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基因文库 （基因组文库和 cDNA文库），化学合 成，PCR 等方法。还有 DD-PCR以及基因芯片 等技 术。
（一）基因组文库 目的：种质资源的保护；基因组测序；基因组
基因或调控序列的克隆等。
（二） cDNA文库的构建
五、表达载体（重组质粒）的构建与鉴定
1. DNA（载体和目的片段）的酶切与回收。 2. 目的片段与载体的连接。二者的摩尔比应满足以下
（二）核酸电泳技术
1. 琼脂糖凝胶电泳 2. SDS-PAGE
（三）感受态细胞的制备与转化
真核细胞总 RNA的电泳结果：
核酸电泳技术
1. 琼脂糖凝胶电泳
1
23
4
5
2000
1000 750 500
200
100
1 DL2000 marker 2 BamHI 和EcoRI 双切 3 BamHI 单切 4 HindⅢ单切 5 重组质粒 pVAX1/ABPS1
第08章 核酸药物与基因治疗
本章的重点内容： 1. 什么是基因工程？ 2. 获得目的基因的方法有哪些？ 3. DNA双脱氧测序技术的基本原理。 4. PCR技术的基本原理及其应用。 5. 基因定点突变技术及其应用。 6. 表达载体的构建策略与技术方法。
第一节 基因工程原理简介
一、基因工程的定义
本义：根据人们的意愿，利用工程设计的方法，在体外将 克隆获得的目的基因与适当的载体进行切割和连接，构建成正 确的重组表达载体，再应用物理的、化学的或生物学的方法将 该表达载体导入到细菌、动植物细胞或受精卵中，使目的基因 在宿主体内以瞬时方式或稳定方式进行表达，借此研究目的基 因的结构与功能，或赋予宿主以新的遗传性状，或获得该基因 的表达产物。这一过程就是基因工程。
百度文库
三、基因工程中的工具
（一）载体
1.质粒(plasmid) 2.粘粒(cosmid) 3.λ 噬菌体(λ phage)
（二）工具酶
1.限制性内切酶 2.外切酶 3.连接酶 4.聚合酶: klenow I 5.核酸酶
（三）宿主菌 DH5? , JM101, JM109; DE3等
四、获得目的基因的方法
比例：粘端： 3~5:1；钝端： 6~8:1 3. 转化与重组质粒的筛选、鉴定。
1）初步鉴定：抗性； α-互补；快速鉴定；原位杂交； PCR。
2）酶切鉴定：大小和方向。 3）测序鉴定：双脱氧测序法。
广义：转基因动物；克隆；基因打靶；基因组计划等均属 于基因工程的范畴。
二、基因工程的基本步骤
目的基因获得 表达载体构建与鉴定
基因的导入 整合与表达的鉴定 表达产物的提取、纯化与鉴定
核酸药物 基因工程药物
第二节 基因工程中的方法学
一、基因工程的基本技术
（一）核酸的提取纯化
1. RNA提取纯化技术； 2. DNA提取纯化技术； 3. plasmid提取纯化技术。
2. SDS-PAGE
二、一些重要技术原理介绍
重点： DNA双脱氧 测序技术，核酸探针技术， PCR技术等。（参见第 5章）
（一） DNA 双脱氧测序 （二）核酸杂交技术 （三） PCR 技术
（四）目的基因的改造技术 1. 引物介导的基因定点突变技术 2. 盒式突变 (cassette mutagenesis) 3. Genes Shuffling
（一）基因组文库 目的：种质资源的保护；基因组测序；基因组
基因或调控序列的克隆等。
（二） cDNA文库的构建
五、表达载体（重组质粒）的构建与鉴定
1. DNA（载体和目的片段）的酶切与回收。 2. 目的片段与载体的连接。二者的摩尔比应满足以下
（二）核酸电泳技术
1. 琼脂糖凝胶电泳 2. SDS-PAGE
（三）感受态细胞的制备与转化
真核细胞总 RNA的电泳结果：
核酸电泳技术
1. 琼脂糖凝胶电泳
1
23
4
5
2000
1000 750 500
200
100
1 DL2000 marker 2 BamHI 和EcoRI 双切 3 BamHI 单切 4 HindⅢ单切 5 重组质粒 pVAX1/ABPS1
第08章 核酸药物与基因治疗
本章的重点内容： 1. 什么是基因工程？ 2. 获得目的基因的方法有哪些？ 3. DNA双脱氧测序技术的基本原理。 4. PCR技术的基本原理及其应用。 5. 基因定点突变技术及其应用。 6. 表达载体的构建策略与技术方法。
第一节 基因工程原理简介
一、基因工程的定义
本义：根据人们的意愿，利用工程设计的方法，在体外将 克隆获得的目的基因与适当的载体进行切割和连接，构建成正 确的重组表达载体，再应用物理的、化学的或生物学的方法将 该表达载体导入到细菌、动植物细胞或受精卵中，使目的基因 在宿主体内以瞬时方式或稳定方式进行表达，借此研究目的基 因的结构与功能，或赋予宿主以新的遗传性状，或获得该基因 的表达产物。这一过程就是基因工程。
百度文库
三、基因工程中的工具
（一）载体
1.质粒(plasmid) 2.粘粒(cosmid) 3.λ 噬菌体(λ phage)
（二）工具酶
1.限制性内切酶 2.外切酶 3.连接酶 4.聚合酶: klenow I 5.核酸酶
（三）宿主菌 DH5? , JM101, JM109; DE3等
四、获得目的基因的方法
比例：粘端： 3~5:1；钝端： 6~8:1 3. 转化与重组质粒的筛选、鉴定。
1）初步鉴定：抗性； α-互补；快速鉴定；原位杂交； PCR。
2）酶切鉴定：大小和方向。 3）测序鉴定：双脱氧测序法。
广义：转基因动物；克隆；基因打靶；基因组计划等均属 于基因工程的范畴。
二、基因工程的基本步骤
目的基因获得 表达载体构建与鉴定
基因的导入 整合与表达的鉴定 表达产物的提取、纯化与鉴定
核酸药物 基因工程药物
第二节 基因工程中的方法学
一、基因工程的基本技术
（一）核酸的提取纯化
1. RNA提取纯化技术； 2. DNA提取纯化技术； 3. plasmid提取纯化技术。
2. SDS-PAGE
二、一些重要技术原理介绍
重点： DNA双脱氧 测序技术，核酸探针技术， PCR技术等。（参见第 5章）
（一） DNA 双脱氧测序 （二）核酸杂交技术 （三） PCR 技术
（四）目的基因的改造技术 1. 引物介导的基因定点突变技术 2. 盒式突变 (cassette mutagenesis) 3. Genes Shuffling