白喉棒状杆菌及检验

2. 致病机制
2）索状因子 破坏哺乳动物细胞中的线粒体， 破坏哺乳动物细胞中的线粒体， 影响细胞呼吸与磷酸化。 影响细胞呼吸与磷酸化。 3）K抗原：抗吞噬 抗原：
3. 所致疾病： 所致疾病：
白喉—— 白喉——急性呼吸道传染病 ——急性呼吸道传染病 *传染源：患者、恢复期带菌者、健康带菌者 传染源：患者、恢复期带菌者、健康带菌者 *传播途径：飞沫或污染（多在秋冬季） 传播途径：飞沫或污染（多在秋冬季） *临床表现： 临床表现：
接种
吕氏血清斜面
37℃ 37℃ 6~12 h
直接涂片镜检 快速诊断） （快速诊断） 灰白色小菌落
接
种 培养
亚碲酸钾琼脂平板
黑色菌落
• Elek平板试验
白喉杆菌的有毒菌株可产生白喉外毒素，白喉抗毒素 白喉杆菌的有毒菌株可产生白喉外毒素， 可与其特异性结合，中和白喉外毒素的毒性， 可与其特异性结合，中和白喉外毒素的毒性，可用细菌培 养法和动物试验予以证实。 养法和动物试验予以证实。 • 原理】 【原理】 • Elek平板毒力试验是一种体外的毒力测定方 平板毒力试验是一种体外的毒力测定方 •
轻型 菌落β溶血、光泽、 菌落β溶血、光泽、凸起 重型 菌落不溶血、不规则、 菌落不溶血、不规则、有条纹
3. 变异
* 白喉棒状杆菌形态、菌落和毒性均可发生变异。 白喉棒状杆菌形态、菌落和毒性均可发生变异。
噬菌体
* 无毒株
溶原性细菌（产生外毒素） 溶原性细菌（产生外毒素）
4. 抵抗力
* 抗寒冷和干燥 * 对湿热抵抗力弱 * 对青霉素、氯霉素、红霉素敏感 对青霉素、氯霉素、 对磺胺不敏感
革兰染色
奈瑟染色
1. 白喉棒状杆菌的形态学特征
异染颗粒 成分： 核糖核酸 + 多磷酸盐 成分： 作用： 储存养料、鉴定价值 作用： 储存养料、
Albert染色 Albert染色
2. 培养特性
*吕氏血清斜面培养物 含凝固的血清，生长 迅速，异染颗粒明显。 迅速，异染颗粒明显。 *亚碲酸钾血平板 黑色菌落。 黑色菌落。 亚碲酸盐
白喉杆菌菌苔
沉淀线(阳性) 沉淀线(阳性) 含白喉抗毒素滤纸片
Elek毒力实验结果 Elek毒力实验结果
四、防治原则
1. 预防 * 人工主动免疫：注射DTP混合疫苗 人工主动免疫：注射DTP混合疫苗 * 人工被动免疫：注射白喉抗毒素 人工被动免疫： * 药物预防：用青霉素或红霉素预防 药物预防：
* 白喉（Diphtheria ）是一种急性呼吸道传染病 白喉（ 特征： 特征：患者咽喉部出现灰白色的假膜 假膜
一、生物学性状
1. 白喉棒状杆菌的形态学特征
细长杆菌，粗细不一，一端或两端膨大呈棒状， 细长杆菌，粗细不一，一端或两端膨大呈棒状， 排列不规则，呈栅栏状、 字形或L 排列不规则，呈栅栏状、V字形或L形。
还原 在亚碲酸钾血琼脂平板上的白 在亚碲酸钾血琼脂平板上的白 喉棒状杆菌菌落（ 18～ 喉棒状杆菌菌落 （ 18 ～ 24 h ）
碲（黑色） 黑色）
根据对亚碲酸钾的还原能力 根据对亚碲酸钾的还原 能力 、 菌落形态及生 能力、 化反应可将白喉棒状杆菌分为3种类型：重型 （gravis）、轻型（mitis）和中间型 intermedius） （intermedius）。
•
• 3．接种细菌，以接种环取产毒素白喉杆菌、 接种细菌，以接种环取产毒素白喉杆菌、 接种细菌 类白喉杆菌和待检的白喉杆菌分别以与滤纸 条成垂直的方向划线接种， 条成垂直的方向划线接种，接种线须密且集 接种的菌量宜多。 中，接种的菌量宜多。若用此法测未知标本 需设阳性对照(产毒株 及阴性对照(无毒株 产毒株)及阴性对照 无毒株)， 需设阳性对照 产毒株 及阴性对照 无毒株 ， 一般每个平板可接种5～ 个标本 个标本。 一般每个平板可接种 ～6个标本。置37℃培 ℃ 观察结果。 养24、48、72h观察结果。 、 、 观察结果
六月以下婴儿---六月以下婴儿---- 母亲 成人---- 隐性感染、 成人---- 隐性感染、疫苗
三、微生物学检查法
* 标本：假膜边缘取材 标本： * 涂片镜检： 涂片镜检：
标本片 革兰染色 奈瑟染色 Albert染色 Albert染色 典型 镜下特点 菌体颜色 菌体排列 异染颗粒
* 分离培养： 分离培养： 标本
3. 所致疾病： 所致疾病：
* 临床表现： 临床表现：
引起局部症状： 1）细菌与毒素共同作用引起局部症状： 细菌与毒素共同作用引起局部症状 炎症，坏死，纤维蛋白渗出，假膜导致 导致窒息 炎症，坏死，纤维蛋白渗出，假膜导致窒息 2）毒素入血引起全身中毒症状： 毒素入血引起全身中毒症状： 外周神经炎 膈肌麻痹 呼吸困难 呼吸困难—声带麻 外周神经炎：膈肌麻痹—呼吸困难 声带麻 神经 痹—声音嘶哑 软颌麻痹—吞 声音嘶哑—软颌麻痹 吞 声音嘶哑 软颌麻痹 咽困难 心肌炎
2. 治疗
* 白喉抗毒素：皮试，尽早使用 皮试， * 抗生素
• 【方法】 方法】 • 1．将Elek琼脂蛋白胨培养基 琼脂蛋白胨培养基10ml加热 ． 琼脂蛋白胨培养基 加热
融化，待冷至 ～ ℃ 融化，待冷至50～55℃时，加入无菌的马或 兔血清2ml，立刻混匀，并倾注平板。 兔血清 ，立刻混匀，并倾注平板。 2．趁琼脂未凝固前，用无菌镊子将浸有 ．趁琼脂未凝固前， 白喉抗毒素(1000u/m1)的滤纸条 尽量使滤 的滤纸条(尽量使滤 白喉抗毒素 的滤纸条 纸条上的抗毒素流尽)贴于平板中央 贴于平板中央， 纸条上的抗毒素流尽 贴于平板中央，待琼脂 凝固后将平板置37℃温箱内1～ 平板面朝 凝固后将平板置 ℃温箱内 ～2h(平板面朝 干燥。 下)，使培养基略干燥 ，
白喉棒状杆菌
CASE
• 患儿，男，6岁，咽痛、声嘶、 咳嗽、发热3天； • 体温37℃ ，心率96/分，白细胞 升高；亚碲酸钾培养+++ • 病史：百白破疫苗出生后三个月 打了第一针，加强免疫因经济困 难而未接种（家属说舍不得花钱， 一针要40多元；孩子的父亲右 手残疾） • 问题：什么病？ 患者和密切接 触者需如何处理？
4. 免疫性 1）人群易感性
* 普遍易感； 普遍易感； * 1~5岁儿童； 岁儿童； * 成人也有可能。 成人也有可能。
2）免疫特点
* 抗毒素免疫； 抗毒素免疫； * 感染后机体可获得牢固的免疫力； 感染后机体可获得牢固的免疫力； * 机体还可通过其它方式获得免疫力： 机体还可通过其它方式获得免疫力：
第二十三章： 第二十三章： 需氧革兰阳性杆菌及检验 检验系 刘涛
第一节
Baidu Nhomakorabea
棒状杆菌属
* G＋菌，菌体一端或两端彭大呈棒状而得名 * 菌体染色不均匀，出现节段浓染或异染颗粒 菌体染色不均匀， * 排列不规则，呈栅栏状，或L形，或V形 排列不规则，呈栅栏状， * 无荚膜、无鞭毛、不产生芽胞 无荚膜、无鞭毛、 * 多为条件致病菌，只有白喉棒状杆菌是致病菌 多为条件致病菌，
• 【结果】 结果】
• 注意观察在接种 线两侧距滤纸条约 1cm处有无与接种线 呈45°角的白色沉淀 线出现。有沉淀者， 白喉杆菌毒力试验阳 性，该菌株产生白喉 外毒素；无沉淀线者， 白喉杆菌毒力试验阴 性，该菌株不产生白 喉外毒素。
* 毒力鉴定：动物试验，Elek平板毒力实验 毒力鉴定：动物试验，Elek平板毒力实验
法。通过观察白喉抗毒素与白喉外毒素的双向琼 脂扩散现象，判断所培养的白喉杆菌的产毒性。 脂扩散现象，判断所培养的白喉杆菌的产毒性。
• •
【材料】 1．产毒素的白喉杆菌、类白喉杆菌及待测的白喉杆 菌吕氏血清斜面24h培养物。 • 2．Elek琼脂蛋白胨培养基。 • 3．白喉抗毒素(1000u/m1)、马或兔血清(无菌)、无 菌滤纸条(6.0×1.5cm)、无菌5ml刻度吸管、无菌平皿及 镊子等。 •
二、致病性与免疫性
1. 致病物质： 致病物质：
* 白喉毒素（diphtherotoxin） 白喉毒素（diphtherotoxin） * 索状因子（cord factor） 索状因子（ factor） * K抗原（K antigen） 抗原（ antigen）
2. 致病机制
1）白喉外毒素：只有携带β棒状杆菌噬菌体的溶 白喉外毒素：只有携带β 原性白喉杆菌才能产生外毒素 外毒素结构 外毒素结构： 结构： B亚单位：有结合和转位功能 亚单位： A亚单位：其上有1个催化区 亚单位：其上有1 作用靶位：心肌和神经细胞 作用靶位：