柑桔组织培养研究

无性系的快速繁苗
无性系快速繁殖的工业化及试管苗品种的商业化， 是柑桔组织培养的重要应用方向之一。
用组织培养法作为良种快速繁殖的手段，主要有茎 芽培养、愈伤组织培养、胚状体培养等三种类型。
组织培养在柑桔育种中的应用
组织培养技术在柑桔的杂交育种、突变育种及倍性育种方面具有重要的应 用价值。
杂交育种——采用离体培养合子胚能够保证合子胚继续发育。 突变育种——采用组织培养技术并结合人工诱变的方法来扩大突变范围 倍性育种——多倍性育种是培育柑桔无核品种的重要途径
柑桔组织培养的应用
经过几十年的研究，组织培养技术已成为柑桔 业发展的一项重要技术，在苗木的快速繁殖、无病 原体苗木的培育、种质资源的保存、柑桔育种等方 面发挥了积极的作用。
柑桔无病原体苗的培育

柑桔是感染病 原体病害最为严重的果树之一。病原
体病害能使柑桔植株长势减弱、产量降低、品质变劣，严重威胁柑桔类的生产。
因此,在应从优化培养条件和改善培养方法、 诱导和驯化组培苗下地，构建优良外源基因用于转 化等实验方面进行进一步研究。
展望
国内成功实现柑橘组培规模化生产的报道较少。我们以 樱桃组培为例，樱桃的种子萌发率低,实生苗易感染病毒,扦插 繁殖系数低,因而在生产实践的应用中受到很大的限制。采用 茎尖、茎段外植体进行樱桃快速繁殖,可以提高优良品种的繁 殖系数和抗病能力,培育优良砧木,改善嫁接亲和力。
离体珠心培养
优点：方法简便易行 缺点：约有26%的变异
珠心胚实生苗会具有各种童期性状，如多刺和 结果晚
多数品种往往需要10a以上才能结果，这极大 地影响了它在实践中的应用
离体胚珠培养
利用柑桔的多胚性培育珠心苗，是柑桔组织培养 中一种最早使用的方法。
对于许多像脐橙这样的优良无核柑桔品种，由于 大孢子母细胞常常退化，花粉完全败育。
在继代培养中,6-BA浓度降低有利于提高腋芽增殖。在诱导芽分化时可能需要 高浓度的细胞分裂素打破顶端优势,而继代培养时内源激素的持续积累导致内源激 素浓度升高,所以在继代培养时应降低细胞分裂素的浓度。
现有的影响木本植物组织培养的有关因子的研究也可借鉴到柑桔的组培实验中。
1.1 培养基成分
(1)基本培养基。在器官组织培养中,一般采用固体培养,而在细胞和原生质体培养中,则采 用液体培养基。培养基中的盐浓度对外植体褐变和试管苗玻璃化均有一定影响。对某些植 物来说,初代培养时培养基中无机盐浓度过高可引起酚类外溢物质的大量产生,导致外植体 褐变,降低盐浓度则可以减少酚类外溢,从而减轻褐变。此外,培养基中的某些离子会增加酚 类合成与氧化酶的活性,降低盐浓度则可起到一定的抑制作用。对于玻璃化的试管苗来说, 提高培养基中Ca2+ 的浓度,增加培养基中Mg、Mn、K、P、Fe、Cu元素含量,降低N和Cl元 素比例,特别是降低铵态氮浓度,可降低玻璃化 。
因此很难获得种子，所以只能在其败育之前通 过离体胚珠培养加以解决。
高峰利用“华盛顿脐橙”未受精胚珠,通过体细胞胚胎 发生或器官发生途径再生出完整植株,是国内首次报道 利用胚珠离体培养获得的柑桔无病苗。
谭祖国等以花后7周朋娜和纽贺尔脐橙的幼果为实验 材料,挑取胚珠进行离体培养。 结果发现在MT培养基上分别附加麦芽汁诱导愈伤组织 及胚状体,胚状体及愈伤组织在附加NAA+BA培养基上, 能较好地诱导多丛芽,在培养基中加入AgNO3(5mg/L) 多次继代培养,能筛选出胚性愈伤组织。
黄龙病
溃疡病
柑桔组织培养技术 柑桔组织培养的应用 柑桔组织培养存在问题与展望
柑桔组织培养技术
在柑桔类果树中，由于营养系材料存在脱分化、 再分化较困难，很难再生出植株。
因此,柑桔组织培养法主要通过胚珠、珠心等 胚性细胞进行培养。
下面根据外植体的类型分别予以讨论：
离体珠心培养 离体胚珠培养 其它外植体的离体培养
研究表明,在附加6-BA1.5mg/L、IAA 0.3mg/L的MS培养基上茎段外植体生长健壮, 芽分化数和诱导率较高,该培养基为茎段初代培养的最适培养基。
温度对茎段组织培养再生不定芽也有一定的影响。经低温15℃处理的外植体更 有利于芽分化。温度过高,顶芽褐死,产 生灼苗的现象;温度过低,植株生长停滞,不利 于芽分化。所以,低温15℃处理3d后,转入正常温度25℃培养,茎段外植体芽分化率 达到最高。
其它外植体的离体培养
在柑桔组织培养中单独用茎、叶片作为外植体的报道较少。
林荣等对金桔叶片进行了愈伤组织的培养进行了研究之后偶有用柑桔叶片 作为外植体进行培养,但诱导愈伤组织的频率不高。
曾志云以南丰蜜桔的实生苗的茎段、子叶节、上胚轴和下胚轴为外植体开 展离体培养研究,将诱导出的芽转入MT+6-BA0.5+NAA0.1增殖培养基中进行培 养,增殖系数可达8.8。培养基有利于南丰蜜桔不定根的诱导,生根率可达65.5%.

由于病原体主要通过无性繁殖传染，因此建立无病
原体的工厂化育苗、供应无毒接穗和苗木是消灭柑桔病
原体病的主要途径。
柑桔无病原体苗的培育
采取茎尖微嫁接方法是目前柑桔脱毒较为有效的方法。 西班牙最早应用这种方法生产无病毒的柑桔母本树， 并大量推广无病毒接穗，以防治柑桔速衰病、鳞皮病、裂 皮病、青果病等病原体。
柑桔组织培养存在问题与展望
1、柑桔组织培养过程中增殖速度较慢 2、快繁技术未过关 3、长期离体条件下细胞易发生变异,利用胚心、胚 珠培养都很难保证与母株遗传性状完全一致，遗传 性状变化大，造成种苗不纯 4、柑桔组织培养产生的珠心植物呈现多刺、开花 晚等不利的童期特征 5、柑桔遗传转化方面缺乏有应用价值的外源基因
研究表明,欧洲大樱桃的组织培养与快速繁殖以3、4月中旬的新生幼嫩枝条为 茎段外植体材料,接种诱导成功率最高。
在建立樱桃茎段再生体系的过程中,随着6-BA浓度的提高,芽分化率不断提高,但 是苗分化相对细弱;而随着IAA浓度的提高,苗的生长量增加,苗较为茁壮。因此,只有 在62-BA和IAA 2种激素浓度配比适宜的条件下,樱桃组培快繁才会获得较好的效果。
柑桔组织培养研究
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柑桔是芸香科柑桔属植物，其种类繁多，在全 球热带、亚热带地区广泛种植。柑桔营养丰富，形 色味俱佳，是人们喜爱的水果之一，具有极高的经 济价值。
改革开放以来，我国柑桔种植面积逐年扩大，但 病原体病害一直困扰着柑桔生产，特别柑桔黄龙病、 溃疡病尤为严重。
通过组织培养的方法，开展无病原体苗培育，建 立柑桔无性系快速繁殖技术，利用组织培养法开展品 种改良和新品种培育是解决这些问题的重要途径。