实验二 线粒体超活染色技术及观察

实验2 实验 线粒体超活染色技术及观察分析 【实验目的】 实验目的】 学习线粒体的超活染色技术； 学习线粒体的超活染色技术；观察动植物 活细胞内线粒体的形态数量与分布。 活细胞内线粒体的形态数量与分布。 【实验原理】 实验原理】 活体染色是指对生活有机体的细胞或组 织能着色但又无毒害的一种染色方法.其目的 织能着色但又无毒害的一种染色方法 其目的 是显示生活细胞内的某些结构,而不影响细胞 是显示生活细胞内的某些结构 而不影响细胞 的生命活动和产生任何理化变化以致引起细 胞死亡.活染技术可用来研究生活状态下的细 胞死亡 活染技术可用来研究生活状态下的细 胞形态结构和生理、病理状态。 胞形态结构和生理、病理状态。
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【注意事项】 注意事项】 1、显微镜的使用 、 2、掌握好詹纳斯绿Ｂ染色时间 、掌握好詹纳斯绿Ｂ 3、实验结束后，注意清理实验用具 、实验结束后， 作业】 【作业】 1、绘出人口腔上皮细胞和洋葱鳞茎内表皮 、 细胞示线粒体的形态与分布 • 2、分析染色时间对结果影响。 、分析染色时间对结果影响。
• 根据所用染色剂的性质和染色方法的不同 活体染 根据所用染色剂的性质和染色方法的不同, 色可分为体内活染与体外活染两类.体内活染是以 色可分为体内活染与体外活染两类 体内活染是以 胶体状的染料溶液注入动植物体内,染料的胶粒固 胶体状的染料溶液注入动植物体内 染料的胶粒固 定于细胞内某些特殊结构内以达到易于识别的目的. 定于细胞内某些特殊结构内以达到易于识别的目的 体外活染又称超活染色， 体外活染又称超活染色，是由活的动植物分离出部 分细胞或组织小块，以染料溶液浸染， 分细胞或组织小块，以染料溶液浸染，染料因其 电化学” “电化学”特性与被染部分相互吸引被选择固定在 活细胞的某种结构中而显色。 活细胞的某种结构中而显色。 • 但不是任何染料都可作为活体染色剂使用 一般应 但不是任何染料都可作为活体染色剂使用,一般应 选择那些无毒或毒性小的碱性染料(易溶于类脂质 易溶于类脂质) 选择那些无毒或毒性小的碱性染料 易溶于类脂质 并配成较稀的溶液来使用.詹纳斯绿 詹纳斯绿Ｂ 并配成较稀的溶液来使用 詹纳斯绿Ｂ是活体染色 中重要的染料，对线粒体有专一性．詹纳斯绿Ｂ 中重要的染料，对线粒体有专一性．詹纳斯绿Ｂ可 专一性地对对线粒体进行活染， 专一性地对对线粒体进行活染，这是由于线粒体内 的细胞色素氧化酶系的作用,使染料始终保持氧化 的细胞色素氧化酶系的作用 使染料始终保持氧化 状态(即有色状态 呈蓝绿色;而线粒体周围的细胞 即有色状态),呈蓝绿色 状态 即有色状态 呈蓝绿色 而线粒体周围的细胞 质中,这些染料被还原为无色的色基 这些染料被还原为无色的色基。 质中 这些染料被还原为无色的色基。
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【实验用品】 实验用品】 材料： 材料： 人口腔上皮细胞、 人口腔上皮细胞、洋葱鳞茎内表皮细胞 器材： 器材： 显微镜、恒温水浴锅、刀片、镊子、载玻片、盖玻片、 显微镜、恒温水浴锅、刀片、镊子、载玻片、盖玻片、牙 吸水纸、 签、吸水纸、洋葱 试剂： ２、试剂： （1）Ringer溶液 ） 溶液 0.85 g 氯化钠 氯化钾 0.25 g 0.03 g 氯化钙 詹纳斯绿Ｂ （2）1/5000詹纳斯绿Ｂ溶液： ） 詹纳斯绿 溶液： 称取0.5g詹纳斯绿Ｂ溶于 詹纳斯绿Ｂ 溶液中， 称取 詹纳斯绿 溶于5ml Ringer溶液中，稍加热 溶液中 稍加热(3040℃)溶解，用滤纸过滤后，即为 原液。 溶解， 原液。 ℃ 溶解 用滤纸过滤后，即为1%原液 原液加入49mlRinger溶液，即得 溶液， 工作液， 取1ml1%原液加入 原液加入 溶液 即得1/5000工作液， 工作液 将其装入棕色瓶中备用。最好现配现用， 将其装入棕色瓶中备用。最好现配现用，以保持充分的氧 化能力。 化能力。
பைடு நூலகம்
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【实验方法】 实验方法】 １、人口腔黏膜上皮细胞线粒体的超活染色与观察 （1）取载玻片于 ℃恒温水浴： ）取载玻片于37℃恒温水浴： 詹纳斯绿Ｂ （2）1/5000詹纳斯绿Ｂ溶液 2滴 ） 詹纳斯绿 滴 （3）人口腔上皮细胞黏液 ） 牙签刮取 （4）染色 ～15min，盖上盖玻片，吸去周围染液， ）染色10～ ，盖上盖玻片，吸去周围染液， 显微镜下观察。 显微镜下观察。 个细胞中线粒体数目， （5）计数 个细胞中线粒体数目，得出平均值。 ）计数50个细胞中线粒体数目 得出平均值。 ２、洋葱鳞茎内表皮细胞线粒体的超活染色与观察 （1）取载玻片于 ℃恒温水浴： ）取载玻片于37℃恒温水浴： （2）1/5000詹纳斯绿Ｂ溶液 2滴 ） 詹纳斯绿Ｂ 滴 詹纳斯绿 （3）洋葱鳞茎内表皮 ） 镊子撕取 溶液１ （4）染色 ～15min，吸去染液，加Ringer溶液１ ）染色10～ ，吸去染液， 溶液 盖上盖玻片，显微镜下观察． 滴，盖上盖玻片，显微镜下观察． 个细胞中线粒体数目， （5）计数 个细胞中线粒体数目，得出平均值 ）计数50个细胞中线粒体数目 得出平均值。