细菌的培养及鉴定 ppt课件
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细菌的培养及鉴定
G+ 球菌
细菌的培养及鉴定
G-杆菌
Figure 2 - Gram stain of Gram - E. coli cells
显微镜下的杆菌 细菌的培养及鉴定
痰标本涂片染色低倍镜下分类
分级 白细胞（个） 上皮细胞（个）
A
>25
<10
B
>25
<25
C
<10
>25
A、B两种情况的痰适合做培养，C不合格，应重新留标 本
细菌的培养及鉴定
革兰染色步骤
涂片包括涂片、干燥、固定三步。
涂片
干燥
固定
Biblioteka Baidu
细菌的培养及鉴定
固定的目的：
使细菌的细胞凝固，使菌体与玻片粘 得更牢固； 可改变菌体对染料的通透性； 加热固定可杀死细菌，比较安全。
细菌的培养及鉴定
革兰染色程序
初染
媒染
脱色
复染
冲洗
冲洗
冲洗
结晶紫 1’ 碘液 1’ 95%乙醇 30” 复红 1’
2.粗糙型菌落（Rough type Colony）：又称R型 3.粘液型菌落（Mucoid type Colony）又称M型
细菌的培养及鉴定
S型菌落
2020/11/12
细菌的培养及鉴定
16
R型菌落
细菌的培养及鉴定
M型菌落
细菌的培养及鉴定
革兰染色
原理：通过结晶紫初染和碘液媒染后，在细胞壁内形
细菌的培养及鉴定
抗酸染色步骤
1、涂片包括涂片、干燥、固定三步。
涂片
干燥
固定
细菌的培养及鉴定
抗酸染色步骤
2、染色包括初染、脱色、复染三步。
初染
脱色
复染
冲洗
冲洗
石炭酸复红维持 3-5’ 3%盐酸酒精30 ’’ ~1’
冲洗
干燥 油镜观察
细菌的培养及鉴定
美蓝复染1 ’
抗酸染色结果
抗酸菌呈红色， 常堆积成团， 排列无序， 偶呈分枝状生长。 背景及非抗酸性细菌呈兰色。
成了不溶于水的结晶紫与碘的复合物，革兰氏阳性菌 由于其细胞壁较厚、肽聚糖网层次较多且交联致密， 故遇乙醇或丙酮脱色处理时，因失水反而使网孔缩小， 再加上它不含类脂，故乙醇处理不会出现缝隙，，因 此能把结晶紫与碘复合物牢牢留在壁内，使其仍呈紫 色；而革兰氏阴性菌因其细胞壁薄、外膜层类脂含量 高、肽聚糖层薄且交联度差，在遇脱色剂后，以类脂 为主的外膜迅速溶解，薄而松散的肽聚糖网不能阻挡 结晶紫与碘复合物的溶出，因此通过乙醇脱色后仍呈 无色，再经复红等红色染料复染，就使革兰氏阴性菌 呈红色。
细菌的培养及鉴定
清洁中段尿液
尽量取早晨第一次尿液 嘱患者留取标本的前一天晚上少饮水 女性病人 ➢收集标本前用肥皂水冲洗外阴，再以灭菌清水
冲洗尿道口 ➢排出几毫升后，不停止尿流，采集中段尿 男性病人 ➢翻转包皮，清洗尿道口 ➢排出几毫升后，不停止尿流,采集中段尿
采集标本后立即送检！
细菌的培养及鉴定
常用的培养基种类和用途
临床标本培养基选择
血：
血培养瓶
中断尿：血平板、mac平板
脑脊液：血培养瓶、血平板、巧克力平 板
穿刺液：血培养瓶、血平板、巧克力平 板、mac平板
胆汁：血平板、巧克力平板、mac平板
大便:.麦康凯、SS、血平板
细菌的培养及鉴定
细菌接种的基本程序
灭菌接种环 沾取标本 接种 灭菌接种环
细菌的培养及鉴定
细菌的培养及鉴定
革兰染色注意事项
标本涂片不宜太厚 固定不宜过热 脱色不宜过度 选用培养18--24小时菌龄的细菌为宜
细菌的培养及鉴定
抗酸染色
原理：分枝杆菌细胞壁含脂质较多,其中
主要成分为分枝菌酸,此物具有抗酸性,染 色时与石炭酸复红结合牢固,能抵抗酸性 乙醇的脱色作用,因此抗酸菌能保持复红 的颜色,达到染色目的。
冲洗
滤纸干细燥菌的培养及鉴油定镜观察
革兰染色
甲
紫紫色色（（GG＋＋））
菌
初染 媒染 脱色 复染
革结兰晶氏紫 染碘色液步骤乙示醇 意图稀释复红
乙
红色（G-）
菌
革兰染色步骤示意图
细菌的培养及鉴定
【结果】
细菌被染成紫色者，称为革兰阳性菌； 而细菌染成红色者，称为革兰阴性菌；
阳性菌——紫色（G+b
阴性菌——红色（G-b)
哥伦比亚血平板—营养要求高的细菌 巧克力平板—含V、X因子，主要培养嗜血杆菌、 脑膜炎球菌和淋球菌用 中国蓝/麦康凯平板—G-杆菌用 SS平板—沙门氏菌和志贺氏菌用 M-H平板—细菌药敏用 TCBS平板—弧菌科细菌用
沙包氏平板—真菌培养用
真菌显色平板—真菌培养用 罗氏培养基—分枝杆细菌菌的培用养及鉴定
连续划线法
细菌的培养及鉴定
细菌培养法
一般培养（需氧培养）： ★培养温度：35℃（采用恒温培养箱） ★培养时间：18～24h
二氧化碳培养法：烛缸法、二氧化碳培养 箱 厌氧培养法：厌氧培养箱、厌氧袋、厌氧 罐、疱肉培养法、硫乙醇酸盐法等
细菌的培养及鉴定
细菌在固体培养基中的生长现象
菌落 ★定义：指单个细菌在平板培养基上生长繁殖，形
细菌培养及鉴定
细菌的培养及鉴定
标本采集原则
1.及时采集微生物标本作病原学检查 2.在抗菌药物使用前采集标本 3.采样时严格执行无菌操作 4.标本容器须无菌，但不得有消毒剂 5.采样后立即送检 6.送检标本应注明细菌来的培源养及和鉴定检验目的
咳痰方法
病人先漱口，清洁口腔，去除表面的菌群 病人深咳，收集从下呼吸道咳出的痰液 无痰可用3％～5％NaCl 5ml雾吸约5min导痰 以清晨第二口痰为佳 标本采集后放置时间不超过2小时
成单一肉眼可见的细菌集团。 ★菌落特征：大小、形状、边缘、颜色、表面、透
明度、湿润度、黏度、溶血性 ★菌落类型：光滑型（S）、粗糙型（R）、黏液型
（M） 菌苔：指多个菌落融合在一起形成的细菌堆积物。
细菌的培养及鉴定
菌 落 细菌的培养及鉴定
菌落与菌苔
细菌的培养及鉴定
菌落的三个类型：
1.光滑型菌落（Smooth type Colony） ：又称S 型
细菌接种法
平板划线接种法： ★目的：使混合的细菌呈单个分散生长，
形成单个菌落，以便获得纯菌。 ★方法： ★分区划线法：适用于含菌量较多的标本 ★连续划线法：适用于含菌量较少的标本
细菌的培养及鉴定
分区划线法(3区) 第一区划线
灭菌接种环 第二区划线 灭菌接种环 第三区划线 灭菌接种环
细菌的培养及鉴定
细菌的培养及鉴定
抗酸杆菌报告
300个视野仅见到1—8条抗酸杆菌填写条 数 1+：镜检查见3-9条抗酸杆菌/100高倍镜 视野 2+：镜检查见1—9条抗酸杆菌/10高倍镜 视野 3+：镜检查见1-9条抗酸杆菌/高倍镜视 野 4+:镜检查见>9条抗酸杆菌/高倍镜视野
G+ 球菌
细菌的培养及鉴定
G-杆菌
Figure 2 - Gram stain of Gram - E. coli cells
显微镜下的杆菌 细菌的培养及鉴定
痰标本涂片染色低倍镜下分类
分级 白细胞（个） 上皮细胞（个）
A
>25
<10
B
>25
<25
C
<10
>25
A、B两种情况的痰适合做培养，C不合格，应重新留标 本
细菌的培养及鉴定
革兰染色步骤
涂片包括涂片、干燥、固定三步。
涂片
干燥
固定
Biblioteka Baidu
细菌的培养及鉴定
固定的目的：
使细菌的细胞凝固，使菌体与玻片粘 得更牢固； 可改变菌体对染料的通透性； 加热固定可杀死细菌，比较安全。
细菌的培养及鉴定
革兰染色程序
初染
媒染
脱色
复染
冲洗
冲洗
冲洗
结晶紫 1’ 碘液 1’ 95%乙醇 30” 复红 1’
2.粗糙型菌落（Rough type Colony）：又称R型 3.粘液型菌落（Mucoid type Colony）又称M型
细菌的培养及鉴定
S型菌落
2020/11/12
细菌的培养及鉴定
16
R型菌落
细菌的培养及鉴定
M型菌落
细菌的培养及鉴定
革兰染色
原理：通过结晶紫初染和碘液媒染后，在细胞壁内形
细菌的培养及鉴定
抗酸染色步骤
1、涂片包括涂片、干燥、固定三步。
涂片
干燥
固定
细菌的培养及鉴定
抗酸染色步骤
2、染色包括初染、脱色、复染三步。
初染
脱色
复染
冲洗
冲洗
石炭酸复红维持 3-5’ 3%盐酸酒精30 ’’ ~1’
冲洗
干燥 油镜观察
细菌的培养及鉴定
美蓝复染1 ’
抗酸染色结果
抗酸菌呈红色， 常堆积成团， 排列无序， 偶呈分枝状生长。 背景及非抗酸性细菌呈兰色。
成了不溶于水的结晶紫与碘的复合物，革兰氏阳性菌 由于其细胞壁较厚、肽聚糖网层次较多且交联致密， 故遇乙醇或丙酮脱色处理时，因失水反而使网孔缩小， 再加上它不含类脂，故乙醇处理不会出现缝隙，，因 此能把结晶紫与碘复合物牢牢留在壁内，使其仍呈紫 色；而革兰氏阴性菌因其细胞壁薄、外膜层类脂含量 高、肽聚糖层薄且交联度差，在遇脱色剂后，以类脂 为主的外膜迅速溶解，薄而松散的肽聚糖网不能阻挡 结晶紫与碘复合物的溶出，因此通过乙醇脱色后仍呈 无色，再经复红等红色染料复染，就使革兰氏阴性菌 呈红色。
细菌的培养及鉴定
清洁中段尿液
尽量取早晨第一次尿液 嘱患者留取标本的前一天晚上少饮水 女性病人 ➢收集标本前用肥皂水冲洗外阴，再以灭菌清水
冲洗尿道口 ➢排出几毫升后，不停止尿流，采集中段尿 男性病人 ➢翻转包皮，清洗尿道口 ➢排出几毫升后，不停止尿流,采集中段尿
采集标本后立即送检！
细菌的培养及鉴定
常用的培养基种类和用途
临床标本培养基选择
血：
血培养瓶
中断尿：血平板、mac平板
脑脊液：血培养瓶、血平板、巧克力平 板
穿刺液：血培养瓶、血平板、巧克力平 板、mac平板
胆汁：血平板、巧克力平板、mac平板
大便:.麦康凯、SS、血平板
细菌的培养及鉴定
细菌接种的基本程序
灭菌接种环 沾取标本 接种 灭菌接种环
细菌的培养及鉴定
细菌的培养及鉴定
革兰染色注意事项
标本涂片不宜太厚 固定不宜过热 脱色不宜过度 选用培养18--24小时菌龄的细菌为宜
细菌的培养及鉴定
抗酸染色
原理：分枝杆菌细胞壁含脂质较多,其中
主要成分为分枝菌酸,此物具有抗酸性,染 色时与石炭酸复红结合牢固,能抵抗酸性 乙醇的脱色作用,因此抗酸菌能保持复红 的颜色,达到染色目的。
冲洗
滤纸干细燥菌的培养及鉴油定镜观察
革兰染色
甲
紫紫色色（（GG＋＋））
菌
初染 媒染 脱色 复染
革结兰晶氏紫 染碘色液步骤乙示醇 意图稀释复红
乙
红色（G-）
菌
革兰染色步骤示意图
细菌的培养及鉴定
【结果】
细菌被染成紫色者，称为革兰阳性菌； 而细菌染成红色者，称为革兰阴性菌；
阳性菌——紫色（G+b
阴性菌——红色（G-b)
哥伦比亚血平板—营养要求高的细菌 巧克力平板—含V、X因子，主要培养嗜血杆菌、 脑膜炎球菌和淋球菌用 中国蓝/麦康凯平板—G-杆菌用 SS平板—沙门氏菌和志贺氏菌用 M-H平板—细菌药敏用 TCBS平板—弧菌科细菌用
沙包氏平板—真菌培养用
真菌显色平板—真菌培养用 罗氏培养基—分枝杆细菌菌的培用养及鉴定
连续划线法
细菌的培养及鉴定
细菌培养法
一般培养（需氧培养）： ★培养温度：35℃（采用恒温培养箱） ★培养时间：18～24h
二氧化碳培养法：烛缸法、二氧化碳培养 箱 厌氧培养法：厌氧培养箱、厌氧袋、厌氧 罐、疱肉培养法、硫乙醇酸盐法等
细菌的培养及鉴定
细菌在固体培养基中的生长现象
菌落 ★定义：指单个细菌在平板培养基上生长繁殖，形
细菌培养及鉴定
细菌的培养及鉴定
标本采集原则
1.及时采集微生物标本作病原学检查 2.在抗菌药物使用前采集标本 3.采样时严格执行无菌操作 4.标本容器须无菌，但不得有消毒剂 5.采样后立即送检 6.送检标本应注明细菌来的培源养及和鉴定检验目的
咳痰方法
病人先漱口，清洁口腔，去除表面的菌群 病人深咳，收集从下呼吸道咳出的痰液 无痰可用3％～5％NaCl 5ml雾吸约5min导痰 以清晨第二口痰为佳 标本采集后放置时间不超过2小时
成单一肉眼可见的细菌集团。 ★菌落特征：大小、形状、边缘、颜色、表面、透
明度、湿润度、黏度、溶血性 ★菌落类型：光滑型（S）、粗糙型（R）、黏液型
（M） 菌苔：指多个菌落融合在一起形成的细菌堆积物。
细菌的培养及鉴定
菌 落 细菌的培养及鉴定
菌落与菌苔
细菌的培养及鉴定
菌落的三个类型：
1.光滑型菌落（Smooth type Colony） ：又称S 型
细菌接种法
平板划线接种法： ★目的：使混合的细菌呈单个分散生长，
形成单个菌落，以便获得纯菌。 ★方法： ★分区划线法：适用于含菌量较多的标本 ★连续划线法：适用于含菌量较少的标本
细菌的培养及鉴定
分区划线法(3区) 第一区划线
灭菌接种环 第二区划线 灭菌接种环 第三区划线 灭菌接种环
细菌的培养及鉴定
细菌的培养及鉴定
抗酸杆菌报告
300个视野仅见到1—8条抗酸杆菌填写条 数 1+：镜检查见3-9条抗酸杆菌/100高倍镜 视野 2+：镜检查见1—9条抗酸杆菌/10高倍镜 视野 3+：镜检查见1-9条抗酸杆菌/高倍镜视 野 4+:镜检查见>9条抗酸杆菌/高倍镜视野