出要领缺省.面打下一步.8.4命名要领组，面打完成.8.5正在运止样品时，要领组／报告要领中调用该要领组，不妨自动完成支集、处理、报告数据过程.9数据管造9.1.1正在QuickStart界里，采用菜单“管造一备份目前名目”.9.1.2出现“名目备份背导”，面打下一步.9.1.3出现“名目备份背导一采用手段天’’通过欣赏采用手段天，提议采用正在非支配系统拆置的硬盘分区内.采用完成，单打“决定”关关后，回到名目备份窗心，单打“下一步”.9.1.4出现“名目备份背导一备份隐现”.确认数据的复造已经乐成，再单打“下一步”.9.1.5出现备份数据背导一开初界里.面打完成，中断备份. 9.2.1正在QuickStart界里，采用菜单“管造”，下推菜单中采用“还本名目”.9.2.2出现“还本名目背导”.通过“欣赏”采用被还本的名目天圆的路径，单打“确定”.9.2.3单打下一步.9.2.4如出现类似以下实量的对于话框(名目名test已经被使用.请输进另一个名目名)，则需为还本的名目另起一个名字.9.2.5正在“输进磁盘空间配额’’页中，输进名目名，并注意此处的“表空间配额”应不得小于欲还本的名目本有的配额(数据文献大小)，而后单打“下一步”.9.2.6如果需要，不妨正在此页里中，采用该名目是可属于某个女名目.9.2.7正在“还本隐现’’中，如果出现如下对于话框(还本的名目需要被革新到下一个版本)，单打“决定”.(注：当还本由Millennium大概Empower的先前版本创造的名目时，需要为该名目采用时区.)9.2.8正在“还本隐现”中，等待数据还本中断后，单打“完成”.(注：提示：正在沉拆Empower硬件之后，不妨通过还本名目将相关的名目数据举止还本.) 10名目管造10.1.1加进到Empower3的QuickStart界里.正在菜单中采用“管造一创造新名目”.10.1.2出现“新名目背导”的对于话框，采用新建名手段女名目：10.1.3单打“下一步”，弹出“新建名目背导一表空间”，表空间50MB为默认树坐，可根据需要删减.10.1.4出现“新建名目背导一选项”页.采用用于本名手段选项，如果无法决定适合的树坐，请交受默认选项.单打“下一步”.10.1.5新建名目背导一考察统造：根据需要采用树坐对于您所创造的名目具备考察权力的用户战用户组，大概者交受缺省的选项，而后单打“下一步”.10.1.6新建名目背导一复造所选项：需要采用复造的名目，普遍采用Defaults名目.(注：此页的复造是指从另一个名目复造现有树坐，不妨复造名手段“视图筛选器”、“黑定义字段”、“要领”战“参数”.所以，普遍不允许变动大概使用Defaults名目中的所有数据.)正在建坐了新名目以去，不妨根据需要正在分歧的名目之间举止切换.10.2.1加进Empower3的Quick$tart界里，采用菜单“管造一改变系统／名目”.10.2.2改变系统／名目：根据需要举止采用名目大概者采用系统(如果存留两个大概者两个以上的系统).采用完成后，单打决定.如果采用了“正在该窗心切换名目／系统”，目前的名目／系统会被新选中的名目／系统所代替，如果采用了“为名目／系统挨开新窗心”，则会为选中的名目沉新挨开其余一个QuiekStart的界里.10.2.3正在新的名目／系统的QuickStart界里内即可举止下一步的支配.10.3.1正在QuickStart界里，采用菜单“视图一系统”，查看系统.10.3.2出现系统疑息窗心.正在该窗心中，不妨正在天面栏中查看隐现的天面是可与仪器的树坐相共.别的，可从“仪器”选项卡里的“仄常?”一栏中查看仪器状态，正在仄常状态下，应隐现“是”字样.如有仪器正在“仄常?”一栏出现“可”，可单打“扫描仪器”举止查看.如查看后隐现“是”，即回复仄常.(注：当仪器联机出现过失，大概者出现“仪器堕落”字样的时间，即可通过支集服务器属性去查看仪器状态，推断大概引起该问题的本果.)10.3.3.1正在QuickStart界里，选菜单“管造一新建系统”. 10.3.3.2出现“新建色谱系统背导一输进典型”页里，采用系统典型为“新建系统”.而后单打“下一步”.10.3.3.3出现“新建色谱系统背导一采用系统”页里，正在“可用仪器”组中，选中新系统的组件，而后用鼠标拖拽至左侧“新系统仪器”组中.采用完成，单打“下一步”.如有误选，则如法，将误选的新系统仪器，用鼠标拖拽回“可用仪器”组中.(注：可沉复使用已摆设系统中的仪器，但是一次只可有一个使用共享仪器的系统不妨正在线.)10.3.3.4出现“新建色谱系统背导一考察统造”页里.(注：您创造系统时，您即为系统的所有者.系统创造后，不妨建改系统的属性及变动所有者、考察权力战摆设等仔细疑息.) 11关机11.1使用完成，按确定用适合的溶剂浑洗色谱柱、系统管路、自动进样器、进样针战柱塞杆稀启垫，保证2695分散单元已实足浑洗搞洁后，关关电源开关.11.2数据支集完成后，关关所用检测器的电源开关.11.3数据处理并挨印报告后，关关估计机战挨印机电源开关.11.4考查中断，正在仪器使用记录表上备案，仪器管造人员考查签名.12仪器维护与调养12.1屡屡使用前后，查看分散单元上各溶剂瓶中溶剂的量，即时补充各瓶中相映的溶剂.12.2屡屡使用前后，挨开分散单元最底下的分散泵的舱门，查看各管路交心，有无慢冲盐析出的情况.如出现红色盐渍，应拆下其天圆的部件，先后用火战甲醇超声荡涤，并安拆好.12.3随时查看仪器的使用记录.12.4如万古间不使用该仪器，则需每半年依照《下效液相色谱仪功夫核查规程》查看一次，并搞好维护记录.。
WATERS高效液相色谱仪1525EF技术参数
美国Waters公司1525EF高效液相色谱仪分析兼半制备型技术参数1二元高压梯度泵、1.1*工作模式：双柱塞并联补偿往复泵，采用非圆齿轮技术，自调芯柱塞，具有自动润滑装置1.2溶剂：二元溶剂泵后高压混合1.3最大耐受压力：410bar (6000psi)1.4*流速范围：0.001～22.5mL/min1.5流速准确度：±1.0%1.6*流速精度：≤0.1%RSD1.7梯度曲线：11种，线性、步进（2）、凸线（4）和凹线（4）2双手动进样器2.1方式：六通阀2.2注射器：25µL2.3定量环：5µL、20µL、50µL、200µL3紫外可见检测器（2489型）3.1*波长、极性和灯源开关均可时间编程控制3.2内置硝酸铒滤光片用于波长校准及校正，紫外光、可见光都可以校正。
用256.7nm、379.0nm、521.5nm及656.1nm共四个波长校正。
开机时校准，随时可以进行校正3.3*可变波长范围：190～700nm3.4*检测通道：2个3.5*光源：氘灯3.6*波长准确度：±1nm3.7*光谱带宽：5nm3.8*测量范围：0.0001～4.0000AUFS3.9基线噪音：<5x10-6AU3.10漂移：1 x 10-4AU/hour3.11梯形狭缝的光路设计，从硬件上消除示差折光效应3.12具有操作面板，可以独立设定工作参数、显示运行状态3.13流通池：池体积：10uL；池长：10mm；耐压：1000psi3.14采样速率：80Hz4柱温箱4.1温度范围：室温+5℃至130℃4.2可以放置250mm长的色谱柱及保护柱5馏份收集器:能够根据峰高、保留时间等条件自动进行馏份收集，适合放置多种样品收集瓶。
6二维色谱软件（Breeze型）6.1是在最新英文Windows XP操作系统下编写和测试。
6.2*内置ORACLE®图文数据库。
WATERS e2695 高效液相色谱仪使用说明书
WATERS e2695 高效液相色谱仪使用说明书（入门用前必读）青岛科技大学化工测试中心2015-12-22安全指南遵守安全指南可以防止对系统或设备造成损害。
注意：不要将设备置于阳光直射的地方或靠近空调通风口。
注意：在不确定的情况下，不要删除工作站中的任何文件。
注意：为了避免损坏检测器的流动池，不要触摸流动池窗口。
小心：为避免被灼伤，在拆下灯泡进行更换或调整前，请至少提前30 分钟关闭灯泡。
小心：为避免电击事故和人身伤害，请务必在执行维护工作前关闭高压泵、检测器并拔下电源下电源线。
小心：为避免化学或电气危险，在操作系统时，请务必遵守实验室的安全规定。
目录第一章 WATERS 600 简介 (1)第二章基本操作要领 (2)2.1 操作规程 (2)2.2 运行分析样品 (2)第三章数据的处理 (15)3.1 创建方法组定量分析 (15)外标法：单点校正 (15)未知样结果计算 (26)外标法：多点校正 (29)内标法校正 (32)3.2 定性结果 (39)3.3 打印报告 (42)第四章文件管理 (46)第一章 WATERS 600 简介该高效液相色谱系统是由Waters600高压泵及控制器、氦气脱气系统、Waters 2996二极管阵列检测器和Millennium324.02版本（中文版）工作站构成。
该系统所有的控制指令和数据处理都可以通过计算计完成。
该系统是分析实验室不可缺少的仪器设备，是有机物定量分析的最佳手段之一，另外的突出优点是可以对色谱峰的纯度进行判断。
建立色谱库后可以实现定性分析。
第二章基本操作要领2.1 操作规程2.1.1 制备标样和样品：配置合适浓度的标样；制备的样品进样前要过滤。
2.1.2使用HPLC级流动相，必要时自行制备；水为实验室2级水。
用前均需过0.45μm 滤膜。
2.1.3 流动相脱气：打开氦气(99.999%)钢瓶，调节减压阀输出压力0.3~0.6MPa。
确认流动相管线和相对应的脱气管线。
Waters__600E-2487__高效液相色谱系统操作规程
Waters高效液相色谱液相色谱仪操作规程4.主要内容（操作步骤）4.1. 准备4.1.1. 使用前应根据待检样品的检验方法准备所需的流动相（应足够；流动相必须用0.45μm滤膜过滤）、样品和标准溶液（也可在平衡系统时配制），更换合适的色谱柱（柱进出口位置应与流动相流向一致）和定量环。
4.1.2. 通电前应检查仪器设备之间的电源线、数据线和输液管道是否连接正常。
4.2. 开机和泵操作4.2.1. 开机4.2.1.1. 接通UPS的电源，依次打开断电保护器、脱气机、600E泵、2487检测器，待检测器自检结束显示测量状态时，打开打印机、电脑显示器、主机。
4.2.1.2. 打开Empower软件，输入用户名和密码；4.2.2.1. 打开600E泵后，转动进口集合管阀手柄（以下简称手柄）至RUN位置；4.2.2.2. 将一塑料烧杯放在参照阀出口管下以收集分流的溶剂，向右打开参照阀4.2.2.3. 按［Direct］键使其显示直接控制屏幕，设流速为1ml/min（梯度配比阀在0ml/min 时不工作）；4.2.2.4. 选择欲使用的某一溶剂通道，设其比例为100%，其它为0%；4.2.2.5. 将输液管从原有溶剂瓶中取出，放入一干净的空瓶中；4.2.2.6. 逆时钟转动手柄至DRAW位置，用启动注射器从进口集合管阀的接口抽出约2ml 溶剂；4.2.2.7. 再将输液管放入新溶剂瓶内，继续抽吸直到新溶剂出来并无气泡为止；4.2.2.8. 转动手柄至RUN位置，将启动注射器取下并排掉筒内的溶剂。
4.3. 平衡系统（分两种情况进行）4.3.1. 等度模式4.3.1.1. 每次以0.1ml/min的增量加大流速至1ml/min，以超纯水冲洗系统10min。
4.3.1.2. 检查管路连接、柱接口及泵头处是否漏液，如漏液应予以排除。
4.3.1.3. 观察泵控制屏幕上的压力值，压力波动应在平均值的5~10%以内。
如超出此范围，可初步判断为柱前管路仍有气泡，重复5.2.3.下的步骤。
waterse2695高效液相色谱
定义与特点
定义
waterse2695高效液相色谱（HPLC） 是一种分离和分析复杂样品中各种成 分的实验技术。
特点
具有高分离效能、高灵敏度、高选择 性等优点，广泛应用于化学、生物、 医药等领域。
工作原理
01
02
03
流动相
在高压下，流动相通过固 定相，将待测组分分离。
参数。
峰分离不完全
可能是由于流动相组成或梯度设置不 当引起的，需要调整流动相或梯度条
件。
拖尾峰
可能是由于色谱柱污染或损坏引起的， 需要更换色谱柱或清洗色谱柱。
基线漂移
可能是由于流动相不纯或仪器长时间 未校准引起的，需要检查并更换流动 相或进行仪器校准。
05
waterse2695高效液相 色谱的发展趋势与展望
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数据处理系统
用于采集和处理检测器输出的 信号，记录色谱图并计算各组 分的含量。
操作流程
准备工作
检查仪器各部件是否正常，准备好流动相、样 品及色谱柱等。
流动相处理
根据实验要求，配置合适的流动相，并进行过 滤和脱气处理。
安装色谱柱
将色谱柱安装到仪器上，确保密封良好，无泄漏。
操作流程
平衡色谱柱
在流动相通过色谱柱后，使色谱柱达到平衡 状态。
的检测技术，如化学发光检测器、质谱检测器和生物传感器等。
02
优化样品预处理方法
简化样品预处理过程，提高预处理的效率和效果，以减少分析时间和误
差。
03
开发智能化的仪器控制系统
实现仪器控制系统的智能化和自动化，提高分析的稳定性和可靠性。
Waters公司产品说明：高效液相色谱(HPLC)及其相关技术的简要介绍说明书
Introduction to GPCColumns, Distributions,Sample Prep., Calibration,What’s NewPolymer Analysis TechniquesHigh Performance Liquid Chromatography (HPLC) (mainly Size Exclusion Chromatography, SEC)Mass Spectroscopy (MS)Thermal Analysis (TA)Rheometry, Nuclear Magnetic Resonance spectroscopy (NMR), Fourier Transform Infrared spectroscopy (FTIR)Introduction to GPC OutlineWhat is GPC?GAP of AdditivesWhat’s New?What is GPC?▪Gel Permeation Chromatography (GPC) separates samplemolecules based upon their relative size in solution▪Size Exclusion Chromatography (SEC)▪Gel Filtration Chromatography (GFC)▪GPC is an isocratic mode of separation▪GPC is well-suited for polymer analysis –provides a “molecularweight distribution”Particles arePorous, rigidpolymericmaterialsBig ones are not sloweddown because they aretoo big to go into thepores, so they elute firstWhat is GPC?▪The elution profile represents the molecular weight distribution based upon the relative content of different molecular weights…▪Based on size in solution Elution Volume (retention time)largest smallest Mn Mw Mz Mz+1B ig O nes C ome O ut F irst M o l e c u l a r W e i g h tSome definitionsMolecular weight averages are used to provide numerical differences between samples –Mn: Number average molecular weighto At this point in the curve the number of molecules in the sample to left is equal to the number of molecules to the right–Mw: Weight average molecular weighto At this point in the curve the weight of the molecules to the left is equal to the weight of the molecules to the right–Mz and Mz+1: these values are calculated based on molecular weight and abundance (obtained by ultracentrifugation and GPC software computation)o The values are used for “comparison” purposes•Known samples to unknown samplesThese averages are statistical moments calculated from the molecular weight distribution curveMolecular Weight AveragesGPC Delivers all MW information with one experiment GPC calculates the MW distributionof the polymer; this distribution canbe measured for:–Mn can affect a polymer’s brittleness,flow and compression properties.–Mw is related to strength properties,and impact resistance–Mz is related to elongation andflexibility, (Gumby -rubber)–Mz+1 is related to die swell,(extrusion parameter)Molecular Weight/Physical Property Correlations P r o p e r t y /P r o c e s s s P a r a m e t e r E f f e c t o f H i g h M W E f f e c t o f L o w M W I m p a c t S t r e n g t h M e l t V i s c o s i t y P r o c e s s i n g T e m p F l e x L i f e B r i t t l e n e s s D r a w a b i l i t y S o f t e n i n g T e m p S t r e s s -c r a c k R e s i s t a n c e M e l t F l o w Properties of PolymersGPC Process –Separates by Size in Solution Sample PolymerVo Vt“Bank” of3 GPC Columns Molecular Weight Distribution Chromatogram B igO nesC omeO utF irstWhat is happening inside a column?BOCOF Separation by size –Usually no chemical Retention mechanismBasic Column InformationColumns are put together in seriesto form a bank (>2)Always put the highest pore sizecolumn first (from the injector), andsmallest pore size column last–This reduces back pressure on themost fragile column (LMW column)Ramp the flow up slowly –0.1ml/minute –1.0 ml/minute insmall increments*Change over solvent at a0.1ml/minute flow rate over nightSome applications atHigh Temperature >150°CGPC Column TypesOrganic vs. Aqueous GPC columnsDifferent Pore SizesAnalytical vs. Preparative GPC columns Conventional vs. Solvent efficient, and High speed GPC columns.Care and Use of GPC ColumnsBasic GPC –typically a bank of 3 columns of different pore sizes to cover a broad MW range (as needed)Never use methanol or acetonitrile with Organic GPC columns because certain polar solvents will shrink the column, causing it to void–Note: Make sure to flush the complete system with solvent to be used before connecting the columns to the systemLife time of the columns can be as long as ~ 1 year or moreStore the columns in the solvent used with the column bank kept togetherMake sure that the end fittings on the column are tight to keep the column packing from drying out Be careful not to drop the columns, because they are fragileFilter sample solutionsPrevent air bubbles from getting into columnsGPC RulesPolymer is dissolved in a solvent at a low concentration (<0.10% w/v)Polymer solution passes through crosslinked, organic gel columns packed with controlled pore size particles.Larger molecules do not fit into pores (they are excluded) and elute firstVo : Exclusion volumeVt : Total volume or Permeation volumeExclusion principle assumes no adsorption of polymer molecules on packing materialEvery polymer will be eluted between Vo and VtDetectors in Polymer ChromatographyConcentration–Response ~ concentration, (C)–Refractometer; ∆N = (dn/dc) CStructure-selective–UV/Vis Detector (Also can use as concentration detector if sample has UV response), Lambert-Beer Law –IRMolecular weight sensitive–Response ~ C x f(M)–Light scattering: f(M) = M; M(C)–Viscometer: f(M) = [η] = kMα; [η]C•Where k, alpha are the Mark-Houwink constants–Mass Spec.: f(M) = 1/M; C/MRI’s were among the first detectors used in LC/GPC, (late 1960’s)Typically referred to as a “Universal Detector”Detects all dissolved solutes –“non -specific”Refractive index of any optical medium is defined as the ratio of the speed of light in a vacuum to the speed of light in the mediumDetection based on the refractive index of a given analyteMeasures the difference in RI from the eluent to the dissolved sample, (differential type)–The greater the dRI, the stronger the signal Sensitivity increase as RI difference increases Refractive Index (RI) Definition RSUV/Vis DetectionHigh SensitivityHigh SelectivityGain information on chemical compositionCan be used in gradient modeExcellent for most polymer additivesLinear response over a wide absorption range:–A = x l x C (Beer/Lambert)Sometimes UV/Vis detection is used for–Higher detection sensitivity.–Copolymer analysis (usually coupled with RI detector)–Under gradient elution condition.Polystyrene StandardsUV Detection at 260nmA U 0.000.010.020.030.040.050.060.070.080.090.100.110.120.130.140.150.16Minutes0.5 1.0 1.5 2.0 2.5 3.0 3.5 4.0 4.5 5.0 5.5 6.0 6.57.06.0mm X 15cm RT MB-M Column (1)(Same Pore Size as Conventional Column Set)Flowrate: THF at 0.60 ml/min Injection Volume: 5 µl Detector: 2487 UV @260nm PS Standards3,840,0002,890,0001,260,000775,000422,000186,00042,80016,7005,5702,980890474Evaporative Light Scattering DetectorEvaporative Light Scattering Detection for polymer characterization–ELSD is a concentration detector.–ELSD is not affected by solvent changes–Most appropriate detector for Gradient Analysis of Polymers (GAP) or Gradient Polymer Elution Chromatography (GPEC)–Good alternative to dRI for compounds having a low dn/dcEvaporative Light Scattering Detection for additives–ELSD is a universal detector–Compounds without UV-chromophore groups will be detectedEvaporative Light Scattering DetectorPolymers are combined with low molecular compounds (0.1-3%)Additives have several key functions :–Protection : light stabilizers, antioxidants, anti-UV–Safety : flame retardants–Processing : plasticizers, slip agentsFull characterization of synthetic polymers involves detection of additivesMost of slip agents do not absorb UV light. ELS Detector is a good alternative to UV detectionAdditives MixtureComparison of Detection ModesCrodamide (oleamide) is not detected in UV mode5.0010.0015.0020.00T i n u v i n 312T i n u v i n PB H T L uw i n o x 44 B 25S u c c o n o x 16N a u g a r d 445S u c c o n o x 18T i n u v i n 328I r g a n o x 1330I r g a n o x 1076I r g a f o s 1680.005.0010.0015.0020.00T i n u v i n 312T i n u v i n PL u w i n o x 44B 25S u c c o n o x 16N a u g a r d 445S u c c o n o x 18C r o d a m i d eT i n u v i n 328I r g a n o x 1010I r g a n o x 1330I r g a n o x 1076I r g a f o s 168UV Detection (220 nm)ELS DetectionI r g a n o x 1010GPC Calibration -Narrow Standards A calibration curve is built with low dispersity (narrow) standards with known molecularweight; (ideal if same structure as unknown polymer)(PS, PMMA...).This calibration curve may be used toquantitate a polymer of different nature (PC, PMMA...). Then results are expressed in PSor PMMA equivalents, (or relative to PS orPMMA –incorrect for the polymer sample of interest).The chromatographic process is based on hydrodynamic volume (H)(size in solution), and not molecular weight.Two different polymers with the same MW will elute at different retention volumes.Vo Excluded V Total MW*RangeNoresolutionABOVEthis MW Resolutionrangeis created bydifferences inelution timeElution Time or Volume NoresolutionBELOWthis MW*MW is Log scaleSame “Pore Size” ColumnsVo Excluded V Total MW RangeNoresolution ABOVE this MWResolution range is created by differences in elution timeElution Time or VolumeNoresolution BELOW this MWVo Excluded V TotalMW RangeNoresolution ABOVE this MWResolution range is created by differences in elution timeElution Time or VolumeNoresolution BELOW this MW2 Columns of the SAME Type-SAME MW Range -More ResolutionDifferent “Pore Size” ColumnsVo ExcludedV TotalMW RangeNoresolution ABOVE this MWResolution range is created by differences in elution timeElution Time or VolumeNoresolution BELOW this MWVo Excluded V TotalNew MW RangeNoresolution ABOVE this MWResolution range is created by differences in elution timeElution Time or VolumeNoresolution BELOW this MW2 Columns of the Different Type -EXPANDED MW Range -More ResolutionActual Calibration Curves for the Different Pore SizeHT ColumnsH igh T emperatureHT 2 for Low MWHT 6 for High MWHT 6E for BlendedGPC Calibration 1 –Narrow StandardsCalibration:ually >10 standards usedbracketing MW range2.Standards may be injected as amixture3.Mixtures should be 1 order ofmagnitude different (1000, 10000,100000)To build a calibration curve:Narrow dispersity standards (PD<1.1)Elution volume at peak heightCurve : Log(M) = f(Ve)2.62.83.03.23.43.63.84.04.24.44.64.85.05.25.45.65.86.06.26.418192021222324252627Log Mol WtTime (min)11000001900009100Log(M)Elution volumeGPC Calibration –Narrow StandardsOrganic Polymers Aqueous PolymersPolystyrene Poly(ethylene oxides)Polybutadienes Poly(ethylene glycols)Poly(methylmethacrylates)PullulansPolyisoprenesNarrow Standards -Preparation ConsiderationsNarrow standards may be mixed together to develop a relative calibration curve –No more than 3 in one “cocktail” –be careful of concentrations–MW’s should be one decade apartNarrow standards should only be swirled gentlyNo need to filter narrow standardsAdd antioxidant if high temperature applicationSample Preparation ConsiderationsSample may be mixed to facilitate dissolution–Be careful of shear for high MW (>1M) samplesIn some cases, sample solution should be filtered–Presence of microgels, fillers, any other insolublesAllow enough time for complete dissolutionFor certain crystalline polymers, high temperature may be needed–Example: Isotactic polypropylene requires 2 hours at 170C in an external oven –The PP may then be run at 145CSample Concentration GuideThe more dilute the polymer solution, the better–This will prevent viscosity effects and non-reproducible retention–A dilute solution will allow the polymer to open up into its most relaxed conformation o No chain entanglemento No microgel formationInjection volume no more than 100 µL per columnFor very high MW polymers, flow rate may have to be lowered–HMW columns may be needed as well to prevent shearSample Concentration GuideMW < 1,000MW 1,000 –10,000MW 10,000 –100,000 MW 100,000 –500,000 MW 500,000 –1MMW >1M 0.20 –0.30% 0.15 –0.20% 0.10 –0.15% 0.05 –0.10% 0.01 –0.05% 0.005 –0.01%Above concentrations assumeno more than100 µL injection per columnGPC Column Operation Techniques Switch solvents by flushing to the column at0.1ml/min overnight in the new solventIncrease flow rates at 0.1 ml/minute/minute to the columns specified flow ratesRecommended to keep the flow through the columns at low flow, 50 ~ 100 m l/minute when idlingFor TCB at 140 -150 C -purge the toluene out of the columns at 0.1 mL/min. overnight at ~80C and thenramp up to temperature over 300 min after 3 column volumes of TCB have passed throughDetection–RI–Viscometry–UVPolymer DistributionsA polymer is a mixture of different size chain lengths of the same monomer. Tomeasure this distribution of sizes we use molecular weight averages.Slices are made to the chromatogram, where the height of each slice (H i), represents the population of molecules at that chain length or MW.iHlouvmeulEtionPolymer DistributionsMv High MWLow MWMw MnMv is derivedfrom ViscometryMP Mz Mz+1GPC and Flow Rate PrecisionMnMwVeLC Peak Identification (Narrow Standard)Based on retention timeMolecular Weight DeterminationGel permeation chromatography (GPC)Based on volume of solvent flowing through the column Essential for the flow rate to be absolutely constant To calibrate, plot Log MW of standards vs volume (time)Any flow variability will result in large MW errorsGPC and Flow Rate PrecisionPrecise solvent flow is essential for precise GPC…MwMnVe▪Comparisons of Molecular Weight Distributions of different samples can highlight even small MW shift information (good vs. bad PP’s below)▪Determine "good from bad" -e.g. QC of resin batches… these are typical formulators –use Mw, Mn, Mz and polydispersityPractical use –Fingerprinting the Polymerd w t /d (l o g M )0.000.200.400.60 3.504.00 4.505.00 5.506.00 6.50“Bad”“Good”Degradation of Polyethylene Terephthalate –HFIPAged PET Virgin PETd w t /d (l o g M )0.00.10.20.30.40.50.60.70.80.91.01.11.2Log Mol Wt2.83.03.23.43.63.84.04.24.44.64.85.05.25.45.6PET Exposed To Oils And Refrigerants For Several Days At Elevated TemperatureVirgin PETIntroduction to GPC OutlineWhat is GPC?GAP of AdditivesWhat’s New?Gradient Analysis of Polymers (GAP)In recent years there has been increased interest in using gradient HPLC techniques, such as Gradient Polymer Elution Chromatography (GPEC), with polymers for determining the compositional drift of copolymers, the composition of polymer blends, or for the analysis of polymer additives. Depending upon the gradient conditions and columns selected for analysis, separations may be obtained dependent on molecular weight or based upon precipitation, or adsorption mechanisms. The use of an Evaporative Light Scattering Detector (ELSD) allows one to perform solvent gradients with a universal mass detector and observe both UV absorbing and non-UV absorbing polymer samples without baseline disturbances from the solvent gradient. The addition of a Photodiode Array Detector (PDA) allows for compositional analysis across the molecular weight distribution of many copolymers, can be useful for the identification of components in a polymer blend, and also is invaluable for the quantitation of polymer additives and other small molecules in traditional reverse phase separations.Experimental ConditionsSystem:Waters Alliance 2690 Separations Module with column heater at 30 ºCDetector 1:Waters 996 Photodiode Array DetectorDetector 2:Alltech Model 500 ELSD with LTA Adapter (Drift Tube at 40º C, 1.75 Liters/min Nitrogen)Data System:Waters Millennium 32 Chromatography Manager Column:As listed in Figures, 30 ºCFlow Rate:1mL/minSamples:10 - 25 µl injections of 0.2 - 0.5% samplesGradient:Linear gradient, conditions and mobile phases as listed in Figures.GPC Analysis of a Polymer BlendGradient Analysis of a Polymer BlendStyrene-Acrylonitrile (25% Acrylonitrile)PolystyreneStyrene-ButadieneRubber (50% Styrene)% THF0102030405060708090100Minutes246810121416Symmetry Shield™ C8 Column (3.9x150mm)100% ACN to 100% THF over 20 minutes ELSD DetectionGradient Analysis of Narrow PS Standards% T H F102030405060708090100Time (Minutes)1234567891011Symmetry Shield C8 (3.9x150mm)100% ACN to 100% THF over 10 minutes ELSD DetectionStyrene Oligomers2890910043,900190,000355,000706,0001,090,0002,890,000Analysis of Styrene-Butadiene-Styrene Block% T H F102030405060708090100Minutes1011121314151617181920100% S t y r e n e40% S t y r e n e30% S t y r e n e22% S t y r e n e100% B u t a d i e n ePrototype DVB/Vinylpyrolidone Column (3.9x150mm)100% ACN to 100% THF over 20 minutes ELSD DetectionCalibration of %Styrene in SBR'sGradient Analysis of Low Molecular Weight WaxesTime (Minutes)68101214161820221112131415161718m V"Slack wax""C18 wax"Nova-Pak ®C18 (3.9x150mm)100% ACN to 100% THF over 30 minutes ELSD DetectionPolymer Additives –Tinuvins, (UV Stabilizers)4681012141618202224262814161820222426283032mVMinutesTinuvin 440Tinuvin 900Tinuvin 328ELSD DetectionPolymer Additives –Phthalate Plasticizers5.05.56.06.57.07.58.08.59.09.510.010.511.014161820222426283032343638mVMinutesDcHPDOP (DEHP)DIDPUDPELSD DetectionPolymer Additives -Slips and Antistats204060801001201401601802002201416182022242628303234mVMinutesOleamideErucamideStearic AcidELSD Detection。
Waters e 型高效液相色谱仪操作规程
Waters e2695型高效液相色谱仪操作规程目的：建立Waters e2695高效液相色谱仪标准操作规程，为了使操作者操作高效液相色谱仪更规范，保证实验结果更精确。
范围：适用于Waters e2695高效液相色谱仪操作和维护保养。
职责:新药研发部人员、QC人员对本规程的实施负责。
1开机前的准备工作1.1检查设备电源、流路、信号连接是否完好。
1.2流动相：配制相应的流动相，经0.45µm微孔滤膜抽真空过滤后，并超声脱气5分钟，必须使用色谱纯的溶剂，水或缓冲盐溶液要用超纯水；盛放溶液和流动相所用的玻璃容器必须用超纯水清洗。
1.3样品溶液：按方法取样或配制标准样品溶液，0.45µm滤膜过滤。
2仪器的组成及开机平衡系统2.1仪器组成。
本仪器由waters e2695分离单元、2489紫外可见光检测器、Empower色谱工作站和打印机组成。
2695分离单元包括四元梯度洗脱的溶剂输送系统，四通道在线真空脱气机，可容纳120个样品瓶的自动进样系统，柱温箱，内置的柱塞密封垫清洗系统，溶剂托盘，液晶显示器，键盘用户界面及软盘驱动器。
2.2开机。
先打开电脑，依次接通2695分离单元、检测器、计算机和打印机的电源。
接通2695分离单元后，约20s仪器开始自检，约1min后，显示主屏幕，此时继续各部件的初始化，待主屏幕上方标题区出现“Idle”时，仪器进入待命状态。
2.3脱气（Degasssger）。
按面板右下方“Menu/Status”键进入“Status（1）”界面，移动光标至“Degasser Mode”，按Enter选择“On”，打开在线脱气。
一般默认是开的。
2.4设定柱温及样品室温度（可选项）。
在“Status”界面，光标至“Col Htr Set”，输入目标温度，按Enter；光标移至“Sample”,选择目标温度（4℃-40℃），按“Enter”。
（可在工作站方法中设置）2.5灌注柱塞密封清洗泵（Prime Seal Wash）。
Waters e2695高效液相色谱仪维护操作培训
实验室
正确的实验步骤
• 选择适当的洗针溶剂（绿管溶剂）和Seal Wash溶剂 • 清洗进样针（Needle Wash） • 清洗柱塞杆密封（Seal Wash） • 平衡系统 • Purge 进样器 • 实验操作 • 清洗系统 • Purge 进样器 • 清洗进样针（Needle Wash） • 清洗柱塞杆密封（Seal Wash）
shift—1—shift—1
检 查 检 测 器 灯 的 能 量 ( 检查检测器灯的使用时 手动关检测器灯
灯的亮度)
间
单/双波长， 自动调零
方法调用， A/B通道切换
设置及诊断
运行/停止 键 选项移动键
分屏显示键
监视色谱图 第二功能键
屏幕对比度 回车键
溶剂过
滤头堵
不锈钢滤头应先用纯化水超声 清洗。若不行，则可用100%的 异丙醇超声波清洗20分钟，之 后再用纯化水超声清洗。
注射器中出现的气 泡会导致系统抽取 的样品量不准确， 进而影响峰面积的 重现性。
进样前检查注射器 内流动相是否存在 气泡。
Inject Samples
样品进样
➢操作步骤： 选择Inject Samples（样品进样）选项，Enter，出现 Inject Samples （样品进样）对话框，如上图： Vial Range： 样品瓶位置 Injects per vial： 进样次数（5~10次） Run time： 运行时间（一般0.5min） Inject volume： 进样量（设置要比检测时的进样量 大，一般为40μl或80μl）
安装在线过滤器滤 芯时需注意滤芯方 向，且需放平后再 上紧。
灌注流动相时压力变高
Inline filter（在线过滤器） Parts No. WAT088084
waterse2695高效液相色谱仪操作规程
Waters e2695高效液相色谱仪操作规程1 目的指导和规范Waters e 2695高效液相色谱仪的操作。
2适用范围该操作规程适用于Water e 2695高效液相色谱仪的操作。
3职责检验员应按操作规程进行仪器操作，质量监督员负责监督该操作规程的正确执行。
4操作仪器组成和开机4.1.1仪器组成本仪器由Waters e 2695分离单元、Waters 2998二极管阵列检测器、Waters ELSD 2424蒸发光散射检测器、Empower3色谱工作站和打印机组成。
Waters e2695分离单元包括四元梯度洗脱的溶剂输送系统，四通道在线真空脱气，可容纳120个样品瓶的自动分离单元，柱温箱，内置的柱塞杆密封垫清洗系统，溶剂瓶托盘；显示器，键盘用户界面。
4.1.2开机4.1.2.1依次接通Waters e 2695分离单元、检测器、计算机和打印机的电源。
4.1.2.2接通Waters e2695分离单元后，约20s仪器开始自检，约3mn内各部件的初始化完成，待主屏幕上方标题区出现“Idle”时，仪器进入待命状态。
溶剂管路系统的准备4.2.1流动相脱气确认所有溶剂管路都充满溶剂，按[Menu／Status】，进入“Status(1)”屏幕，光标选“Degasser”，按[Enter】。
4.2.2灌注当色谱仪流路没有溶剂或系统中有空气时，需进行干灌注(DryPrime)，注入流动相。
否则，进行湿灌注(Wet Prime)以驱除气泡。
干灌注：按主机面板上[Menu／Status】，进入“Status(1)”显示，按[Direct Function】，选择“Dry Prime”，选溶剂通道，如Open A，选“DurationIIi按数字键输入5分钟，按”COntinue”，待限定时间结束后，重复操作，使所需的溶剂通道注满流动相。
湿灌注：进入“Status(1)”显示，选溶剂通道，输入100％，按[DirectFunction]，选“Wet Prime”，按【OK】，根据面板提示设置流速及时间(默认流速为7．5ml ／min，一般不用更改，时间可设置为5min)，按【0K】。
waters e2695技术参数
waters e2695技术参数（原创实用版）目录1.Waters e2695 简介2.技术参数详解3.参数应用及性能评估4.结论正文一、Waters e2695 简介Waters e2695 是一款高性能的液相色谱仪，广泛应用于药物分析、生物技术、环境监测等多个领域。
该款仪器以其卓越的性能和稳定的可靠性，在实验室分析工作中发挥着重要作用。
二、技术参数详解1.波长范围：Waters e2695 具有宽广的波长范围，从 190nm 至800nm，满足不同样品的检测需求。
2.流速范围：流速可在 0.1mL/min 至 5.0mL/min 之间自由调整，既能满足快速分析的需求，也能保证高分辨率的分析结果。
3.检测器类型：Waters e2695 配备了多种检测器，如紫外检测器（UV）、荧光检测器（FLD）和差示折射检测器（RID）等，满足不同分析需求。
4.柱温控制：Waters e2695 具有精确的柱温控制功能，可在室温至80℃之间进行恒温控制，保证分析结果的稳定性和准确性。
5.自动进样器：Waters e2695 配备了自动进样器，可实现样品的自动进样和清洗，提高分析效率。
6.数据处理系统：Waters e2695 配备了强大的数据处理系统，能实时处理分析数据，并生成易于理解的分析报告。
三、参数应用及性能评估Waters e2695 的各项技术参数在实际应用中表现出良好的性能。
例如，在药物分析中，其宽广的波长范围和精确的检测器可确保样品的准确检测；在生物技术领域，其快速流速和自动进样功能大大提高了样品分析的效率。
四、结论总的来说，Waters e2695 凭借其优秀的技术参数和稳定的性能，在液相色谱领域具有较高的地位。
Waters e2695型高效液相色谱仪标准操作程序终稿
标题Waters e2695型高效液相色谱仪标准操作程序起草日期颁发部门：研发事业部页数审核日期分发部门：QA审核日期批准日期生效日期变更记载：原文件号批准日期生效日期变更原因及目的：文件系统修订。
1 目的：Waters e2695型高效液相色谱仪的一般标准操作程序。
2 范围：Waters e2695型高效液相色谱仪。
3 责任人：相关实验人员4 设备部件及名称4.1 Waters e2695分离单元．4.2 2998型二极管阵列检测器．4.3 Empower色谱工作站．各部件可独立操作或通过色谱工作站控制，色谱数据处理由色谱工作站完成，其操作系统为Windows XP Profesional SP3，工作站软件为色谱管理软件。
5 标准操作程序5.1 开机前准备5.1.1 检查桌面是否清洁、整齐。
5.1.2 检查设备是否清洁，连接管线是否正常，色谱柱是否需要更换。
5.1.3 检查电源线有无破损。
5.1.4 接通电源，检查插座上各插孔的指示灯是否显示正常。
5.1.5 准备好超声过的流动相和流路冲洗溶剂。
流动相和纯水应用微孔滤膜过滤（纯有机相或含一定比便例有机相的用有机系的滤膜，水相或缓冲盐的用水系滤膜）。
一次制得的纯水或缓冲盐流动相应在连续24小时内使用完，如未使用完也应弃去不用，并重新配制新鲜的流动相。
如需使用，应重新过滤。
流动相的pH值应在色谱柱填料允许的范围内。
该泵带有真空脱气机，可不超声，但要在泵电源开启后，等脱气机停止工作后（约需5分钟）再进行泵的其它操作。
5.1.6 准备样品。
为延长层析柱使用寿命，建议使用流动相溶解样品，如果不是，一定要做预试验，确保样品在流动相溶液中不出现沉淀。
如果样品中成份复杂，特别含有强保留成分，建议过C18 小柱预处理。
样品在进样前必须经0.45μm的微孔滤膜滤过，根据溶剂性质选择合适的滤膜。
过滤完毕后，置于样品盘上，记录样品所放的位置号。
5.2 开机接通稳压电源，待电压稳定在220V时，依次打开下列仪器的电源：高压泵、柱箱、系统控制仪、色谱工作站。
Waters高效液相色谱系统操作规程
Waters高效液相色谱系统操作规程一. 准备1. 使用前应根据待检样品的检验方法准备所需的流动相（应足够；流动相必须用滤膜过滤）、样品和标准溶液（也可在平衡系统时配制）。
2. 通电前应检查仪器设备之间的电源线、数据线和输液管道是否连接正常。
3. 接通电源，依次打开1525泵、2487检测器，待检测器自检结束显示测量状态时，打开打印机、电脑显示器、主机。
4. 打开Breeze软件，进入系统主界面。
二. 操作步骤1.更换流动相。
2.在主界面中点击“Manage Breeze”按钮，选择system选项，出现系统连接示意图，观察各个部件是否连接好。
若未连接好，则需点击“Diagnostics/Reconfigure”进行诊断。
3.回到主界面，选择“Manage Breeze”中的project选项，单击“Make a new project”，“Next”，在“Project Name”中输入名称，单击“Finish”。
单击“Change a project/User”，在“Project”中选择输入的名称，单击“OK”。
4.单击“View Method”按钮，点击“Pump”图标，设置泵的参数。
点击“UV Det”图标，设置紫外检测器的波长。
单击“Save Method”按钮保存设置方法。
5. 打开泵的抽液阀，使用灌注注射器抽取一定量的洗脱剂。
单击Purge图标，出现“Purge Wizard”对话框，选中“Purge Pump”选项，点击“Next”“Next”，调节A、B泵的流量分别为约3ml/min。
打开泵的参考阀，点击“Next”。
Purge结束后关闭参考阀。
6.点击主界面中的“press to equilibrate system/ monitor baseline”按钮，平衡系统0.5－1h，直至基线稳定。
7.点击“press to make a single injection”按钮，进入“Specify Single Inject Parameters”对话框，设置参数，点击“inject”。
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四元梯度洗脱的溶剂输送系统 四通道在线真空脱气机 可容纳 120 个样品瓶的自动进样系统
柱温箱
液晶显示器
内置的柱塞杆密封垫清洗系统 溶剂瓶托盘
键盘用户界面及软盘驱动器
2 开机
打开电源至on位置，开机依次接通 2695 分离单元、检测 器、计算机和打印机的电源。接通后，约 20s 仪器开始自 检，约 1min 后，显示主屏幕，此时继续各部件的初始化。
一个储液瓶装有溶剂[称为流动相，因为溶剂是流动的]。 一个高压泵[溶剂传输系统或称溶剂管理器]用来产生和计量流动相的 流速，一般是毫升/分钟。 一个进样器[样品管理器或自动进样器]可以将样品导入[注射]连续的流 动相 ，并由流动相携带样品进入高效液相色谱柱。 色谱柱装有能获得分离效果的填料。这种填料称为固定相因为它被柱 硬件包围住。 检测器用来查看化合物流出色谱柱时被分开的谱带[大多数化合物没有 颜色，所以人眼观察不到]。 流动相流出检测器可被送至废液瓶，或按需被收集。 当流动相含有一个分开的化合物谱带，高效液相色谱可以收集含有纯 化的化合物的该洗脱组分，用于进一步分析。 注意高压管路和附件用来连接泵、进样器、色谱柱和检测器单元，形 成流动相、样品和化合物分离谱带的通路。
高效液相色谱如何工作
检测器连接计算机数据站，高效液相色谱系统单元先记录电信号，再 将电信号转换为色谱图，在显示屏上展现出来。
定性和定量样品内溶物浓度。
由于样品中化合物性质差异很大，几种类型的检测器被开发出来。 如果一个化合物能吸收紫外光，可使用紫外吸收检测器。 如果这个化合物发荧光，可使用荧光检测器。 如果该化合物没有上述性质之一，可使用更广泛的检测器，如蒸发光 散射检测器[ELSD]。 最强大的方式是顺序使用多个检测器。例如，紫外和/或蒸发光检测器 可和质谱仪[MS]联用来分析色谱分离的组分。这样，从一次进样，可 得到分析物的更多综合的信息。将质谱与高效液相色谱系统耦合称之 为液质联用.
流动相方面要求
除去微粒 纯度的要求
超纯水，梯度实验时水中有机杂质含量要低（建议走空白 检验） 缓冲液的pH值，在填料的允许范围内 缓冲液（盐）的浓度 溶剂：色谱纯，并与填料相匹配 溶剂中的杂质含量 注意溶剂的相容性，避免使用不相容的溶剂 有机溶剂或水的比例
流动相对样品的溶解度
打开真空脱气机（degasser）
Wet prime（执行湿灌注）
流动相平衡色谱柱
同理温度、流速都可在此控制面板设定！
流动相特性
（1）液相色谱的流动相又称为：淋洗液，洗脱剂。流动相组成改变， 极性改变，可显著改变组分分离状况； （2）亲水性固定液常采用疏水性流动相，即流动相的极性小于固定 相的极性，称为正相液液色谱法，极性柱也称正相柱。 （3）若流动相的极性大于固定液的极性，则称为反相液液色谱，非 极性柱也称为反相柱。组分在两种类型分离柱上的出峰顺序相反。 常用溶剂的极性顺序： 水(最大) > 甲酰胺> 乙腈> 甲醇> 乙醇> 丙醇> 丙酮> 二氧六环 > 四氢呋喃> 甲乙酮> 正丁醇> 乙酸乙酯> 乙醚> 异丙醚> 二氯甲烷> 氯仿>溴乙烷>苯>四氯化碳>二硫化碳>环己烷>己烷>煤油(最小)
在技术，理论及应用上仍处于发展阶段
什么是高效液相色谱法
定量分析主要基于与标准品的比较
是其最大应用领域
定性分析；不是色谱的强项
基于样品的保留时间比较 借助于和其联用的紫外、质谱或其他检测器
对定量及定性分析的要求
灵敏度、精度及准确度的要求 样品量的要求；复杂样品的分析能力 容易使用
高效液相色谱如何工作
什么是高效液相色谱法
High Patography
高效液相色谱法，简称：HPLC
是一种基于仪器方法的高效能分离手段：
高性能的色谱柱，高精度、耐高压的输液泵以及高灵 敏度的检测器……
广泛应用于各个领域：
医药 / 环保 / 石化 / 生命科学 / 食品及农业……
液相色谱的基本流程图
流动相
色谱柱
A B C
进样阀
检测器
D
E F
G
泵
泵输液
进样
分离
检测
记录
液相色谱的各部分示意图
液相色谱实验所需的基本参数--亦称色谱条件 流动相：种类及配比，等度或梯度 固定相：色谱柱类型及内径、长短 流动相输送系统参数：流速 检测器参数：紫外检测波长，灵敏度等 温度控制 进样量
Waters e2695 型高效液相色谱仪操作方法
仪器组成及开机 溶剂管理系统的准备 样品管理系统的准备 运行样品 数据采集 报告打印 关机
Waters e2695 型高效液相色谱仪操作方法
仪器组成及开机 1 仪器组成
Waters e2695 分离单元 2498型紫外检测器 色谱管理工作站
样品方面要求
溶剂和样品过滤非常重要，它会对色谱柱、仪器起到保护作用，消除 由于污染对分析结果的影响。 色谱柱：由于填料颗粒很细，色谱柱内腔很小，溶剂和样品中的细小 颗粒会使色谱柱和毛细管容易堵塞。 仪器：溶剂和样品中的细小颗粒会增加进样阀的堵塞和磨损，同时也 会增加泵头内的蓝宝石活塞杆和活塞的磨损。 除去微粒及杂质 了解样品在流动相中的溶解度,如样品的溶剂不是流动相，一定要确 保样品在流动相中不析出。 了解样品与色谱柱的基质/填料是否相互作用。
色谱柱的使用及操作
流动相的转换要缓慢 流速(压力)的变化幅度较小，比较稳定 温度的变化幅度 专用色谱柱∶样品及溶剂的要求
记 住 ∶ 拿 到 一 根 从 未 用 过 的 色 谱 柱 时 一 定 要 先 看 其 使 用 说 明 ！
样品管理系统的准备
装载样品盘（loading carousels）： 装入样品与转盘将样品瓶插到样品盘合适的位置，打 开样品仓门，显示“ Door is Open ”屏幕，装入样品 盘，按【 Next 】，直至所有样品盘装毕，关仓门。
溶剂管理系统的准备
流动相脱气确认所有溶剂管路都充满溶剂，按 【 Menu/Status 】，进入“ Status （ 1 ）”屏幕
溶剂管理系统的准备
必须用色谱纯有机溶剂，水或缓冲盐要用超纯水；
水相流动相需要每48h重新配制，特别是100%含水流 动相；
检查6根管子是否均在液面下，必须保证6根管子全部 插到溶剂瓶底部。