细菌内毒素检查法常见问题与探讨

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细菌内毒素检查法常见问题与探讨

摘要: 目的总结归纳细菌内毒素检查法中的常见问题，方法收集整理工作中发现的问题，查阅国内外有关文献资料，对照分析应用情况并比较其差异。结果与结论：从五个方面较为全面的总结了细菌内毒素检查法所涉及到的问题，认为在应用方面还需要进一步完善、规范。

关键词：细菌内毒素检查法；问题

Discussion of common issues in the BactarilEndutoxin Test, BET

ZHOU Su-Wen.（Pharmacology Laboratory, Hubei Institute of Drug Examination,

Wuhan 430064）

ABSTRACT: OBJECTIVE to summarize and conclude the common problems in the bacterial endotoxins test. METHODS by collecting the practical problems in work and referring to the related articals and information, we compared and analyzed their differences. RESULTS

and CONCLUSION the problems concerning the bacterial andotoxins test were comprehensively generalized in the review from five aspects and the conclusion showed that the application of the bacterial endotoxins test need to be further enhanced and standardized.

Key word: Bactaril Endutoxin Test；problems

细菌内毒素检查法(BactarilEndutoxinTest,BET )是近二十年来发展起来的用于检测药品及其中间品中内毒素污染的一种方法；作为家兔热原检查法的一种替代，已经十分成熟，美国药典迄今已为八百余种药品制定了该项检查法，中国药典自1990年版开始收载以来，每版药典细菌内毒素检查品种也逐步增多，2005年版已增加到204种，并且在增补本中将继续增加收载数量，该方法相对家兔热原检查法而言，有劳动强度低、快捷、经济、灵敏和易于

标准化等优点，受到广大药品质检人员高度关注。2005年版药典在2000年版药典基础上在方法学、结构及细节上均进行了重大修订，使其更加规范、合理。

由于该方法本身是一复杂的酶促反应过程，试验步骤比较多，每个品种的限值制定和试验过程中涉及到的标准品、鲎试剂、检查用水及干扰因素等，均会给对实验结果造成不同程度的影响，以下是笔者近年来在药品检验过程中发现的较为常见的问题进行的汇总, 以期对实际工作具有参考价值。

1、标准及限值的制定

一个品种的标准及限值制定的妥当与否，直接决定了对药品本身质量的评价要求，标准要求太高、限值过严，往往影响产品的合格率，太松则不能保证药品质量，危及临床用药安全。为此，各国药典均提出了基本的制定原则，除特殊情况需要说明外，一般注射剂均按人最大致热阈值和人临床每小时每公斤体重最大使用剂量的关系来确定，即L=K/M（通常静脉给药的K值为5Eu/kg，M为人每小时每公斤体重最大使用剂量），而大输液(100-500ml) 的限值各国基本是一致的，无论是复方还是单方，均可按单位体积中所含内毒素的量来控制，（一般按0.5Eu/ml）；看似简单的问题，在执行中却经常出现各种各样的问题。常见问题举例如下：

1．1应以重量(mg)表示的错用体积(ml)表示

注射用更昔洛韦钠，按公式计算，其限值应为1.0 Eu/mg，但生产单位要求改为0.5Eu/ml，且未提供任何制定理由，也未说明稀释方法。使检验人员无法操作。

1．2 不按人临床用量计算，按热原剂量计算

精氨酸阿斯匹林，若按人临床用量计算其限值应为0.3Eu/mg，但检查法制定中却按热原剂量计算为0.03Eu/mg，严格了10倍，因浓度较高，出现了干扰，给试验带来了麻烦。

1．3随意放宽标准

有的新药研发单位对自己的产品没有信心，或按规定的限值不能过关（检验不合格或有干扰），则将标准随意放宽，如谷氨酰胺注射液，美国药典规定限值为0.5Eu/ml，研发单位自行改为“稀释6倍后，按0.5Eu/ml。。。。。。”，放宽了6倍，且未说明理由。

1．4 照搬错误的标准

一品种限值根据其临床用量计算应为5Eu/mg，但已有暂行国家标准，限值为75Eu/mg，厂家则要求改为75Eu/mg，实际上第一个厂家所报标准没有根据，但由于漏审或未经专业人员审查直接变成了国家标准，此类标准太松。无法控制质量。

1．5 相同品种具有不同的国家标准

在2004年全国大输液抽样检验的500批样品中，细菌内毒素检查和热原检查标准较为混乱，有的采用家兔热原检查法，有的则是细菌内毒素检查法，且部分内毒素检查法同一品种限值却不一样。例如：克林霉素磷酸酯注射液，有的标准限值规定为0.5 Eu/mg，有的则为0.6 Eu/mg 。

1．6 随意修改，将正确的改为不正确

某一注射用药品，某省所在进行方法学研究时，按临床用量计算后将限值定为60Eu /mg；申报单位在资料汇总时改为：“取本品，加水5ml，再稀释8倍，每瓶含内毒素的量不得过100 Eu”。（本品规格为：10mg/支，人用量5mg/次）。尽管修改后的标准较之修改前严格了，但对标准的修改没有提供任何支持的实验数据。此外，该标准尚存在三处明显的错误，其一是没有注明细菌内毒素检查用水，而是仅仅描述为加水。其二是没有规定具体的药品规格，只是描述为“每瓶含”，忽视了每瓶可能带来的规格问题。其三则是限度的规定尽可能不使用类似“不得过”的描述，目前更准确的描述多采用“应小于.....”

1．7 检验方法表述不清楚

紫杉醇注射液：“取本品，加细菌内毒素检查用水至少稀释40倍后，依法检查（附录2000年版ⅪE），每ml中含内毒素的量应小于2.4Eu”；此类表述很容易引起理解上的错误，是原液中的限值为2.4Eu /ml，还是稀释后每ml中应小于2.4Eu？无经验的操作人员往往会认为是后者。此类问题，2002年全国药理室主任会及05年版内毒素品种扩大会议已有统一意