实验一细胞形态细胞器的显微结构的观察优秀课件

物镜
镜口率(N.A.)
工作距离(mm)
10×
0.25
5.40
40×
0.65
0.39
100×
1.30
0.11
显微镜的总放大倍数等于目镜和物镜放大倍数的乘积，
公式为: M = K1xK2
焦点深度: 显微镜调焦到看清标本某一点时，不仅是这一物点，而且它的
上下两侧也能看清楚两侧的厚度叫做焦点深度。看到标本的全
6.相差显微镜
一种介壳虫的染色体
7. 偏光显微镜（对于双折射物质进行结构研究）
偏光显微镜（polarizing microscope）用于检测具有双折射性的 物质，如纤维丝、纺锤体、胶原、染色体等等。
8.微分干涉差显微镜（图像具有浮雕感）
DIC显微镜其优点是能显示结构的三维立体投影影像。与相差显微镜 相比，其标本可略厚一点，折射率差别更大，故影像的立体感更强。
实验一细胞形态细胞 器的显微结构的观察
一、实验目的
1.了解普通光学显微镜的工作 原理，掌握光学显微镜的使 用方法。
2.熟悉光学显微镜下细胞的基 本形态与结构。
二、实验原理
细胞是生物体的基本结构单位。构成生 物机体的细胞是多种多样的。要对细胞进行 研究，首先要从其形态结构人手。所以，要 借助显微镜的成像及放大原理，在显微镜下， 才能观察到细胞的基本形态结构。
LCSM照片 蓝色为细胞核，绿 色为微管
（能观察活细胞）
5.暗视野显微镜
暗视野显微镜（dark field microscope）的聚光镜中央有当光 片，使照明光线不直接进人物镜，只允许被标本反射和衍射的光线 进入物镜，因而视野的背景是黑的，物体的边缘是亮的。利用这种 显微镜能见到小至 4-200nm的微粒子，分辨率可比普通显微镜高50 倍。
五、 实验步骤
(一)显微镜的使用 1. 观察前的准备工作
(1)观察者要养成显微镜镜检的工作习惯，观察时要双 眼同时睁开，一边观察一边进行记录或描绘。
(2)观察时所用的材料、药品和各种器具要预先准备好。 (3)显微镜在使用之前应检查一下它的各个部件是否完整
和正常，并对载物台、目镜、物镜以及聚光器上端透 镜进行必要的清洁工作。然后进行合轴调节。
普通光线的波长为400~700nm，因此显微镜分辨力数值不会小于 0.2μm，人眼的分辨力是0.2mm，所以一般显微镜设计的最大放大倍 数通常为1000X。
显微镜的分辨率: 也称为分辨力，它是指能把两个物点辨清的最小距离，
分辨距离越大，则分Βιβλιοθήκη Baidu率越低。所以，分辨率是以分辨
距离来表示的。
其计算公式为: D=0.61λ/N·A
厚度，必须调节螺旋仔细地从上到下进行观察。
厚标本和薄标本
4 - 5 um
2um
基础知识
三、显微镜概述
显微镜是观察细胞的主要工具。根据光源不同，可分为 光学显微镜和电子显微镜两大类。前者以可见光（紫外线显 微镜以紫外光）为光源，后者则以电子束为光源。
1.光学显微镜
普通生物显微镜由3部分构成：
①照明系统：包括光源和聚光器。
荧光显微镜和普通显微镜有以下的区别：
1.照明方式通常为落射式，即光源通过物镜 投射于样品上。
2.光源为紫外光，波长较短，分辨力高于普 通显微镜。
3.有两个特殊的滤光片，光源前的用以滤除 可见光，目镜和物镜之间的用于滤除紫外线， 用以保护人目。
4. 激光共聚 焦扫描显微镜 （具有高分辨 率可进行显微 断层扫描）
②光学放大系统：由物镜和目镜组成，
是显微镜的主体。
③机械装置：用于固定材料和观察方便，
包括镜台(载物台) 、调节器和、
物镜转换器(旋转器)等。
尼康E-600显微镜 基础知识
2.体视显微镜（可直接进行解剖及观察并具有正像立体感）
3.荧光显微镜
尼康E800荧光DIC显微镜
荧光显微镜照片（微管呈绿 色、微丝红色、核蓝色）
DIC显微镜下的 硅藻（伪彩色）
9. 倒置显微镜（组织培养中长工作距离的）
组成和普通显微镜一样， 只不过物镜与照明系统颠 倒，前者在载物台之下， 后者在载物台之上（右 图），用于观察培养的活 细胞，具有相差物镜。
10. 显微操作技术
尼康NT-88NE显微操作/注射 仪
四、实验用品
各种组织切片
(2)载物台上放置观察标本，把聚光器上升到它上端透镜平面 稍低于载物台平面的高度，并将它的可变光栏开到最大，用低倍 物镜，进行调焦到能看见标本，可调反射镜使视野得到最亮和最 均匀 的照明，或把光栏关小，最亮的照明区正处在视野的中央。
(3)转到高倍镜，并调焦到看清标本，然后去掉标本，拔出目 镜，眼睛直接向镜筒观察，并把可变 光栏关小，看其亮点是否在 视野中心，如果不是，就要转动聚光器的调节螺旋，把亮点调到 视野中 央，再慢慢开启可变光栏，使视野看到光栏边缘和聚光镜 的边缘相接为止。
经物镜形成倒立实像，经目镜进一步放大成像。
显微镜物象是否清楚不仅决定于放大倍数，还与显微镜的分辨力有关。
制作光学镜头所用的玻璃折射率为1.65~1.78，所用介质的折射率越 接近玻璃的越好。对于干燥物镜来说，介质为空气，镜口率一般为 0.05~0.95；油镜头用香柏油为介质，镜口率可接近1.5。
3. 观察操作：
(1) 低、高倍镜的使用: 先把低倍的物镜用粗调焦螺旋下降至离盖玻片 0.5cm处，然后一边观察视野一边上升物镜，直至看到图像，再将标本移 到视野中心，用细调焦螺旋把物镜调至最清晰处，若要用高倍镜观察时， 把所要进一步放大观察的部位移至视野中央，直接顺时针转换成高倍物镜， 然后用细调焦螺旋调焦，至看清物像。
N·A·=n·sina/2
式中D为分辨率，A为光波波长， n=介质折射率；α=镜口角（标本对 物镜镜口的张角）， N·A·为物镜的数值孔径(镜口率)。镜口角总是要小于 180˚，所以sina/2的最大值必然小于1。
在物镜上，有镜口率(N.A.)的标志，它反应该镜头分辨力的大小，其数 字越大，表示分辨率越高，各物镜的镜口率如下表：
2. 显微镜的调节
瞳距调节
屈光度调节
调节
粗调松紧调节旋钮
聚光镜中心调节
②10X物 镜
①标 本
④ 聚光镜升降 旋钮
③ 孔径 光栏
⑤ 光轴中心调节 螺钉
③ 视场 光栏
孔径光栏调节
N.A聚=(0.6-0.8)N.A物
孔径光栏开度与图象
100% 70% 30%
孔径光栏的运用
操作步骤如下:
(1）可变光栏的中心对准聚光镜的中心。如果可变光栏的水平 是固定的，则装配时已保证它与聚光镜合轴，不必调整;如果可变 光栏的水平位置可以移动，则应把可变光栏关到最小，使它的中 心孔对准聚光镜下方的透镜中心。