动物实验技术1

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3. 重复性原则(repetition)

不同实验要求的样本数不同，基本规律是实验个体的指
标变异愈小，则均数的标准差愈小，所需样本数愈小， 反之要增大样本数。一般说来，计量资料从每个个体中 获得的信息多，所需样本数小，计数资料对信息浪费大， 所需样本多。 预试时对照组与实验组有差别，但显著性检验时P>0.05， 可能系样本数不足所致，正式实验时可增大样本数；如 组间确有差异，样本数增大后可达显著性水平；如组间
1．随机分组：


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4. 随机性原则(random)

随机化手段可用随机数字表，这在一般统计学书 上均可检索到，也可用电脑统计学软件生成。

近年来提倡均衡下的随机（随机区组法），即先
将能控制的因素（性别、体重、病情严重程度等）
均衡地分档，然后在每一档中随机取出等量动物
分配到各组，使哪些较难控制因素（如活泼程度、
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一、 小鼠的抓取与固定
1．抓取方法
习惯用右手者，首先用右手从笼盒内将小鼠 尾中部或基部抓住(不可抓尾尖)，并提起或放在 左手上或笼盖上。也可用尖端带有橡皮的镊子夹 住小鼠的尾巴。
抓取时需注意，如果过分用力，会使动物窒 息或颈椎脱臼；用力过小，动物头部能反转来咬 伤实验者的手。因此实验者必须反复练习，熟练 掌握。
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2）按统计学方法测算的样本数
n=2б2(tα+tβ)2/δ2

n为样本含量，б为标准差； tα取有显著性的t分布值，t0.05=1.96； tβ为无显著性的t分布值，1-β为实验检验 能力，动物实验一般取1-β=0.80， t0.20=0.842； δ为处理组与对照组均值间的差异，可从预 实验或文献资料库中获得。
对 照 性 原 则
一 致 性 原 则
重 复 性 原 则
随 机 性 原 则
客 观 性 原 则
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1. 对照性原则（ control） (antitheses)
自体对照
建 立 对 照 组
组间对照
前后对照 左右对照
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1. 对照性原则（control）

1.前后对照：是在同一个体身上观察给药前
后某种指标的变化，此种对照可减少个体差异，
三、家兔的抓取与固定
1．抓取方法
抓取时，轻轻打开兔笼门，不要使兔受惊，然后右手伸 入笼内，从兔头前部把两耳轻轻压于手掌内，兔便卧伏不 动，此时将颈背部被毛和皮肤一起抓住提起，并用左手托 住兔臀部，使其体重主要落在左手上。 兔一般不咬人，但爪锐利（戴防护手套），挣扎时极 易抓伤操作人员。因此，必须防备其四肢的活动。 特别注意不能只提兔双耳或双后腿，也不能仅抓腰或 提背部皮毛，以避免造成耳、肾、腰椎的损伤或皮下出血。 10
动物实验的设计与分组
一、动物实验设计的基本原则
实验研究主要是通过对样本的研究而得
出结论。要将样本的结论外推到总体，必须
尽量使样本能够真实地代表总体。然而，实 验动物的种系和个体差异、实验环境的差异、 仪器的稳定性、药品的纯度、样本的大小等 因素都可能产生实验误差，影响样本结果的
代表性。
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实验设计原则
预备实验
预备实验也称预实验、初试实验，是在动物实验前 对正式实验进行初步试验。预备实验是正式实验的“预 演”。其目的在于检查各项准备工作是否完善，实验方
法和步骤是否切实可行，测试指标是否稳定可靠，初步
了解实验结果与预期结果的距离，从而为正式实验提供 补充、修正的意见和经验，是动物实验必不可少的重要 环节。预备实验可使用少量动物进行，实验方法和观测 指标应和正式试验一样。但是，预备实验的结果不能归 入正式试验的最后结果中一同分析。
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购入或领取动物时，应注意以下几个方面问题：
① 购入或领取实验动物前，应进行各项计划的核实， 检查各项实验前的准备工作，如动物笼盒数量、饲养室卫 生及消毒情况等； ② 购入或领取实验动物时，应向供应部门索取所用动 物的遗传背景和微生物质量资料 ( 动物质量合格证 ) 、以及 动物品系、年龄、体重、胎次等资料； ③ 根据试验观察时间长短的需要，同时购入或领取相 应数量的饲料和垫料； ④ 若是从外地购入动物需长途运输时，还应考虑到途 中各种因素对动物的影响，如运输环境的温度、湿度、饮 食（尤其注意途中污染和窒息死亡等问题）； ⑤ 若是购入或领取清洁级以上实验动物，应采用带有 空气过滤膜的无菌运输罐或带过滤帽的trol）

在用动物疾病模型（如高血压）实验时， 在动物A的基础上加了处理B高血压，加 上溶媒C，故欲判定药物D的作用，给药 组的设计必须满足下述设计：
模型对照组：A+B+C 药物实验组：A+B+C+D
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1. 对照性原则（control）

为了判定实验模型的成功与否，即此指标的 变化（血压升高）是否是由于造模的结果还 是自发性波动，必须另设空白对照组。故更 完整的实验设计应如下： 空白对照组：A+C 模型对照组：A+B+C 阳性对照组：A+B+C+阳性药 药物实验组：A+B+C+D
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4. 随机性原则(random)

随机包括随机分组和随机操作。
随机分组就是按照机遇原则来进行抽样或分组，其目 的是使一切干扰因素分配到各组时只受纯机遇的抽样 误差的影响，由于机遇对每个组来说是相等的，未知 因素可对每个组产生影响，使每个组的同一指标平行 增加或减少，这就避免了实验者主观因素或其它偏差 性误差的影响。 如观察药物对大鼠实验性胃溃疡的影响，应先造成大 鼠胃溃疡模型，然后将已成型动物随机分配到各组中， 从而避免了造型过程中人为因素的影响。
实验动物的抓取与固定 动物实验的设计与分组
动物的性别鉴定与日龄判断 动物的编号、标记及去毛方法
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动物的麻醉
动物的给药途径与方法 动物体液的采集 动物的安乐死
小鼠的解剖
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动物实验前的准备工作
1、理论准备主要指了解动物实验的基础理论知识、选题 立项和设定假设、研究计划和方案的制订、实验方法 的选择、技术参考文献查阅等。 2、条件准备指仪器设备的备臵与校准、药品的配制、器 械的准备、实验动物的购入、实验场所消毒与器具配 套等。 3、预备实验是正式实验的“预演”。 动物实验前的准备工作为完成动物实验提供必 备的理论基础、物质条件和试探性摸索，对开展好动 物实验研究十分重要。
实验动物的抓取与固定
抓取和固定是动物实验操作中一项最基本的 技术，所有的动物实验都要涉及到。不同种类动 物的抓取与固定方法不尽一致，同种动物的抓取 与固定方法也可以不同。另外，不同实验者的操 作习惯上也存在着差异。
无论采用何种抓取固定方法，都应遵守以下 基本原则： 保证实验人员绝对安全； 防止动物意外损伤； 禁止粗暴对待动物。

确无差别存在，样本数增大后对照组与实验组在预试时
出现的差别就会消失。 23
1）一般估测的样本数

小动物(大鼠、小鼠、蛙、鱼)：每组10-30例, 计量资料每组不少于10例，计数资料每组不少 于30例；
中等动物(豚鼠、家兔) 每组8-20例，计量资 料每组不少于8例， 计数资料每组不少于20 例； 大动物(犬、猫、猪、羊等) 每组6-20例，计 量资料每组不少于6例，计数资料每组不少于 20例。
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二、 大鼠的抓取与固定
1．抓取方法
方法一：同小鼠——偏小的大鼠 方法二：偏大的大鼠——张开左手虎口，食指和中指挟住左 前肢，迅速将拇、中指插入大鼠的腋下，虎口向前，其余三 指及掌心握住大鼠身体中段，并将其保持仰卧位，然后调整 左手拇指位臵，紧抵在下颌骨上（但不可过紧，否则会造成 窒息），即可进行实验操作。 如果是第一次抓取大鼠（或者大鼠特别凶猛）时，最好 戴防护手套（线手套，帆布或硬皮质均可），但徒手操作时 手掌的温暖可使大鼠变得温顺，很快停止抗争，并在以后的 操作中更加顺从。 抓取大鼠时，应特别注意不能捉提其尾尖，因为尾尖皮 肤易于拉脱，也不能让大鼠悬在空中时间过长，否则会激怒 大鼠翻转咬人。 9
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1. 对照性原则（control）

正常对照并不是不给任何处理的对照， 而应施以和受试组相同的操作条件，
如动物的质量、饲养条件、药物溶媒、 给药途径、给药次数、手术过程。
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2. 一致性原则(consistency)
为获得可靠的实验结果，最重要的 是实验过程中保证试验组与对照组之间 除被研究的处理因素不同之外，非处理 因素如实验对象、实验条件、实验环境、 实验时间、药品、仪器、设备、操作人 员等，均应力求一致。
但不能克服随时间而变的素因的影响。如肝炎
有自愈倾向，给药后肝功好转不一定是药物的
作用，故自身对照实验可能会得出错误结论。
除非有可靠证据说明检测指标不随时间而变或 同时设组间对照，否则不宜使用自身对照。
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1. 对照性原则（control）

2.组间对照：是实验中设若干平行组，进行各组间
比较。这种设计符合平行对照的原则，最为常用。
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由于动物害怕陌生人接触其身体，对于非条
件性的各种剌激会进行防御性反抗。因此，在抓
取、固定前应对动物的生活习性有所了解，根据
其生活习性采用相应的抓取固定方法。一般在抓
取固定动物过程中首先慢慢友好地接近动物，并 注意观察其反应，让动物有一个适应过程。 抓取时力求准确、迅速、熟练，争取在动物 感到不安之前，抓取到动物。

重复实验时要严格控制实验条件，在各次重 复中使条件尽量前后一致，严防干扰因素对各批 实验的影响。应控制的干扰因素包括：（1）动 物：品系、性别、体重、年龄、饲料、饲养环境， （2）药物：批号、剂量、溶解度、稳定性、注 射容量、注射速度、酸碱度、温度、保存条件。 （3）仪器：灵敏度、精确度、零点飘移、电压 稳定性及操作熟练程度。（4）环境：室温、气 压、湿度、季节，甚至实验的上午或下午、动物 的群养和独养也影响实验结果。
阳性对照药的选则：应选已批准上市或公认的有效药物作 阳性对照药，所选药物尽量是同类药，以便比较作用强 度，如抗癌药研究一般选卡铂、顺铂、环磷酰胺等；如 抗溃疡药研究一般选法莫替丁。
设阳性对照组的目的：
考察实验方法的可靠性、稳定性。 考察受试药的作用性质、强度，从而发现受试药的优缺点。
阳性对照药的剂量选则：如要比较阳性药与受试药的作用 强度，应设多个剂量组。如受经费等的限制，也可设一 个剂量组，但此时设阳性对照组的作用只是考察方法的 可靠性，不能得出受试物作用强弱的结论。 阳性对照药的给药途径，如能做到，尽量同受试药组。
组间对照实验设计：
1．正常对照组（或阴性对照组，或空白对照组）：
正常动物，给药物赋型剂。给药途径同给受试药组。 2．模型对照组：如制备肝硬化、高血压、心肌梗塞等。 不用药物治疗，给赋型剂，给药途径同给受试药组 3．阳性对照组：制造动物病理模型，给已知药物作对照。
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1. 对照性原则（control）
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n=2б2(tα+tβ)2/δ2
举例： 给某种动物饲喂一种药物，预实验中 每月体重增长比对照增加30±15g（均值± 标准差）。设显著水平为95%，检验能力为 80%，则正式实验所需样本含量n为： n=2152（1.96+0.842）2/302=3.93
即每组只需4只动物。
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3. 重复性原则(repetition)
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3. 重复性原则(repetition)

动物实验的结果应能稳定地重现出来，重现实验 过程称重复。重复有二个含义：一是只做一批实 验，在不同个体身上重复，如每一实验组要做多 只动物，小鼠和大鼠一般每组要在10只以上，这 种重复适合于绝大多数实验。另一种重复的含义
是，每次每组做10只小鼠（体内）或4管样品
（体外），反复重复3次，这主要是一些特殊实 验的要求，如抗肿瘤药的研究。
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3. 重复性原则(repetition)

重复时要求每组要有足够的动物数或标本数， 重复的主要作用是估计实验误差、降低实验
误差和增强代表性，提高实验结果的精确度
和真实性。

应该在保证实验结果具有一定可靠性的条件 下，确定最低的样本例数。
饥饱程度、疲劳程度）得到随机安排。
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4. 随机性原则(random)
典型分组举例：
某实验者有小鼠60只，♀♂各半，体重18-22 g,
欲分为6组，如何分组？
1. 分别将♀♂鼠分开，各一笼，每笼30只。
2．将♀鼠30只按体重分笼，分别为18 g, 19 g,
20 g, 21 g, 22 g，共5笼。每笼有同一体重