甲基绿——派洛宁法显示细胞内DNA、RNA的分布

甲基绿——派洛宁法显示细胞内DNA、RNA的分布姓名：学号：实验时间：2014.10.14

1.实验目的

（1）学会制作血涂片。

（2）熟悉甲基绿——派洛宁法显示核酸的原理与操作步骤。

（3）观察DNA、RNA在细胞中的分布。

2.实验原理

（1）电离作用：脱氧核糖核酸和核糖核酸都有磷酸基，又有碱基，故为两性电解质。在一定的条件下，可以电离而带电荷，因此都有一定的等电点。

甲基绿、派洛宁为两种碱性染料，在水中电离后，都产生带阳电荷的离子，常与带负电荷的磷酸根形成盐键。

甲基绿电离后，在五价氮处产生二个正电荷，碱性较强，易与双链DNA分子（胞核等电点pH3.8～4.2）进行极性吸着而结合，使DNA显示绿色；派洛宁电离后仅产生一个正电荷，碱性较甲基绿弱，与单链RNA（胞质等电点pH4.6～5.2）吸附结合，使RNA显示红色。

（2）聚合作用：甲基绿对聚合高的DNA有亲和力，派洛宁对聚合低的RNA有亲和力。因此，甲基绿选染DNA，而派洛宁选染RNA。

3.实验材料和用品

（1）材料:成年蟾蜍一只

（2）试剂:70%的乙醇溶液、95%乙醇溶液、甲基绿-派罗宁染液（5:2）、蒸馏水

（3）器材:光学显微镜、载玻片、解剖针、解剖盘、镊子、剪刀、染色缸、废液缸等

4.实验步骤

（1）取蟾蜍（蟾蜍破髓，仰位剪去下颌、舌头）制备血涂片，干燥后滴加70%的乙醇溶液固定10分钟，晾干。

（2）滴染色液于血膜上，染15分钟（或在染色缸中）。

（3）蒸馏水冲洗，去染液。

（4）向染色液血膜滴加95%乙醇溶液分色，同时倾斜载片弃液体，晾干。

（5）观察。

5.实验结果

蟾蜍血红细胞的细胞核被染成紫色，细胞质被染成浅灰紫色。

6.讨论与结论

a.蟾蜍破髓的时候要控制力度和角度，以免戳到其他器官使蟾蜍失血过多。

b.制作血涂片时要控制角度和速度。角度大速度快，涂片厚。角度小速度慢涂片薄

c.70%的乙醇使蛋白质失活，对细胞起固定作用。95%乙醇起分色作用，去除非特异性染色。

d.细胞整体偏紫，尤其是核的紫色很深，可能是染液里面甲基紫太多，使实验结果不明显。