【医学免疫学实验】细菌的人工培养
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硫 化 氢 试 验
+
分组
两人一组
操作内容
细菌的人工培养
细菌的生化反应
分
菌种 金葡菌、大肠杆菌各一支 沙门氏菌、大肠杆菌各一支
组 与
材
1块普通平板/人
料 分
培养基
1支斜面培养基/人
7种生化反应管/人
配
1支半固体培养基/人
病原生物学实验 实验三
教学内容
细菌的人工培养
（一）细菌人工培养的基本知识
1. 细菌人工培养的目的
感染性疾病的病原学诊断
基
鉴定细菌，指导临床用药。
本 知
细菌学研究
识
用于细菌生理、遗传变异、致病性和耐药性等研究。
生物制品的制备
疫苗、抗毒素等的制备。
（一）细菌人工培养的基本知识 2. 细菌人工培养的基本步骤
（二）细菌人工培养操作
4. 实验方法及结果
• 平板分区划线法
实 验
方
法
及
结
果
分区划线
结果
（二）细菌人工培养操作
4. 实验方法及结果
• 斜面纯培养
实 验
方
法
及
结
果
（二）细菌人工培养操作 4. 实验方法及结果 • 半固体培养
穿刺接种
实 验 方 法 及 结 果
结果
细菌的生化反应
（一）生化反应基本原理
不同的细菌
知 ▪ 含有不同的分解代谢的酶
识 ▪ 具有不同的分解代谢途径 点 ▪ 对同一营养物质的分解代谢及其产物有所不同
基 本 原 理
利用生化方法检测代谢产物以判断细菌的分解代谢 特征，从而达到鉴定细菌的目的。
称：细菌的生化反应检测法
常见的生化反应
对
VP试验
糖
的
甲基红试验
对 蛋
吲哚试验
发 酵
单糖发酵试验
糖 发
酵
（培养基含葡萄糖、
试
乳糖、麦芽糖、甘 露醇或蔗糖等一种
大肠埃希菌：分解乳糖产酸产气
验
糖类，并加酸碱指 示剂，如溴甲酚紫）
致病性肠道细菌：大多数不分解乳糖
（三）实验操作内容
1. 糖发酵试验
（2）方法
大肠埃希菌、沙门氏菌
糖
接种针穿刺接种
发
酵
5种糖生化反应管
试 验
37℃培养18～24h
观察结果
（三）实验操作内容
4. 培养基的制备
调配成分
溶解
灭菌
质量检查 和保存
分装
矫正pH
基
本
知
过滤澄清
识
（一）细菌人工培养的基本知识
5. 细菌培养方法
需氧培养法
基
本
知
二氧化碳培养法
识
厌氧培养法
（一）细菌人工培养的基本知识
5. 细菌培养方法
需氧培养法
基
本
知
Hale Waihona Puke Baidu
二氧化碳培养法
识
厌氧培养法
电热恒温培养箱
二氧化碳培养箱
（一）细菌人工培养的基本知识 5. 细菌培养方法
1. 糖发酵试验
（3）结果判断——观察培养基颜色变化与气体产生情况
糖
溴甲酚紫
发
中性或
紫色
碱性
酵 试 验
黄色
酸性
对照 +
+
-
有细菌生长培养基呈混浊，可能出现3种结果。
（三）实验操作内容
2. 靛基质（吲哚）试验
（1）原理
靛 基
质
色氨酸
色氨酸酶
吲哚试剂
（ 吲
哚
培养基中加入
）
色氨酸
试
验
（三）实验操作内容
基
制备培养基
接种
培养
本
知
识
（一）细菌人工培养的基本知识
3. 细菌培养基的种类
根据营养组成和用途可分为
基
基础、增菌、选择、鉴别、厌氧
鉴别培养基
本 知
识
根据物理状态分为
液体、固体、半固体
（一）细菌人工培养的基本知识 3. 细菌培养基的种类
液体培养基
基
本
知
识
普通平板
血平板
半固体培养基
（一）细菌人工培养的基本知识
白 质
基 本
的
原
分
硫化氢试验
理
解
其
尿素酶试验
他
试
验 枸橼酸盐利用试验
（二）实验材料
1.菌种
大肠埃希菌、沙门氏菌
实
2.微量生化反应管
验 材
料
葡萄糖、乳糖、蔗糖、麦芽糖、甘露醇、
蛋白胨水（靛基质）、硫化氢。
3.试剂 吲哚试剂
（三）实验操作内容
1. 糖发酵试验
（1）原理
糖\醇类
细菌产生的酶 酸（HCOOH) 脱氢酶
基 本 知 识
烛缸二氧化碳培养法
厌氧袋
（二）细菌人工培养操作
1. 操作内容
操作内容
目的
操
作
平板分区划线
分离细菌
内 容
斜面纯培养
增菌及菌种保存
半固体培养
观察动力和菌种保存
（二）细菌人工培养操作
2. 材料
工具：接种环、接种针
实
菌种：金黄色葡萄球菌、大肠杆菌
验 材
培养基：
料
普通平板培养基、斜面培养基、半固体培养基
2. 靛基质（吲哚）试验 （2）结果判断 ——观察培养基与吲哚试剂 交界处颜色变化
靛 基 质 （ 吲 哚 ） 试 验
阳性 (+）
阴性 （-)
（三）实验操作内容
3. 硫化氢试验
（1）原理
硫
含硫氨基酸
酶
+铁离子
化 氢
或+铅离子
试
培养基中加入含
验
硫氨基酸、铅离
子、铁离子
（三）实验操作内容 3. 硫化氢试验 （2）结果判断
（二）细菌人工培养操作 2. 材料
实 验 材 料
普通平板培养基 (2-3%琼脂)
斜面培养基 (2-3%琼脂)
半固体培养基 (0.2-0.5%琼脂)
（二）细菌人工培养操作
3. 操作流程
领取菌种及培养基
操
分别进行平板、斜面及半固体培养基接种， 然后贴上标签。
作 流 程
37度恒温箱培养18～24小时后观察结果。
+
分组
两人一组
操作内容
细菌的人工培养
细菌的生化反应
分
菌种 金葡菌、大肠杆菌各一支 沙门氏菌、大肠杆菌各一支
组 与
材
1块普通平板/人
料 分
培养基
1支斜面培养基/人
7种生化反应管/人
配
1支半固体培养基/人
病原生物学实验 实验三
教学内容
细菌的人工培养
（一）细菌人工培养的基本知识
1. 细菌人工培养的目的
感染性疾病的病原学诊断
基
鉴定细菌，指导临床用药。
本 知
细菌学研究
识
用于细菌生理、遗传变异、致病性和耐药性等研究。
生物制品的制备
疫苗、抗毒素等的制备。
（一）细菌人工培养的基本知识 2. 细菌人工培养的基本步骤
（二）细菌人工培养操作
4. 实验方法及结果
• 平板分区划线法
实 验
方
法
及
结
果
分区划线
结果
（二）细菌人工培养操作
4. 实验方法及结果
• 斜面纯培养
实 验
方
法
及
结
果
（二）细菌人工培养操作 4. 实验方法及结果 • 半固体培养
穿刺接种
实 验 方 法 及 结 果
结果
细菌的生化反应
（一）生化反应基本原理
不同的细菌
知 ▪ 含有不同的分解代谢的酶
识 ▪ 具有不同的分解代谢途径 点 ▪ 对同一营养物质的分解代谢及其产物有所不同
基 本 原 理
利用生化方法检测代谢产物以判断细菌的分解代谢 特征，从而达到鉴定细菌的目的。
称：细菌的生化反应检测法
常见的生化反应
对
VP试验
糖
的
甲基红试验
对 蛋
吲哚试验
发 酵
单糖发酵试验
糖 发
酵
（培养基含葡萄糖、
试
乳糖、麦芽糖、甘 露醇或蔗糖等一种
大肠埃希菌：分解乳糖产酸产气
验
糖类，并加酸碱指 示剂，如溴甲酚紫）
致病性肠道细菌：大多数不分解乳糖
（三）实验操作内容
1. 糖发酵试验
（2）方法
大肠埃希菌、沙门氏菌
糖
接种针穿刺接种
发
酵
5种糖生化反应管
试 验
37℃培养18～24h
观察结果
（三）实验操作内容
4. 培养基的制备
调配成分
溶解
灭菌
质量检查 和保存
分装
矫正pH
基
本
知
过滤澄清
识
（一）细菌人工培养的基本知识
5. 细菌培养方法
需氧培养法
基
本
知
二氧化碳培养法
识
厌氧培养法
（一）细菌人工培养的基本知识
5. 细菌培养方法
需氧培养法
基
本
知
Hale Waihona Puke Baidu
二氧化碳培养法
识
厌氧培养法
电热恒温培养箱
二氧化碳培养箱
（一）细菌人工培养的基本知识 5. 细菌培养方法
1. 糖发酵试验
（3）结果判断——观察培养基颜色变化与气体产生情况
糖
溴甲酚紫
发
中性或
紫色
碱性
酵 试 验
黄色
酸性
对照 +
+
-
有细菌生长培养基呈混浊，可能出现3种结果。
（三）实验操作内容
2. 靛基质（吲哚）试验
（1）原理
靛 基
质
色氨酸
色氨酸酶
吲哚试剂
（ 吲
哚
培养基中加入
）
色氨酸
试
验
（三）实验操作内容
基
制备培养基
接种
培养
本
知
识
（一）细菌人工培养的基本知识
3. 细菌培养基的种类
根据营养组成和用途可分为
基
基础、增菌、选择、鉴别、厌氧
鉴别培养基
本 知
识
根据物理状态分为
液体、固体、半固体
（一）细菌人工培养的基本知识 3. 细菌培养基的种类
液体培养基
基
本
知
识
普通平板
血平板
半固体培养基
（一）细菌人工培养的基本知识
白 质
基 本
的
原
分
硫化氢试验
理
解
其
尿素酶试验
他
试
验 枸橼酸盐利用试验
（二）实验材料
1.菌种
大肠埃希菌、沙门氏菌
实
2.微量生化反应管
验 材
料
葡萄糖、乳糖、蔗糖、麦芽糖、甘露醇、
蛋白胨水（靛基质）、硫化氢。
3.试剂 吲哚试剂
（三）实验操作内容
1. 糖发酵试验
（1）原理
糖\醇类
细菌产生的酶 酸（HCOOH) 脱氢酶
基 本 知 识
烛缸二氧化碳培养法
厌氧袋
（二）细菌人工培养操作
1. 操作内容
操作内容
目的
操
作
平板分区划线
分离细菌
内 容
斜面纯培养
增菌及菌种保存
半固体培养
观察动力和菌种保存
（二）细菌人工培养操作
2. 材料
工具：接种环、接种针
实
菌种：金黄色葡萄球菌、大肠杆菌
验 材
培养基：
料
普通平板培养基、斜面培养基、半固体培养基
2. 靛基质（吲哚）试验 （2）结果判断 ——观察培养基与吲哚试剂 交界处颜色变化
靛 基 质 （ 吲 哚 ） 试 验
阳性 (+）
阴性 （-)
（三）实验操作内容
3. 硫化氢试验
（1）原理
硫
含硫氨基酸
酶
+铁离子
化 氢
或+铅离子
试
培养基中加入含
验
硫氨基酸、铅离
子、铁离子
（三）实验操作内容 3. 硫化氢试验 （2）结果判断
（二）细菌人工培养操作 2. 材料
实 验 材 料
普通平板培养基 (2-3%琼脂)
斜面培养基 (2-3%琼脂)
半固体培养基 (0.2-0.5%琼脂)
（二）细菌人工培养操作
3. 操作流程
领取菌种及培养基
操
分别进行平板、斜面及半固体培养基接种， 然后贴上标签。
作 流 程
37度恒温箱培养18～24小时后观察结果。