蛋白质的提取和分离一般分为四步样品处理11
高考生物二轮复习 课时作业 生物技术实践(一)
开躲市安祥阳光实验学校课时作业17 生物技术实践(一)1.下图是从土壤中筛选分解尿素细菌的过程，请回答下列问题。
(1)图中选择培养基应以________为唯一氮源；鉴别培养基还需添加__________作指示剂，分解尿素的细菌在该培养基上生长一段时间后，其菌落周围的指示剂将变成________色。
原因是__________________________________________________。
(2)若用稀释涂布平板法进行微生物计数时，需选取菌落数目稳定时的记录作为结果，这样做的原因是__________________________。
(3)提取玫瑰精油常用________法，原因是__________________，而橘皮精油常用________法提取，这是由于______________________________。
胡萝卜素提取可用萃取法，其萃取的效率主要取决于____________________。
解析：(1)图中选择培养基应以尿素为唯一氮源；鉴别培养基还需添加酚红作指示剂，分解尿素的细菌在该培养基上生长一段时间后，其菌落周围的指示剂将变成红色。
原因是尿素分解菌利用脲酶将尿素分解产生NH3，使培养基呈碱性，酚红在碱性条件下变为红色。
(2)若用稀释涂布平板法进行微生物计数时，需选取菌落数目稳定时的记录作为结果，这样做的原因是防止因培养不足而导致遗漏菌落的数目。
(3)提取玫瑰精油常用蒸馏法，原因是玫瑰精油易挥发，不溶于水，热稳定，而橘皮精油常用压榨法提取，这是由于橘皮加热会造成原料焦糊、橘皮精油的有效成分水解。
胡萝卜素提取可用萃取法，其萃取的效率主要取决于萃取剂的性质和用量。
答案：(1)尿素酚红红尿素分解菌利用脲酶将尿素分解产生NH3，使培养基呈碱性，酚红在碱性条件下变为红色(2)防止因培养不足而导致遗漏菌落的数目(3)蒸馏玫瑰精油易挥发，不溶于水，热稳定压榨橘皮加热会造成原料焦糊、橘皮精油的有效成分水解萃取剂的性质和用量2．(高考名校考前仿真)甲、乙、丙三个生物兴趣小组按如下三个流程进行课外探究活动。
提取蛋白质的具体步骤
提取蛋白质的具体步骤全文共四篇示例，供读者参考第一篇示例：提取蛋白质是生物科学研究中非常重要的一个步骤，它能够帮助研究人员深入了解蛋白质的结构和功能。
下面将为您介绍一些常用的提取蛋白质的具体步骤，希望能对您有所帮助。
1. 选择样本：在进行蛋白质提取前，首先需要选择合适的样本。
样本可以是动植物组织、微生物、细胞等。
在选择样本时，需要考虑到所需提取的蛋白质种类和含量。
2. 细胞破碎：将样本破碎是提取蛋白质的第一步。
通过机械或化学方法破碎细胞壁，释放出蛋白质。
常用的方法包括超声波破碎、研钵研磨、高压破碎等。
3. 细胞裂解：将破碎后的细胞溶液进行裂解是提取蛋白质的下一步。
裂解可使蛋白质从细胞内释放出来。
常用的裂解方法包括离心、温度变化、酸碱处理等。
4. 蛋白质沉淀：裂解后的细胞溶液含有大量的蛋白质和其他杂质，需要进行沉淀分离。
常用的方法包括盐析、醇沉、酸沉淀等。
5. 蛋白质纯化：通过进一步的分离和纯化步骤，可以得到纯度较高的蛋白质。
常用的方法包括柱层析、凝胶电泳、亲和纯化等。
6. 蛋白质鉴定：最后一步是对提取得到的蛋白质进行鉴定和分析。
常用的鉴定方法包括质谱分析、Western blotting等。
以上就是提取蛋白质的具体步骤。
通过这些步骤，研究人员可以有效地提取并纯化蛋白质，为后续的实验和研究提供重要的支持。
希望以上内容对您有所帮助，谢谢！第二篇示例：蛋白质是生物体中重要的基本分子，具有多种生物学功能，包括结构支持、酶催化、信号传导等。
提取蛋白质是生物学研究中常用的实验方法之一。
下面我将介绍提取蛋白质的具体步骤。
1. 样品的制备首先要准备待提取的生物样品，可以是细胞、组织或者生物体。
样品的制备包括收集、洗涤、离心等步骤，确保样品的纯度和完整性。
2. 细胞破碎对于细胞样品，需要先将细胞破碎以释放蛋白质。
常用的细胞破碎方法包括超声波破碎、高压破碎、冻融破碎等，选择适合样品的方法进行破碎。
3. 蛋白质溶解破碎后的细胞溶液需要进行蛋白质溶解，这可以通过添加盐溶液、表面活性剂或有机溶剂等方法来实现。
细胞提取蛋白步骤
细胞提取蛋白步骤细胞提取蛋白是生物学研究中常用的实验方法之一，通过提取细胞内的蛋白质，可以进一步进行蛋白质分析、鉴定和功能研究。
下面将详细介绍细胞提取蛋白的步骤。
一、细胞培养和采集在进行细胞提取蛋白实验之前，首先需要进行细胞培养。
常用的细胞培养基有DMEM、RPMI-1640等，根据实验需要选择合适的培养基。
将细胞培养在含有适宜浓度的培养基中，放置在恒温培养箱中，保持适宜的温度、湿度和二氧化碳浓度。
当细胞生长到适当密度时，可以进行下一步的细胞采集。
二、细胞裂解将培养好的细胞放入离心管中，用PBS或生理盐水进行洗涤，去除细胞外的干扰物。
然后加入裂解缓冲液，常用的裂解缓冲液有RIPA 缓冲液、NP-40缓冲液等。
裂解缓冲液中含有蛋白酶抑制剂、磷酸酯酶抑制剂等，可以保护蛋白质不被降解。
将细胞裂解液置于冰上，用超声波仪或搅拌器进行充分裂解，直至细胞完全破碎。
三、离心分离将裂解后的细胞溶液离心，以去除细胞碎片、细胞核和细胞膜等残渣。
离心分离的条件根据实验需要进行调整，一般在12000×g的条件下离心10-15分钟。
离心后，上清液即为含有目标蛋白质的提取液。
四、蛋白质浓度测定使用BCA法、Lowry法或Bradford法等方法，测定蛋白质的浓度。
根据实验需要，可以使用不同的测定方法。
五、蛋白质保存和分析将提取的蛋白质分装到离心管中，并存储在-80摄氏度的冰箱中。
根据实验需要，可以进行蛋白质的分析和鉴定。
常用的方法有SDS-PAGE电泳、Western blotting、质谱分析等。
这些方法可以用来确定蛋白质的分子量、表达量以及与其他蛋白质的相互作用等。
细胞提取蛋白是一项复杂的实验技术，需要注意以下几点：1. 实验前要准备好所需的试剂和设备，确保实验过程的顺利进行。
2. 在细胞裂解过程中，要注意避免蛋白质的降解和氧化，可以添加蛋白酶抑制剂和抗氧化剂等。
3. 细胞裂解后的提取液要尽量避免冻融，以免对蛋白质的活性造成影响。
蛋白质的分离提取方法
速度的主要因素是( C )
A.蛋白质分子所带的电荷 B.蛋白质分子的形状
C.蛋白质分子的相对质量 D.缓冲溶液的pH
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3.凝胶色谱法分离蛋白质时，凝胶的种类较多，但其作用的共同点是
()
A
A.改变蛋白质分子通过凝胶时的路径
B.吸附一部分蛋白质，从而影响蛋白质分子的移动速度
⑶.常见电泳类型：
①琼脂糖凝胶电泳 ②聚丙稀酰胺凝胶电泳
迁移率取决于它所带 净电荷的多少以及分
子的大小、形状。
③SDS——聚丙稀酰胺凝胶电泳
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电泳迁移率 完全取决于 分子的大小
。
课外拓展： 用SDS测定蛋白质分子量的方法
使用SDS—聚丙烯酰胺凝胶电泳测定蛋白 质的分子量时，可选用一组已知分子量的标 准蛋白同时进行电泳，根据已知分子量的标准
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㈢.你能观察到蛋白质的分离过程中，红色区带的移 动吗？请描述红色区带的移动情况，并据此判断分离 效果？
如果凝胶色谱柱装填得很成功、分离操作也正确的话 ，能清楚地看到血红蛋白的红色区带均匀、狭窄、平 整，随着洗脱液缓慢流出；如果红色区带歪曲、散乱 、变宽，说明分离的效果不好，这与凝胶色谱柱的装 填有关。
A.层析柱高
B.层析柱的直径
C.缓冲溶液
D.样品的分布
3.蛋白质的提取和分离一般分为四步，即＿样＿品＿处＿理、 ＿粗＿分＿离＿、＿纯＿化＿和＿纯＿度＿鉴＿定＿。后三步常用的方法
依次是＿透＿析＿法＿、＿凝＿胶＿色＿谱＿法＿、＿SD＿S—＿聚＿丙＿烯＿酰＿胺＿
＿凝＿胶＿电＿泳＿＿。
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人教版高中生物选修一专题5《 DNA和蛋白质技术》单元测试题(解析版)
专题5《 DNA和蛋白质技术》单元测试题一、单选题(每小题只有一个正确答案)1.以下对 DNA 和血红蛋白的提取与分离(鉴定)实验的分析错误的是()A．都要用猪血细胞来做实验材料B．在 DNA 的粗提取中可利用DNA在不同浓度盐溶液中的溶解度不同而析出C．在实验中都要进行除杂处理以便得到较纯净的 DNA 或血红蛋白D．将析出的 DNA 溶解在 2mol/L的 NaCl溶液中，加入二苯胺试剂沸水浴后呈现蓝色2.下列关于蛋白质性质的叙述中，不会影响到蛋白质的泳动速度的是()A．蛋白质分子的大小B．蛋白质分子的密度C．蛋白质分子的形状D．蛋白质分子的等电点3.关于DNA的实验，叙述正确的是()A．用兔的成熟红细胞可提取DNAB． PCR的每个循环一般依次经过变性－延伸－复性三步C． DNA溶液与二苯胺试剂混合，沸水浴后生成蓝色产物D．用甲基绿对人的口腔上皮细胞染色，细胞核呈绿色，细胞质呈红色4.通过样品处理和粗分离得到的血红蛋白溶液，还含有其他种类的蛋白质分子(如呼吸酶等)。
怎样将杂蛋白与血红蛋白分离开来呢？常用凝胶色谱法进行纯化。
以下做法、说法不正确的是() A．凝胶色谱分离蛋白质包括：制作色谱柱、装填色谱柱、样品加入和电泳B．色谱柱的装填过程要注意：装填前凝胶需要充分溶胀、装填要均匀、尽量紧密，降低颗粒间隙；无气泡；洗脱液洗涤平衡不能断流C．样品加入和洗脱的基本过程是：调节缓冲液面→加入蛋白质样品(不能破坏凝胶面)→调节缓冲液面→洗脱→红色区带均匀地移动标志着成功→收集分装蛋白质。
最后将纯化的样品进行电泳鉴定D．如果红色区带移动不均匀、歪斜、散乱、变宽等，其主要原因是色谱柱的装填有问题5.在“DNA的粗提取与鉴定”实验中，甲、乙、丙、丁四个小组除下表中所列处理方法不同外，其他操作步骤均正确，但实验结果却不同。
下列有关叙述不正确的是()A．实验材料选择错误的组别是丙B．沸水浴后试管中溶液颜色变蓝的组别是甲、丁C．甲组实验现象差的原因是25℃的酒精对DNA的凝集效果差D．乙组实验不成功仅因为在鉴定时加入了双缩脲试剂6.如果在除去杂质时选择方案三，为什么要将滤液放在60～75 ℃的恒温水浴箱中保温10～15 min()A．使DNA变性B．使蛋白质变性C．使DNA和蛋白质变性D．分解蛋白质7.对PCR的实验操作顺序的叙述，正确的是()A．准备→移液→混合→离心→反应B．准备→移液→离心→混合→反应C．离心→移液→混合→反应D．移液→离心→混合→反应8.某考古学家在西伯利亚泰加林地区的冰中，发现了一种冰冻的已灭绝的巨大动物的肌肉。
2025年湘教新版选修1生物上册阶段测试试卷含答案
2025年湘教新版选修1生物上册阶段测试试卷含答案考试试卷考试范围：全部知识点；考试时间：120分钟学校：______ 姓名：______ 班级：______ 考号：______总分栏一、选择题(共7题，共14分)1、橘皮精油的提取中，用压榨法得到压榨液，要使橘皮油易于与水分离，这种物质是()A. 0.5%的小苏打B. 5%的硫酸钠C. 0.9%的生理盐水D. 0.25%的硫酸钠2、下列关于果酒、果醋酿造实验的说法错误的是（）A. 乙醇可以作为果醋发酵的底物B. 酵母菌和醋酸杆菌增殖方式相同C. 酵母菌和醋酸杆菌同化作用类型相同D. 果酒发酵产物中的乙醇可以抑制杂菌生长A. 实验①B. 实验②C. 实验③D. 实验④4、苹果醋具有较好的营养和保健功能。
下列有关家庭制作苹果醋的操作中，错误的是（）A. 碗中加少量米酒敞口静置，取表面菌膜B. 选取成熟较度高的苹果洗净后榨汁C. 向苹果汁中加入适量的蔗糖和抗生素D. 醋酸发酵阶段每隔一段时间进行搅拌5、吃腐乳时，会发现腐乳外部有一层致密的“皮”，这层“皮”是（）A. 毛霉的匐菌丝B. 豆腐块表面失水变硬的部分C. 毛霉的直立菌丝D. 毛霉的分泌物在表面聚集的部分6、下列有关生物学实验操作、材料、条件等方面的叙述，正确的是（）A. 探究培养液中酵母菌种群数量的变化时，应将培养液滴入血细胞（血球）计数板的计数室，待酵母菌全部沉降后盖上盖玻片B. 研究土壤中小动物类群丰富度时，利用了土壤小动物避光、趋湿、避高温的特点C. “设计并制作生态缸，观察其稳定性”实验中，若分解者数量太少，则最先出现营养危机的是初级消费者D. 利用简易装置制作酸奶的保温发酵过程中，需要适时打开瓶盖放出气体7、下列有关血红蛋白的提取和分离，叙述正确的是（）A. SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳分离蛋白质时的迁移速率主要取决于分子净电荷多少B. 洗涤红细胞时要进行低速短时间离心以防止杂蛋白沉淀C. 透析时可以除去样品中分子质量较大的杂质D. 洗脱中凝胶表面露出后用 300mL、20mmol/L 的磷酸缓冲液洗涤评卷人得分二、多选题(共9题，共18分)8、某同学设计了图示的发酵装置；下列有关叙述正确的是()A. 该装置可阻止空气进入，用于果酒发酵B. 该装置便于果酒发酵中产生的气体排出C. 去除弯管中的水，该装置可满足果醋发酵时底层发酵液中大量醋酸菌的呼吸D. 去除弯管中的水后，该装置与巴斯德的鹅颈瓶作用相似9、关于实验室培养和纯化酵母菌过程中的部分操作，下列说法错误的是（）A. 配制培养基、倒平板、接种需要在酒精灯火焰旁进行B. 倒平板时，打开培养皿盖，倒放于超净实验台上，将锥形瓶中的培养基倒入培养皿C. 倒入培养基后立即将平板倒置，防止培养基污染D. 用平板划线法划完线后，要在培养皿皿底上做好标记10、高温淀粉酶在工业生产中有很大的实用性。
血红蛋白的提取和分离
血红蛋白是有色蛋白，因此在凝胶色谱分离时可以通过观察颜色 来判断什么时候应该收集洗脱液。这使血红蛋白的分离过程非常 直观，大大简化了实验操作。
三、结果分析与评价
（一）是否完成对血液样品的处理 观察你处理的血液样品离心后是否分层（见图5-18），如果
血红蛋白提取和分离的程序可分为四大步，包括：样品处理、 粗分离、纯化和纯度鉴定。首先通过洗涤红细胞、血红蛋白的释 放、离心等操作收集到血红蛋白溶液，即样品的处理；再经过透 析去除分子量较小的杂质，即样品的粗分离；然后通过凝胶色谱 法将相对分子质量大的杂质蛋白除去，即样品的纯化；最后经聚 丙烯酰胺凝胶电泳进行纯度鉴定。
在一定的范围内，凡是能够抵制外加少量强酸或强碱的影响使原 来溶液pH值基本保持不变的混合溶液。
2、作用: （课本P70练习2）
能够抵制外界的酸和碱对溶液pH值的影响，维持pH基本不变。
3、缓冲溶液的配制：
通常由1－2 种缓冲剂溶解于水中配制而成。调节缓冲剂的使用 比例就可以制得在不同pH范围内使用的缓冲液。
分层不明显，可能是洗涤次数少、未能除去血浆蛋白的原因。此 外，离心速度过高和时间过长，会使白细胞和淋巴细胞一同沉淀， 也得不到纯净的红细胞，影响后续血红蛋白的提取纯度。 （二）凝胶色谱柱的装填是否成功。
由于凝胶是一种半透明的介质，因此可以在凝胶柱旁放一支 与凝胶柱垂直的日光灯，检查凝胶是否装填得均匀。此外，还可 以加入大分子的有色物质，例如蓝色葡聚糖－2000或红色葡聚糖， 观察色带移动的情况。如果色带均匀、狭窄、平整，说明凝胶色 谱柱的性能良好。如果色谱柱出现纹路或是气泡，轻轻敲打柱体 以消除气泡，消除不了时要重新装柱。 （三）血红蛋白的分离是否成功
蛋白组学过程
蛋白组学过程
蛋白组学是研究蛋白质在生物体内的组成、结构和功能的科学领域。
蛋白组学过程可以分为样品处理、蛋白质提取、蛋白质分离、蛋白质鉴定和蛋白质定量几个主要步骤。
1. 样品处理：首先需要准备好待研究的生物样品，如细胞、组织或血清等。
在处理样品之前，可能需要进行预处理步骤，如去除杂质、冻干等。
2. 蛋白质提取：将样品中的蛋白质从其他组分中提取出来。
这个步骤可以使用各种提取方法，如细胞破碎、超声波处理、离心等。
提取的目的是获得纯净的蛋白质样品。
3. 蛋白质分离：将提取得到的蛋白质样品进行分离，常用的方法有凝胶电泳、液相色谱等。
通过分离可以将混合的蛋白质样品分解成单个或少数几个蛋白质组分。
4. 蛋白质鉴定：对分离得到的蛋白质进行鉴定，确定其氨基酸序列和特征。
常用的方法有质谱分析，包括质谱图谱分析、蛋白质测序等。
5. 蛋白质定量：确定蛋白质样品中的蛋白质含量。
常用的方法有比色法、免疫测定法等。
以上是蛋白组学的一般过程，具体的步骤和方法根据研究的目的和需求有所不同。
蛋白组学的发展和应用在生物医学研究、疾病诊断和药物开发等领域具有重要意义。
高一生物血红蛋白的提取和分离介绍
高一生物血红蛋白的提取和分离介绍高一主要学习的内容是细胞，学生需要知道和掌握这些的知识，下面是店铺给大家带来的有关于血红蛋白的提取和分离知识点的介绍，希望能够帮助到大家。
高一生物血红蛋白的提取和分离知识点该知识点包括凝胶色谱法、缓冲溶液、电泳、实验操作及操作提示等几个要点知识。
1. 凝胶色谱法：也称做分配色谱法，是根据相对分子质量的大小分离蛋白质的有效方法。
凝胶实际上是一些由多糖类化合物构成的多孔球体，在小球体内部有许多贯穿的通道，相对分子质量不同的蛋白质分子通过凝胶时速度不同，相对分子质量较小的蛋白质比较容易进入凝胶内部的通道，路程较长，移动速度较慢;而相对分子质量较大的蛋白质无法进入凝胶内部的通道，只能在凝胶外部移动，路程较短，移动速度较快。
相对分子质量不同的蛋白质分子因此得以分离。
2. 缓冲溶液：缓冲溶液的作用是能够抵制外界的酸和碱对溶液pH 的影响，维持pH基本不变。
缓冲溶液通常由1-2种缓冲溶剂溶解于水中配制而成的。
生物体内进行的各种生物化学反应都是在一定的pH下进行的，例如：血浆的pH是7.35～7.45，要在实验条件下准确模拟生物体内的过程，必须保持体外的pH与体内的基本一致。
3.电泳：电泳是指带电粒子在电场的作用下发生迁移的过程。
许多重要的生物大分子，如蛋白质、核酸等都具有可解离的基团，在一定的pH下，这些基团会带上正电或负电。
在电场的作用下，这些带电分子会向着与其所带电荷相反的电极移动。
电泳利用了待分离样品中各种分子带电性质的差异以及分子本身的大小、形状的不同，使带电分子产生不同的迁移速度，从而实现样品中各种分子的分离。
两种常用的电泳方法是琼脂糖凝胶电泳和聚丙烯酰胺凝胶电泳，在测定蛋白质分子量时通常使用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳。
蛋白质在聚丙烯酰胺凝胶中的迁移速率取决于蛋白质所带净电荷的多少以及分子的大小等因素。
4. 实验操作及操作提示：蛋白质的提取和分离一般分为四步：样品处理、粗分离、纯化、纯度鉴定。
血红蛋白的提取和分离(shk)
每个肽链环绕（ 一个亚铁血红素基团 ），此 一分子氧或一分子二氧化碳 ）。 基团可携带（ 血红素 血红ห้องสมุดไป่ตู้白因含有（ ）而呈红色。本课 题可选用猪、牛、羊或其他哺乳动物的血液来 分离血红蛋白。
(1)红细胞的洗涤 ①目的：去除（ 杂质蛋白 ） ②方法：（ 低速短时间 ）离心（速度越 高和时间越长会使白细胞和淋巴细胞等一 同沉淀达不到分离的效果），然后用胶头 黄色血浆 ），将 吸管吸出上层透明的（ 暗红色 ）的红细胞液体倒入（ 烧杯 ） 下层（
3.分类： 两种常用的电泳方法: 琼脂糖凝胶电泳和聚丙稀酰胺凝胶电泳。 聚丙烯酰胺凝胶电泳： （1）聚丙稀酰胺凝胶：是由单体丙烯酰 胺和交联剂N,N-甲叉双丙烯酰胺在引发剂 (过硫酸铵和催化剂（四甲基已二胺）的 作用下聚合交联成三维网状结构的凝胶 （2）原理 蛋白质在聚丙烯酰胺凝胶中的迁移率取决 于它所带静电荷的多少以及分子的大小等 因素。
2.凝胶色谱操作---- 血红蛋白的纯化 (1)凝胶色谱柱的制作 (2)凝胶色谱柱的装填
(3)样品的加入和洗脱
⑴凝胶色谱柱的制作：
注意事项：底塞中插入的玻璃管的上部不得超 出橡皮塞的凹穴底面，否则难以铺实尼龙网， 还会导致液体残留，蛋白质分离不彻底。
(2)凝胶色谱柱的装填：
材料：交联葡聚糖凝胶G-75；20mmol/L磷 酸缓冲液 装填:
3.SDS－聚丙烯酰胺凝胶电泳（选做）
判断（ 纯化 ）的蛋白质是否达 到要求，需要进行蛋白质的鉴定。
知识总结
血 红 蛋 白 的 提 取 和 分 离
蛋白质分子的差异性
凝胶色谱法 凝胶电泳法 缓冲溶液 组 原理 成 分离过程 作 用 粗分离 纯 化
蛋白质的
提取分离
样品处理 纯度鉴定
人教版试题试卷选修一 专题5 DNA和蛋白质技术(含答案)
专题5 课题1 DNA的粗提取与鉴定1．在DNA的粗提取和鉴定的实验中，提取鸡血细胞的核物质和析出含DNA的粘稠物的操作过程中均用到蒸馏水，其作用在于（）A．前者用来溶解血细胞，后者用来溶解DNAB．前者使血细胞吸水破裂，后者用来稀释NaCl溶液C．前者用来分离细胞核与细胞质，后者用来提取DNAD．前者使DNA从核中分离出来，后者使DNA析出2．为了便于提取鸡血细胞中的DNA，下列所采取的措施中，最恰当的是：向经抗凝剂处理的鸡血细胞液加入（）A．蒸馏水B．ATP C．0.3g/mL的蔗糖溶液D．二氧化碳3．下列不适宜作为DNA提取的实验材料是（）A．鸡血细胞 B．蛙的红细胞 C．人的成熟红细胞 D．菜花4．用过滤的方法得到细胞中的氯化钠溶液后，还要用酒精处理，可以得到较纯化的DNA．这是因为：A．DNA易溶于酒精，而滤液中某些杂质不易溶于酒精B．DNA不易溶于酒精，而滤液中某些杂质易溶于酒精C．DNA和滤液中其他成分更易溶于酒精D．DNA和滤液中其他成分都不溶于酒精5.在研究DNA的基因样本前，采集来的血样需要蛋白水解酶处理，然后用有机溶剂除去蛋白质。
用蛋白水解酶处理血样的目的是（）A.除去血浆中的蛋白质B.除去染色体上的蛋白质C.除去血细胞表面的蛋白质D.除去血细胞中的的蛋白质，使DNA释放，便于进一步提纯6.在向溶解DNA的NaCl溶液中，不断加入蒸馏水的目的是（）A.加快溶解DNA的速度B.加快溶解杂质的速度C.减少DNA的溶解度，加快DNA析出D.减小杂质的溶解度，加快杂质的析出7．在沸水浴的条件下，DNA遇（）会被染成蓝色。
A.斐林试剂B.苏丹Ⅲ染液C.双缩脲试剂D.二苯胺8．在DNA提取过程中，最好使用塑料试管和烧杯，目的是（）A.不易破碎B.减少提取过程中DNA的损失C.增加DNA的含量D.容易洗刷9．DNA的粗提取中，将与滤液体积相等的、冷却的（），静置2—3min，溶液中会出现白色丝状物。
蛋白质的分离与提纯
蛋白质的理化性质
蛋白质的两性解离 蛋白质的胶体性质 分离基础 蛋白质的变性、沉淀和凝固 蛋白质的紫外吸收 鉴别和检验 蛋白质的呈色反应
}
}
蛋白质的胶体性质
蛋白质在溶液中形成的颗粒直径大约1～100 nm，属于胶体颗粒的范围，所以蛋白质是 胶体物质，蛋白质的水溶液是亲水胶体溶液。 蛋白质形成亲水胶体溶液的稳定因素：分子 表面的水化层和电荷层。 蛋白质的水溶液是稳定的亲水胶体溶液。溶 液扩散慢，粘度大，不能透过半透膜。
电泳法
离心法
离心法
+
=
返回
沉淀法
返回
透析法
返回
过滤法
返回
层析法
返回
电泳法
BACK
NOW
Welcome……
PART 3
Part 3：SDS-PAGE电泳
化1003班 宋昊东
？
何为SDS-PAGE电泳法？？
sodium dodecyl sulfate 十二烷基硫酸钠 polyacrylamide gel electrophoresis 聚丙烯酰胺凝胶电泳
聚丙烯酰胺凝胶电泳
作用：用于分离蛋白质和寡核苷酸。 原理： 聚丙烯酰胺凝胶为网状结构，具有分子筛效应。它有 两种形式：非变性聚丙烯酰胺凝胶 、SDS-聚丙烯酰胺凝 胶（SDS-PAGE） 非变性聚丙烯酰胺凝胶：电泳过程中，蛋白质保持完 整状态，并依据蛋白质的分子量大小、蛋白质的形状及 其所附带的电荷量而逐渐呈梯度分开。 SDS-PAGE：仅根据蛋白质亚基分子量的不同就可以分 开蛋白质。该技术最初于建立1967年，在样品介质和丙 烯酰胺凝胶中加入离子去污剂和强还原剂后，蛋白质亚 基的电泳迁移率主要取决于亚基分子量的大小（可以忽 略电荷因素）。
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蛋白质的提取和分离一般分为四步样品处理——粗分离——纯化——纯度鉴定
1.样品处理
(1)红细胞的洗涤
①目的去除
②方法离心（速度越高和时间越长会使白细胞和淋巴细胞等一同沉淀达不到分离的效
果），然后用胶头吸管吸出上层透明的，将下层的红细胞液体倒入
再加入用的质量分数为0.9％的氯化钠溶液洗涤
⑤低速离心（低速短时间）
⑥重复4、5步骤次，直至上清液中已没有，表明洗涤干净。
利于后续血红蛋白的分离纯化，
不可洗涤次数过少。
(2)血红蛋白的释放
加到体积，再加40％体积的溶解细胞膜），置于上充分搅拌10分钟（加速细胞破裂）, 细胞破裂释放出血红蛋白.
(3) 分离血红蛋白溶液将搅拌好混合液转移到离心管内，以2000r/min的速度离心10 min ，试管中的溶液分为4层
第1层（最上层）甲苯层
第2层（中上层）的沉淀层，色薄层固体
第3层（中下层）的水溶液层，的液体
第4层（最下层）其它杂质的沉淀层
(4)透析
2.凝胶色谱制作
1）凝胶色谱柱的制作
①取长40厘米，内径1.6厘米的玻璃管，两端需用砂纸磨平。
②底塞的制作打孔→挖出凹穴→安装移液管头部→覆盖尼龙网，再用100目尼龙纱包好。
a、选择合适的的橡皮塞，中间打孔；
b、在橡皮塞顶部切出锅底状的，在0.5ml的头部切下长的一段，插入橡皮塞孔
内，上部不得超过橡皮塞的凹穴底面。
c.剪尼龙网小圆片覆盖在上，用的尼龙纱将橡皮塞包好，插到玻璃管一端。
d、色谱柱下端用移液头部做，连接一细的，并用螺旋夹控制尼龙管的，另一
端放入收集的收集器内
③顶塞的制作插入安装了玻璃管的橡皮塞
④组装将上述三者按相应位置组装成一个整体。
⑤安装其他附属结构。
2）凝胶色谱柱填料的处理
（1）凝胶的选择。
（2）方法
配置凝胶悬浮液计算并称取一定量的凝胶浸泡于中充分溶胀后，配成。
（3）凝胶色谱柱的装填方法
①固定将色谱柱处置固定在支架上
②装填将一次性的缓慢倒入内，装填时轻轻敲动色谱柱，使凝胶填装均匀。
③洗涤平衡装填完毕后，立即用缓冲液洗脱瓶，在高的操作压下，用300ml的20mmol/l的磷酸缓冲液（pH
为7.0）充分12小时。
3）样品加入与洗脱
（1）加样前打开下端出口，使柱内凝胶面上的缓慢下降到与平齐，关闭出口（2）加透析样品
①调整缓冲液面与凝胶面平齐
②滴加透析样品用将1ml 的样品加到色谱柱的
③样品渗入凝胶床
④洗脱打开下端，用磷酸缓冲液洗脱
⑤收集待接近色谱柱底端时，用试管收集流出液，每收集一试管连续收集
3.SDS－聚丙烯酰胺凝胶电泳
判断的蛋白质是否达到要求，需要进行蛋白质纯度的鉴定。
【探究案】
探究点一. 分离生物大分子的基本思路是什么？
探究点二.蛋白质的分离和提取的原理是什么？
探究点三.高温灭菌和酒精灭菌分别利用蛋白质的何种作用，作用结果是什么被破坏？
探究点四.人们用鸡的红细胞提取DNA，用人的红细胞提取血红蛋白的原因是什么？。