第14章 分枝杆菌
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• 国际分枝杆菌分类研究组（IWGMT）分为 三类，即缓慢生长菌、快速生长菌和不能 培养菌三种类型。
• Runyon按细菌产色素和生长速度将临床重 要分枝杆菌分为RunyonⅠ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ群
Runyon 分类法
Ⅰ群———光产色菌,如猿猴分枝杆菌、堪萨斯分枝 杆菌、海分枝杆菌; Ⅱ群———暗产色菌,如苏加分枝杆菌、蟾蜍分枝杆 菌、瘰疬分枝杆菌、戈登分枝杆菌; Ⅲ群———不产色菌,如鸟分枝杆菌复合群(M1avium complex ,MAC) 、玛尔摩分枝杆菌、土地分枝杆菌、 溃疡分枝杆菌、嗜血分枝杆菌; Ⅳ群———快生长菌,如偶发分枝杆菌、龟分枝杆菌、 脓肿分枝杆菌。
一、概述与分类
非结核分枝杆菌（Ｎontuberculosis
Mycobactericum，NTM） :
指结核分枝杆菌复合群(结核分枝杆菌、牛分 枝杆菌、非洲分枝杆菌、坎纳分枝杆菌和田鼠分 枝杆菌) 和麻风分枝杆菌以外的其他分枝杆菌。
概 述
• NTM种类众多，现已被鉴定的有150余种, 包括专性寄生菌、腐生菌和中间型。
• 有2000万活动性结核病患者
• 每年新发病900万人，死于结核病300万人
• 近年来，AIDS的发病率上升，AIDS患者又 极易患结核病，结核病已成为威胁人类健 康的一个严重的全球性公共卫生问题
二、临床意义
• WHO已把结核病与AIDS、疟疾一起 列为人类的最主要杀手
二、临床意义
(一) 所致疾病 通过呼吸道、消化道和损伤的皮肤等多途径 感染机体，引起多种脏器的结核病，其中以肺结 核为多见 (二)免疫性 有菌免疫或称传染性免疫 细胞免疫 迟发型超敏反应
如：广东省某中心卫生院剖宫 产患者手术切口感染事件。 该事件是由于手术器械灭菌不 合格导致的手术切口感染，病 原菌为快速生长型分枝杆菌。
警钟长鸣——NTM潜在杀手？
卫生部关于严重医院感染事件通报 —
1. 关于深圳市某医院发生严重医院感染事件的通报
2. 卫生部关于安徽省某立医院恶性医疗损害事件的通报 3. 关于西安交通大学医学院某医院发生严重医院感染事件的通报
4＋
>9/视野
>36/视野
核酸检测
• 用PCR法快速诊断MTB感染 • PCR法检测DNA特异性更强，敏感性更高 • PCR须按法规要求规范操作，应防止标本污染出现 假性结果
三、微生物学检验
（四）分离培养与鉴定 1.
– – – – –
培养特性
专性需氧 3％～5％CO2能促进其生长 营养要求高:须在含血清、卵黄、马铃薯、甘油以及含某些无机盐类的特殊培养 基上才能生长良好。常用罗氏培养基 最适生长温度为35～37℃，最适pH6.5～6.8 14～18h分裂1次，在固体培养基上2～5周才出现肉眼可见的菌落
4. 关于山西省太原某中心医院血液透析感染事件的通报
5. 关于天津市蓟县某院新生儿医院感染事件的通报 6. 卫生部关于安徽省某县医院血液透析患者感染丙肝事件的通报 7. 关于广东省汕头市潮阳区某中心卫生院剖宫产患者手术切口感染事件的 通报 ———摘自江苏省卫生厅《严重医院感染事件通报与处罚规定选编》 （2010年7月）
需氧菌
20～25℃或37℃均生长
抗酸性 分布
非抗酸性丝状菌 寄生口腔、上呼吸道、 胃肠道、泌尿生殖道 内源性感染 衣氏放线菌、龋齿放线菌 牛型放线菌
弱抗酸性 存在外界环境如土壤 多为腐生菌 外源性感染 星形诺卡菌、巴西诺卡菌
感染性 代表菌种
第一节 结核分枝杆菌
结核分枝杆菌（Mycobacterium tuberculosis，MTB） • 简称结核杆菌 • 人和动物结核病的病原菌
三、微生物学检验
（三）标本直接检查 1. 形态学检查
（1）直接涂片染色镜检
（2）浓缩集菌涂片检查法
2. 核酸检测
形态学检查
• 齐-尼染色（Ziehl-Neelsen technique）是 常用的抗酸染色法，染色后结核分枝杆菌 呈红色，背景呈蓝色
形态学检查
• 用荧光染料金胺“O”染色，在荧光显微镜 下菌体呈橘黄色
概 述
• 放线菌是多数不致病，对人致病的主要有放 线菌属和诺卡菌属。 • 前者为厌氧或微需氧菌，细胞壁中不含分枝 菌酸，多引起内源性感染。 • 后者为需氧菌，细胞壁中含有分枝菌酸，非 人体正常菌群的成员，常引起外源性感染。
放线菌与诺卡菌的区别
特征 放线菌 诺卡菌
培养特性
厌氧或微需氧
35～37℃生长 20～25℃不生长
分子生物法菌种鉴定
• PCR 限制性片段长度多态性分析（PCRRFLP） • PCR单链构象多态性分析（PCR-SSCP） • 核酸探针 • 核酸序列分析 • 多重PCR
高效液相色谱（HPLC）
• 检测分枝菌酸：由于不同种的分枝杆菌细 胞壁中的分枝菌酸不同，所以利用HPLC检 测分枝菌酸可鉴定菌种。
结核分枝杆菌抗原检测
• 用ELISA 方法在血清中检测结核分枝杆菌 抗原-结核菌外分泌特异性抗原 (external secreted specific antigen) 浓度。 • 任何体液如血液、痰液、脊髓液、尿液和 各式组织萃取液等体液可用于检测特异蛋 白抗原。
结核抗体
• 作为活动性MTB感染的快速诊断方法之一 • 比传统的痰涂片抗酸染色、MTB培养等方法简便、 快速、敏感性高，但存在一定的假阳性。 • 近年，胶体金、蛋白芯片检查结核杆菌IgG抗体 抗体，特别是后者，针对三种抗原（脂阿拉伯甘 露糖、38K Da和16K Da蛋白质抗原），其灵敏 度和特异性均有所提高。
光产色分枝杆菌（Runyon Ⅰ群）
• 堪萨斯分枝杆菌（M.kansaii）：能引起肺内和肺外类似 结核样的病变 • 海分枝杆菌(M.marinum)：存在于淡水或海水。除可引起 冷血动物（如鱼）感染外，亦能引起人的感染。通过皮肤 微小创口侵入皮肤而引起所谓的“游泳池肉芽肿”。渔业 工人可经受损皮肤遭受感染
3D-120型
三、微生物学检验
（四）分离培养与鉴定 3. 菌种鉴定
(1) 生化反应
（2）噬菌体鉴定法
（3）分子生物法菌种鉴定
(4)高效液相色谱（HPLC）检测分枝菌酸
生化反应--烦琐、费时（ 4～8 周）,影响因素多
• 结核分枝杆菌不发酵糖类 • 能产生触酶 • 人型MTB能合成烟酸，还原硝酸盐，耐受 噻吩-2-羧酸酰肼，而牛型MTB则不能 • 人型和牛型的毒株中性红试验均阳性，无 毒株则为阴性，并失去索状生长现象
• 猿分枝杆菌（M.simiae）：首先从猿分离到此菌，形态 同结核分枝杆菌，可感染人类
暗产色分枝杆菌（Runyon Ⅱ群）
• 瘰疬分枝杆菌（M.scrofulaceum）：可引 起人的淋巴结炎或肺部感染。 • 斯氏分枝杆菌(M.szulgai)：可引起成人肺 部的慢性感染。
涂片镜检的报告方式
半定量报告
石炭酸复红染色：抗 酸杆菌（1000×）
未找到抗酸菌 0 可疑抗酸杆菌； 1～2/300视野 再送标本检测
1＋ 2＋ 3＋ 1～9/100视野 1～9/10视野 1～9/视野
荧光染色：抗酸 杆菌 （450×） 0 1～2/70视野
2～18/50视野 4～36/10视野 4～36/视野
第14章 分枝杆菌、 放线菌与诺卡菌
河北医科大学 赵建宏
概 述
• 分枝杆菌与放线菌属放线菌目 （Actinomycetates） • 分枝杆菌属（Mycobacterium）是一类细长略带 弯曲专性需氧性杆菌。该菌一般认为革兰染色阳 性。多数细菌在生长的一定时期抵抗酸-醇（acidalcohol-fast），故又称抗酸杆菌（acid-fast bacillus） • 放线菌（Actinomyces）是一群在生物学特性上 与细菌类同的原核细胞型微生物，与分枝杆菌、 棒状杆菌等有着亲缘关系
一、分 类
• MTB包括 人结核分枝杆菌（M.tuberculosis） 牛分枝杆菌（M.bovis） 非洲分枝杆菌（M.africanum） 坎纳分枝杆菌（M.canettii） 田鼠分枝杆菌(M.microti)等 • 前四种对人类致病，其中人型MTB感染率最高
二、临床意义
• 大约1/3的人口已感染MTB
(四)耐药性
• 对常见抗菌药物天然耐药
• 多 重 耐 药 结 核 病 (multiple-drug resistance tuberculosis，MDRTB)是指对2种或2种以上的抗 结核药产生耐药性的结核菌感染。临床治疗相当 棘手，死亡率很高
三、微生物学检验
（一）基本特性 • 结核分枝杆菌尚未发现产生内毒素、外毒 素及侵袭性酶 • 致病性可能与细菌在组织细胞内大量繁殖 引起的炎症、代谢物质的毒性以及菌体成 分引起的免疫损伤有关 • 结核分枝杆菌的致病物质主要是荚膜、脂 质和蛋白质
三、微生物学检验
（二）标本采集 • 据感染部位的不同采集不同的标本 • 疑肺结核：收集清晨第一口痰，清洁干燥的容器内送检 • 疑泌尿系结核：清晨一次全部尿量或24小时尿沉淀10～ 15ml送检，必要时作无菌导尿送检（诊断泌尿道结核通 常需3～5份标本） • 采集脓液应直接从溃疡处取脓汁或分泌物,深部脓肿用无 菌注射器抽取送检 • 其他：无菌抽取脑脊液、胸水、腹水及关节液等盛无菌 试管送检。脑脊液标本静置后，表面可有细薄凝块，取 凝块作涂片或接种培养
–
典型菌落为粗糙型，表面干燥呈颗粒状，不透明，乳白色或淡黄色，如菜花样
2.分离培养
• 标本接种于选择性培养基中(常用罗氏，所 含的孔雀绿或青霉素可抑制杂菌生长) • 37℃，5％～10％CO2培养8周 • 结核杆菌出现干燥呈颗粒状、灰白色菌落 • 涂片染色为抗酸阳性
Bactec –TB 960快速培养系统
三、微生物检验
（六）药物敏感性试验
• 将纯培养物菌悬液，接种含各种浓度药物的固体 培养基上，同时做不含药物的对照组。 • 经过培养，含有药物的培养基上菌落数目是对照
组的75％以上，则认为该菌对该药物浓度为完全
耐药，如无菌落生长则为敏感。
第二节
一、概述与分类
非结核分枝杆菌
二、临床意义
三、微生物学检验
噬菌体鉴定法（PhBaidu NhomakorabeaB）
• Wilson 等于1997年建立的快速检测新技术 • 原理：是分枝杆菌噬菌体D29能感染活的分 枝杆菌,未进入感染菌体内的噬菌体被随后加 入的杀毒剂灭活 ,已进入菌体内的噬菌体不 受影响。噬菌体在感染菌体内大量增殖 ,并 将菌体裂解 ,释放出的子代噬菌体可感染随 后加入的指示细胞 ,并将其裂解 ,在琼脂平板 上出现透亮的噬菌斑。
三、微生物学检验
（五） 免疫学诊断 1．结核菌素试验
2．结核分枝杆菌抗原检测
3. 结核分枝杆菌抗体检测
4. 全血干扰素测定法
结核菌素试验
• 针对旧结核菌素(OT)与结核菌素纯蛋白衍生物 (PPD)两种菌体蛋白 • 原理：当将蛋白注入皮内后，如受试者已感染 结核杆菌，则结核菌素与致敏淋巴细胞特异性 结合，在局部释放淋巴因子，形成迟发性超敏 反应性炎症，若受试者未感染MTB则无反应。
全血干扰素测定法
• 原理：当全血与PPD和对照抗原（植物血凝素）共同 孵育后，致敏的淋巴细胞可分泌IFN-γ ，通过检测 IFN-γ 的含量来鉴定菌种。 • 2004年，Quantiferon-TB Gold assay 问世，应用 结核分枝杆菌RD1区域编码的早期分泌抗原靶（ESAT） 和培养滤液蛋白（CFP-10）特异抗原刺激细胞检测。 • 近来ESAT/CFP-10融合蛋白-ELISPOT用于诊断活动 性结核病，准确、灵敏、特异、快速。 • 结果与结核菌素试验相当，干扰因素小。
二、临床意义
• 迄今为止已发现NTM有150余种，其中约1/3 与人类疾病有关。 条件致病菌 毒力低于结核分枝杆菌 自然界中广泛存在 可以在人体某些部位定植 • 结核病和NTM感染的治疗不同
为何要关注NTM？
自然界中广泛存在，如水、土壤和气溶 胶，可导致免疫力低下的患者感染。 近年来，因手术器械、注射器具及医疗 用水等灭菌不合格、使用不规范造成患者手 术切口、注射部位NTM感染暴发事件。
二、临床意义
(三) 变异 • 结核分枝杆菌易发生形态、菌落、生长温度、毒 力以及耐药性的变异 • 卡介苗（Bacillus Calmette-Guérin，BCG）是有 毒力的牛型结核分枝杆菌在甘油、胆汁和马铃薯 的培养基中经13年230次传代而获得的减毒变异株 • 现已广泛用于人类结核病的防治
二、临床意义
• Runyon按细菌产色素和生长速度将临床重 要分枝杆菌分为RunyonⅠ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ群
Runyon 分类法
Ⅰ群———光产色菌,如猿猴分枝杆菌、堪萨斯分枝 杆菌、海分枝杆菌; Ⅱ群———暗产色菌,如苏加分枝杆菌、蟾蜍分枝杆 菌、瘰疬分枝杆菌、戈登分枝杆菌; Ⅲ群———不产色菌,如鸟分枝杆菌复合群(M1avium complex ,MAC) 、玛尔摩分枝杆菌、土地分枝杆菌、 溃疡分枝杆菌、嗜血分枝杆菌; Ⅳ群———快生长菌,如偶发分枝杆菌、龟分枝杆菌、 脓肿分枝杆菌。
一、概述与分类
非结核分枝杆菌（Ｎontuberculosis
Mycobactericum，NTM） :
指结核分枝杆菌复合群(结核分枝杆菌、牛分 枝杆菌、非洲分枝杆菌、坎纳分枝杆菌和田鼠分 枝杆菌) 和麻风分枝杆菌以外的其他分枝杆菌。
概 述
• NTM种类众多，现已被鉴定的有150余种, 包括专性寄生菌、腐生菌和中间型。
• 有2000万活动性结核病患者
• 每年新发病900万人，死于结核病300万人
• 近年来，AIDS的发病率上升，AIDS患者又 极易患结核病，结核病已成为威胁人类健 康的一个严重的全球性公共卫生问题
二、临床意义
• WHO已把结核病与AIDS、疟疾一起 列为人类的最主要杀手
二、临床意义
(一) 所致疾病 通过呼吸道、消化道和损伤的皮肤等多途径 感染机体，引起多种脏器的结核病，其中以肺结 核为多见 (二)免疫性 有菌免疫或称传染性免疫 细胞免疫 迟发型超敏反应
如：广东省某中心卫生院剖宫 产患者手术切口感染事件。 该事件是由于手术器械灭菌不 合格导致的手术切口感染，病 原菌为快速生长型分枝杆菌。
警钟长鸣——NTM潜在杀手？
卫生部关于严重医院感染事件通报 —
1. 关于深圳市某医院发生严重医院感染事件的通报
2. 卫生部关于安徽省某立医院恶性医疗损害事件的通报 3. 关于西安交通大学医学院某医院发生严重医院感染事件的通报
4＋
>9/视野
>36/视野
核酸检测
• 用PCR法快速诊断MTB感染 • PCR法检测DNA特异性更强，敏感性更高 • PCR须按法规要求规范操作，应防止标本污染出现 假性结果
三、微生物学检验
（四）分离培养与鉴定 1.
– – – – –
培养特性
专性需氧 3％～5％CO2能促进其生长 营养要求高:须在含血清、卵黄、马铃薯、甘油以及含某些无机盐类的特殊培养 基上才能生长良好。常用罗氏培养基 最适生长温度为35～37℃，最适pH6.5～6.8 14～18h分裂1次，在固体培养基上2～5周才出现肉眼可见的菌落
4. 关于山西省太原某中心医院血液透析感染事件的通报
5. 关于天津市蓟县某院新生儿医院感染事件的通报 6. 卫生部关于安徽省某县医院血液透析患者感染丙肝事件的通报 7. 关于广东省汕头市潮阳区某中心卫生院剖宫产患者手术切口感染事件的 通报 ———摘自江苏省卫生厅《严重医院感染事件通报与处罚规定选编》 （2010年7月）
需氧菌
20～25℃或37℃均生长
抗酸性 分布
非抗酸性丝状菌 寄生口腔、上呼吸道、 胃肠道、泌尿生殖道 内源性感染 衣氏放线菌、龋齿放线菌 牛型放线菌
弱抗酸性 存在外界环境如土壤 多为腐生菌 外源性感染 星形诺卡菌、巴西诺卡菌
感染性 代表菌种
第一节 结核分枝杆菌
结核分枝杆菌（Mycobacterium tuberculosis，MTB） • 简称结核杆菌 • 人和动物结核病的病原菌
三、微生物学检验
（三）标本直接检查 1. 形态学检查
（1）直接涂片染色镜检
（2）浓缩集菌涂片检查法
2. 核酸检测
形态学检查
• 齐-尼染色（Ziehl-Neelsen technique）是 常用的抗酸染色法，染色后结核分枝杆菌 呈红色，背景呈蓝色
形态学检查
• 用荧光染料金胺“O”染色，在荧光显微镜 下菌体呈橘黄色
概 述
• 放线菌是多数不致病，对人致病的主要有放 线菌属和诺卡菌属。 • 前者为厌氧或微需氧菌，细胞壁中不含分枝 菌酸，多引起内源性感染。 • 后者为需氧菌，细胞壁中含有分枝菌酸，非 人体正常菌群的成员，常引起外源性感染。
放线菌与诺卡菌的区别
特征 放线菌 诺卡菌
培养特性
厌氧或微需氧
35～37℃生长 20～25℃不生长
分子生物法菌种鉴定
• PCR 限制性片段长度多态性分析（PCRRFLP） • PCR单链构象多态性分析（PCR-SSCP） • 核酸探针 • 核酸序列分析 • 多重PCR
高效液相色谱（HPLC）
• 检测分枝菌酸：由于不同种的分枝杆菌细 胞壁中的分枝菌酸不同，所以利用HPLC检 测分枝菌酸可鉴定菌种。
结核分枝杆菌抗原检测
• 用ELISA 方法在血清中检测结核分枝杆菌 抗原-结核菌外分泌特异性抗原 (external secreted specific antigen) 浓度。 • 任何体液如血液、痰液、脊髓液、尿液和 各式组织萃取液等体液可用于检测特异蛋 白抗原。
结核抗体
• 作为活动性MTB感染的快速诊断方法之一 • 比传统的痰涂片抗酸染色、MTB培养等方法简便、 快速、敏感性高，但存在一定的假阳性。 • 近年，胶体金、蛋白芯片检查结核杆菌IgG抗体 抗体，特别是后者，针对三种抗原（脂阿拉伯甘 露糖、38K Da和16K Da蛋白质抗原），其灵敏 度和特异性均有所提高。
光产色分枝杆菌（Runyon Ⅰ群）
• 堪萨斯分枝杆菌（M.kansaii）：能引起肺内和肺外类似 结核样的病变 • 海分枝杆菌(M.marinum)：存在于淡水或海水。除可引起 冷血动物（如鱼）感染外，亦能引起人的感染。通过皮肤 微小创口侵入皮肤而引起所谓的“游泳池肉芽肿”。渔业 工人可经受损皮肤遭受感染
3D-120型
三、微生物学检验
（四）分离培养与鉴定 3. 菌种鉴定
(1) 生化反应
（2）噬菌体鉴定法
（3）分子生物法菌种鉴定
(4)高效液相色谱（HPLC）检测分枝菌酸
生化反应--烦琐、费时（ 4～8 周）,影响因素多
• 结核分枝杆菌不发酵糖类 • 能产生触酶 • 人型MTB能合成烟酸，还原硝酸盐，耐受 噻吩-2-羧酸酰肼，而牛型MTB则不能 • 人型和牛型的毒株中性红试验均阳性，无 毒株则为阴性，并失去索状生长现象
• 猿分枝杆菌（M.simiae）：首先从猿分离到此菌，形态 同结核分枝杆菌，可感染人类
暗产色分枝杆菌（Runyon Ⅱ群）
• 瘰疬分枝杆菌（M.scrofulaceum）：可引 起人的淋巴结炎或肺部感染。 • 斯氏分枝杆菌(M.szulgai)：可引起成人肺 部的慢性感染。
涂片镜检的报告方式
半定量报告
石炭酸复红染色：抗 酸杆菌（1000×）
未找到抗酸菌 0 可疑抗酸杆菌； 1～2/300视野 再送标本检测
1＋ 2＋ 3＋ 1～9/100视野 1～9/10视野 1～9/视野
荧光染色：抗酸 杆菌 （450×） 0 1～2/70视野
2～18/50视野 4～36/10视野 4～36/视野
第14章 分枝杆菌、 放线菌与诺卡菌
河北医科大学 赵建宏
概 述
• 分枝杆菌与放线菌属放线菌目 （Actinomycetates） • 分枝杆菌属（Mycobacterium）是一类细长略带 弯曲专性需氧性杆菌。该菌一般认为革兰染色阳 性。多数细菌在生长的一定时期抵抗酸-醇（acidalcohol-fast），故又称抗酸杆菌（acid-fast bacillus） • 放线菌（Actinomyces）是一群在生物学特性上 与细菌类同的原核细胞型微生物，与分枝杆菌、 棒状杆菌等有着亲缘关系
一、分 类
• MTB包括 人结核分枝杆菌（M.tuberculosis） 牛分枝杆菌（M.bovis） 非洲分枝杆菌（M.africanum） 坎纳分枝杆菌（M.canettii） 田鼠分枝杆菌(M.microti)等 • 前四种对人类致病，其中人型MTB感染率最高
二、临床意义
• 大约1/3的人口已感染MTB
(四)耐药性
• 对常见抗菌药物天然耐药
• 多 重 耐 药 结 核 病 (multiple-drug resistance tuberculosis，MDRTB)是指对2种或2种以上的抗 结核药产生耐药性的结核菌感染。临床治疗相当 棘手，死亡率很高
三、微生物学检验
（一）基本特性 • 结核分枝杆菌尚未发现产生内毒素、外毒 素及侵袭性酶 • 致病性可能与细菌在组织细胞内大量繁殖 引起的炎症、代谢物质的毒性以及菌体成 分引起的免疫损伤有关 • 结核分枝杆菌的致病物质主要是荚膜、脂 质和蛋白质
三、微生物学检验
（二）标本采集 • 据感染部位的不同采集不同的标本 • 疑肺结核：收集清晨第一口痰，清洁干燥的容器内送检 • 疑泌尿系结核：清晨一次全部尿量或24小时尿沉淀10～ 15ml送检，必要时作无菌导尿送检（诊断泌尿道结核通 常需3～5份标本） • 采集脓液应直接从溃疡处取脓汁或分泌物,深部脓肿用无 菌注射器抽取送检 • 其他：无菌抽取脑脊液、胸水、腹水及关节液等盛无菌 试管送检。脑脊液标本静置后，表面可有细薄凝块，取 凝块作涂片或接种培养
–
典型菌落为粗糙型，表面干燥呈颗粒状，不透明，乳白色或淡黄色，如菜花样
2.分离培养
• 标本接种于选择性培养基中(常用罗氏，所 含的孔雀绿或青霉素可抑制杂菌生长) • 37℃，5％～10％CO2培养8周 • 结核杆菌出现干燥呈颗粒状、灰白色菌落 • 涂片染色为抗酸阳性
Bactec –TB 960快速培养系统
三、微生物检验
（六）药物敏感性试验
• 将纯培养物菌悬液，接种含各种浓度药物的固体 培养基上，同时做不含药物的对照组。 • 经过培养，含有药物的培养基上菌落数目是对照
组的75％以上，则认为该菌对该药物浓度为完全
耐药，如无菌落生长则为敏感。
第二节
一、概述与分类
非结核分枝杆菌
二、临床意义
三、微生物学检验
噬菌体鉴定法（PhBaidu NhomakorabeaB）
• Wilson 等于1997年建立的快速检测新技术 • 原理：是分枝杆菌噬菌体D29能感染活的分 枝杆菌,未进入感染菌体内的噬菌体被随后加 入的杀毒剂灭活 ,已进入菌体内的噬菌体不 受影响。噬菌体在感染菌体内大量增殖 ,并 将菌体裂解 ,释放出的子代噬菌体可感染随 后加入的指示细胞 ,并将其裂解 ,在琼脂平板 上出现透亮的噬菌斑。
三、微生物学检验
（五） 免疫学诊断 1．结核菌素试验
2．结核分枝杆菌抗原检测
3. 结核分枝杆菌抗体检测
4. 全血干扰素测定法
结核菌素试验
• 针对旧结核菌素(OT)与结核菌素纯蛋白衍生物 (PPD)两种菌体蛋白 • 原理：当将蛋白注入皮内后，如受试者已感染 结核杆菌，则结核菌素与致敏淋巴细胞特异性 结合，在局部释放淋巴因子，形成迟发性超敏 反应性炎症，若受试者未感染MTB则无反应。
全血干扰素测定法
• 原理：当全血与PPD和对照抗原（植物血凝素）共同 孵育后，致敏的淋巴细胞可分泌IFN-γ ，通过检测 IFN-γ 的含量来鉴定菌种。 • 2004年，Quantiferon-TB Gold assay 问世，应用 结核分枝杆菌RD1区域编码的早期分泌抗原靶（ESAT） 和培养滤液蛋白（CFP-10）特异抗原刺激细胞检测。 • 近来ESAT/CFP-10融合蛋白-ELISPOT用于诊断活动 性结核病，准确、灵敏、特异、快速。 • 结果与结核菌素试验相当，干扰因素小。
二、临床意义
• 迄今为止已发现NTM有150余种，其中约1/3 与人类疾病有关。 条件致病菌 毒力低于结核分枝杆菌 自然界中广泛存在 可以在人体某些部位定植 • 结核病和NTM感染的治疗不同
为何要关注NTM？
自然界中广泛存在，如水、土壤和气溶 胶，可导致免疫力低下的患者感染。 近年来，因手术器械、注射器具及医疗 用水等灭菌不合格、使用不规范造成患者手 术切口、注射部位NTM感染暴发事件。
二、临床意义
(三) 变异 • 结核分枝杆菌易发生形态、菌落、生长温度、毒 力以及耐药性的变异 • 卡介苗（Bacillus Calmette-Guérin，BCG）是有 毒力的牛型结核分枝杆菌在甘油、胆汁和马铃薯 的培养基中经13年230次传代而获得的减毒变异株 • 现已广泛用于人类结核病的防治
二、临床意义