白色念珠菌与抑菌效力检查方法[材料浅析]

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表 产品分类
类别
药品
1 类 注射剂、其他非肠道制剂，包括乳剂、 耳用 制剂、无菌鼻用制剂及眼用制剂 2 类 局部给药制剂、非灭菌鼻用制剂及用于
黏膜的乳剂 3 类 口服非固体制剂（非抗酸制剂） 4 类 非固体抗酸制剂
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菌种和菌液的制备同培养基适用性检查
供试品接种
1、抑菌剂效力可能受试验用容器特征的影响，如 容器的材质、形状、体积及封口的方式等。因此， 只要供试品每个包装容器的装量足够试验用，同 时容器便于按无菌操作的接入试验菌液、混合及 取样等，一般应将试验菌直接接种于供试品原包 装容器中进行贮存。
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2、若因供试品的性状或每个容器装量 等因素需将供试品转移至无菌容器时，
该容器的材质不得影响供试品的特性
（如吸附作用），特别应注意不得影 响供试品的PH，PH对抑菌剂的活性影 响很大，同时容器的口径大小应便于 供试品的进出及混匀。
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3、 取包装完整的供试品至少5份，直接接 种试验菌，或取适量供试品分别转移至5 个适宜的无菌容器中（若试验菌侏数超过 5株，应增加相应的供试品份数），每一 容器接种一个试验菌。
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结果判断
白色念珠菌在沙氏葡萄糖琼脂培养 基上生长的菌落呈乳白色偶见淡黄色， 表面光滑有浓酵母气味，培养时间稍 久则菌落增大，颜色变深、质地变硬 或有皱摺。若平板上无菌落生长或生 长的菌落与上述菌落形态特征不符， 判供试品未检出白色念珠菌。
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2、如平板上生长的菌落与上述菌落形态特 征相符或疑似，应挑选2～3个菌落分别接 种至念珠菌显色培养基平板上，培养24～ 48小时（必要时延长至72小时）。若平 板上无绿色或翠绿色的菌落生长，判供试 品未检出白色念珠菌。
3、若平板上生长的菌落为绿色或翠绿色， 挑取相符或疑似的菌落接种于1%吐温80 玉米琼脂培养基上，培养24～48小时。 取培养物进行染色，镜检及芽管试验。
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4、芽管试验 挑取1%吐温80玉米琼 脂培养基上的培养物，接种于加有一 滴血清的载玻片上，盖上盖玻片，置 湿润的平皿内，置35～37℃、1～3h， 置显微镜下观察，可见到由孢子长出 短小芽管。
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3、所有抑菌剂都具有一定的毒性， 而且在贮存过程中其有效性有可能因 药物的活性成分提高或降低，为保证 药品的质量和用药安全，添加防腐剂 的量应根据制剂本身是否具抗菌活性， 保持最低有效量并在药品包装上注明 添加抑菌剂的名称和数量。
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培养基
1、胰酪胨大豆肉汤培养基 2、胰酪胨大豆肉汤培养基 3、 沙氏葡萄糖肉汤培养基
5、若上述疑似菌为非革兰阳性菌，显 微镜未见厚膜孢子、假菌丝、芽管， 判供试品未检出白色念珠菌。
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抑菌剂效力测定
概述
1、抑菌剂效力检查法系用于测定灭菌、 非灭菌制剂中抑菌剂的活性，以评价最终
产品的抑菌效力，同时也可用于指导生产 企业在制剂研发阶段抑菌剂的确定。
2、如果药物本身不含有充分的抗菌活性， 那么应根据制剂特性（如水溶液制剂）添 加适宜的抑菌剂，以防止制剂在正常储存 和使用过程中可能发生微生物污染和大量 繁殖尤其多剂量包装的制剂，避免因药物 微生物污染及对患者造成伤害。
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结果判定
被检培养基的菌落数与对照培养基菌 落数相比大于70%，菌落形态大小应 与对照培养基上的菌落一致。判该培 养基的适用性检查符合规定。
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抑菌剂效力测定
供试品分类 为了达到试验目的，根据供试品的给药 途径和用途将供试品分为四类，以便标 准的制定和执行，但对于一些抗酸性制 剂和含活生物制剂应考虑会降低有益菌 的生物活性。见表
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4、1、2、3类供试品1g或1ml接种菌量为 105～106cfu，4类供试品中1g或1ml接 种菌量为106～108cfu，接种菌液的体积 不得超过供试品体积的0．5%～1% ， 充分混合，使供试品中的试验菌均匀分布。
5、将接种的供试品在试验期间置20～ 25℃，避光贮存，贮存温度的变化应尽 可能控制在最小范围，并防止被污染。
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培养基的适用性检查 菌种
铜绿假单胞菌pseudomonasaeruginosa） 金黄色葡萄球菌（staphycococcus） 白色念球菌（Candida albicans）] 黑曲霉（Aspergillus niger） 大肠埃希菌（Escherichia Coli） 菌液的制备同控制菌培养基适用性检查
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存活菌数测定
由于供试品中含有抑菌活性，所以菌数 测定方法应进行验证。根据菌数测定结 果，计算1ml(g)供试品各试验菌所加的 菌数及各间隔时间的菌数，并换算成lg 值。
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测定细菌用胰酷胨大豆琼脂培养基，测定真菌 用沙氏葡萄糖琼脂培养基
根据产品类型，在规定的接种时间，分别从上 述每个容器中取供试ml(g)，用pH7.0无菌氯化 钠-蛋白胨缓冲液稀释成1：10、1：102、1： 103等稀释级。
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结果判断
1、抑菌剂效力根据各间隔时间测定的菌数 1.0 lg值相对于初始值（0时菌数1.0 lg值） 减少程度进行评价（见表），试验结果按有 效数字的修约规则进舍，保留一位小数点。 结果符合表，要求可判断该产品抑菌效力符 合规定。
白色念珠菌检查方法
1、增菌培养 取供试液10ml（相当于 供试品1g、ml、10cm2）直接或处理 后接种至适量（不少于100ml）的沙 氏葡萄糖肉汤培养基中，培养48～72 小时。
2、分离培养 取上述培养物划线接种
于沙氏葡萄糖琼脂培养基平板上，培
养24～48小时（必要时延长至72小
时）。
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适用性检查
取大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞 菌各50～100cfu，分别注入无菌平皿中，立即 倾注胰酷胨大豆琼脂培养基，每株试验菌平行 制备2个平皿，混匀，凝固，置30～35℃培养 48小时，计数；取白色念珠菌、黑曲霉各50～ 100cfu，分别注入无菌平皿中，立即倾注沙氏 葡萄糖琼脂培养基，每株试验菌平行制备2个平 皿，混匀，凝固，置20～25℃培养72小时，计 数；同时，用对应的对照培养基替代被检培养 基进行上述试验。