实验二孚尔根核染色
合集下载
相关主题
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
快完全除掉，脱氧核糖中潜在的的醛基获得自由状态， 水解条件下形成半缩醛羟基，与Schiff试剂反应，形成 紫红色化合物。
孚尔根核染色法是Feulgen和Rossonbek 于1924年提出的鉴定细胞中DNA的组织 化学方法。其优点是制片清洁、染色体 清晰、组织软化好，易于压片。但对小 型染色体（如玉米、水稻）效果较差。
成熟区 伸长区
分生区 根冠
注意事项
Schiff试剂小心取放，及时清洗吸取 Schiff试剂的吸管。
黑暗条件下染色。
实验作业
绘制你所观察到的图象，并说明是有丝 分裂的哪一个时期，并注明放大倍数。
前期、中期、后期、末期
为什么要严格掌握DNA的水解条件？
温度过低，时间过短：则DNA的水解 不够彻底，醛基暴露不充分，染色会 过浅。
温度过高，时间过长：则DNA过度水 解，游离的核苷酸会漂移到细胞质中， 造成染色浅或不均一 。
为什么要在实验材料从60℃盐酸中倒 出后，再放入室温的盐酸中呢？
材料从60℃的盐酸倒出后温度还相当高，如 果直接转入Schiff试剂中，则会使Schiff试剂发 生分解影响效果。所以我们首先要把材料转入 室温的盐酸溶液中，做一个缓冲以避免Schiff 试 剂分解。
为什么RNA在此过程中不会着色？
由于在酸解条件下，RNA较DNA分子 更加稳定，它的醛基难以游离，所以 在用Schiff试剂染色时RNA分子不会 着色。
Leabharlann Baidu
实验方法
水洗：把已经固定好的洋葱根尖用50％乙醇和清 水分别冲洗, 再把它放入室温的1mol/L HCl中处 理2-3min。
将根尖换入60℃预热的HCl，置于恒温水浴中， 在600.5℃的条件下水解10min。
吸出热HCl，换入室温1mol/L HCl再处理2min， 然后水洗2-3次。
吸净水分，加入Schiff试剂，盖上盖子，黑暗条 件下染色30min或过夜。
小心倒出Schiff试剂,然后用漂洗液洗3次。
漂洗液配置方法：取10ml10 %亚硫酸氢钠母液， 加200ml蒸馏水，再加10ml1NHCL，即成漂 洗液，使用前配置。
蒸馏水漂洗后取根尖置于载玻片上，只保留 分生区，再加一滴45%的醋酸，压片镜检。
HE XI UNIVERSITY
根尖形态与结构
医学遗传学实验
实验2 洋葱根尖孚尔根染色法
实验目的 实验原理 实验方法 注意事项 实验作业 思考问题
实验目的
掌握孚尔根核染色的方法。 了解孚尔根染色的原理。
实验原理
Na2S2O3+ HCl→→亚硫酸根 亚硫酸根+碱性品红→无色的亚硫酸品红—Schiff试剂
DNA在60℃，1mol/L HCl作用下，核酸中的嘌呤碱很
孚尔根核染色法是Feulgen和Rossonbek 于1924年提出的鉴定细胞中DNA的组织 化学方法。其优点是制片清洁、染色体 清晰、组织软化好，易于压片。但对小 型染色体（如玉米、水稻）效果较差。
成熟区 伸长区
分生区 根冠
注意事项
Schiff试剂小心取放，及时清洗吸取 Schiff试剂的吸管。
黑暗条件下染色。
实验作业
绘制你所观察到的图象，并说明是有丝 分裂的哪一个时期，并注明放大倍数。
前期、中期、后期、末期
为什么要严格掌握DNA的水解条件？
温度过低，时间过短：则DNA的水解 不够彻底，醛基暴露不充分，染色会 过浅。
温度过高，时间过长：则DNA过度水 解，游离的核苷酸会漂移到细胞质中， 造成染色浅或不均一 。
为什么要在实验材料从60℃盐酸中倒 出后，再放入室温的盐酸中呢？
材料从60℃的盐酸倒出后温度还相当高，如 果直接转入Schiff试剂中，则会使Schiff试剂发 生分解影响效果。所以我们首先要把材料转入 室温的盐酸溶液中，做一个缓冲以避免Schiff 试 剂分解。
为什么RNA在此过程中不会着色？
由于在酸解条件下，RNA较DNA分子 更加稳定，它的醛基难以游离，所以 在用Schiff试剂染色时RNA分子不会 着色。
Leabharlann Baidu
实验方法
水洗：把已经固定好的洋葱根尖用50％乙醇和清 水分别冲洗, 再把它放入室温的1mol/L HCl中处 理2-3min。
将根尖换入60℃预热的HCl，置于恒温水浴中， 在600.5℃的条件下水解10min。
吸出热HCl，换入室温1mol/L HCl再处理2min， 然后水洗2-3次。
吸净水分，加入Schiff试剂，盖上盖子，黑暗条 件下染色30min或过夜。
小心倒出Schiff试剂,然后用漂洗液洗3次。
漂洗液配置方法：取10ml10 %亚硫酸氢钠母液， 加200ml蒸馏水，再加10ml1NHCL，即成漂 洗液，使用前配置。
蒸馏水漂洗后取根尖置于载玻片上，只保留 分生区，再加一滴45%的醋酸，压片镜检。
HE XI UNIVERSITY
根尖形态与结构
医学遗传学实验
实验2 洋葱根尖孚尔根染色法
实验目的 实验原理 实验方法 注意事项 实验作业 思考问题
实验目的
掌握孚尔根核染色的方法。 了解孚尔根染色的原理。
实验原理
Na2S2O3+ HCl→→亚硫酸根 亚硫酸根+碱性品红→无色的亚硫酸品红—Schiff试剂
DNA在60℃，1mol/L HCl作用下，核酸中的嘌呤碱很