芽胞染色及的观察照片

细菌芽孢染色及酵母菌观察标准实验结果

1.细菌芽孢染色:

①涂片、加热干燥及固定；

②向载玻片滴加数滴5%孔雀绿水溶液覆盖涂菌部位，用木夹子夹住载玻片在微火上加热染

液冒蒸气计时并维持5min，加热时注意补充染液，切勿让涂片干涸；

③待玻片冷却后，用缓流自来水冲洗至流出水无色为止；

④用0.5%番红水溶液复染2min；

⑤用缓流自来水冲洗至流出水无色为止；

⑥将载玻片晾干后油镜镜检。

2.酵母菌观察:

（1）美兰染液水浸片法：

①在载玻片中央加一滴美蓝染色液，用接种环挑取少量酵母菌液，混合均匀；

②用镊子取一块盖玻片，先将一边与菌液接触，然后慢慢将盖玻片放下使其盖在菌液上，

避免产生气泡；

③将制片放置约3min，先低倍镜后高倍镜观察酵母形态和出芽情况，并根据颜色区别死活

细胞；

④染色30min后再次观察，注意死活细胞比例是否发生变化。

（2）子囊孢子的观察：

①取经产孢培养的酵母斜面培养物，在洁净载玻片上按常规涂片、干燥固定；

②滴加孔雀绿染液染色 1min~1.5min，水洗；

③用 95% 的乙醇脱色 30s，水洗；

④用番红复染 30s~1min，水洗，干燥；

⑤干后用油镜观察子囊孢子的形态。

五、【实验结果】

1.细菌芽胞染色

②枯草芽孢杆菌和梭形芽胞杆菌芽孢形态对比：

（A）枯草芽孢杆菌芽孢（B）梭形芽胞杆菌芽孢

2.酵母菌观察：

（1）美兰浸片观察：

①酵母菌出芽生殖图

酵母菌出芽生殖的过程：菌体的一端冒出一个小芽，渐渐变大，最终脱离母体。

②染色3min和染色30min后酵母菌死活细菌对比：

(A)染色3min (B)染色30min

结果分析：

2.染色3min后酵母菌存活比例为1/7；染色30min后酵母菌存活比例明显下降，仅为1/36。由此可见，染色时间越长，酵母菌存活比例越低。

（2）酵母菌子囊孢子观察：

1.经过染色后，显微镜下菌体有蓝色和无色两种，其中蓝色是死菌，无色为活菌。

结果分析：

在酵母菌子囊孢子观察中，在视野中几乎观察不到绿色的芽孢，经过三次制片后，只能观察到几个子囊（如上图）。分析其原因，可能是菌种培养时间不够，故菌种产孢子效果不好。

六、【思考题】

1．为什么芽孢染色需要进行加热？能否用简单染色法观察到细菌芽孢？

答：加热促进芽胞着色。芽胞壁厚，透性低，不易着色，一般染色法只能使菌体着色而芽胞不着色，芽胞呈无色透明状。

2．若在你的制片中仅看到游离芽孢，而很少看到芽孢囊和营养细胞，试分析原因。

答：①由于芽孢的壁厚，耐压力比细胞体强。因此有可能是由于在图片是用力过大，将细胞体的细胞壁压碎，从而使芽孢脱落出来的缘故。②也有可能是由于菌体培养时间过久，芽胞正处于复苏阶段，所以大多芽孢都从饱囊中游离出来。

3. 用孔雀绿初染芽孢后，为什么必须等玻片冷却后再用水冲洗？

答：若玻片不冷却就用水冲洗，会使玻片因突然遇冷而炸裂。

4. 根据你的观察结果，美兰染液浓度及作用时间与酿酒酵母死、活细胞比例变化是否有关系？是分析原因。

答：有关系。

原因：①染色剂作用时间较慢，随时间的增加被染的死细胞数目增多；

②染色剂导致菌体细胞脱水，时间越长，酵母菌死亡数目越多；

③随时间增加，更多代谢缓慢的老细胞被染色，观察时被当做死细胞。