探究培养液中酵母菌种群数量的变化

探究培养液中酵母菌种群数量的变化
1、实验原理：
1．在含糖的液体培养基（培养液）中酵母菌繁殖很快，迅速形成一个封闭容器内的酵母菌种群，通过细胞计数可以测定封闭容器内的酵母菌种群随时间而发生的数量变化。

2．养分、空间、温度和有毒排泄物等是影响种群数量持续增长的限制因素。

3．酵母菌计数方法：抽样检测法。

先将盖玻片放在计数室上，用吸管吸取培养液，滴于盖玻片边缘，让培养液自行渗入。

多余培养液用滤纸吸去。

稍待片刻，待细菌细胞全部沉降到计数室底部，将计数板放在载物台的中央，计数一个小方格内的酵母菌数量，再以此为根据，估算试管中的酵母菌总数。

注意：从试管中吸出培养液进行计数之前，要将试管轻轻震荡几次。

仪器介绍：血细胞计数板
血细胞计数板的构造
血细胞计数板是由一块比普通载玻片厚的特制玻片制成的。

玻片中有四条下凹的槽，构成三
个平台。

中间的平台较宽，其中间又被一短横槽隔为两半，每半边上面,刻有一个方格网。

方格网上刻有9个大方格，其中只有中间的一个大方格为计数室其中共有400个小格，供微生物计数用。

这一大方格的长和宽各为1mm,深度为0.1mm,其体积为0.1mm3。

血细胞计数板的使用
以计数酵母菌为例
(1)样品稀释的目的是便于酵母菌悬液的计数,以每小方格内含有4-5个酵母细胞为宜,一般稀释10倍即可.
(2)将血细胞计数板用擦镜纸擦净,在中央的计数室上加盖专用的厚玻片.
(3)将稀释后的酵母菌悬液,用吸管吸取一滴置于盖玻片的边缘,使菌液缓缓渗入,多余的菌液用吸水纸吸取,捎待片刻,使酵母菌全部沉降到血细胞计数室内.
(4)计数；五点取样法
3.计算公式酵母细胞数/ml=每个小格酵母菌数目×400×104×稀释倍数
注释：培养的时间不同取样酵母菌的稀释倍数是不同的。

2．方法步骤：
提出问题→作出假设→讨论探究思路→制定计划→实施计划→按计划中确定的工作流程认真操作，做好实验记录→分析结果，得出结论→将记录的数据用曲线图表示出来。

（一）提出问题：酵母菌种群的数量是怎样随时间变化的？温度会影响酵母菌的生长吗？养分会影响酵母菌的生长吗？
（二）设计实验：将24支试管分成ABC三组，每组8支。

A组为实验组，装培养液10 mL，酵母菌母液0.1mL,环境温度28℃。

B组装培养液10 mL，酵母菌母液0.1mL,环境温度5℃，与A组形成温度条件对照。

C组不装培养液，只装无菌水10mL,酵母菌母液0.1mL,环境温度28℃，与A组形成营养条件对照。

（三）实验操作：
1．配制无菌马铃薯培养液和酵母菌母液；
2．预先设计分装。

先每次用10mL刻度吸管吸取10mL培养液到A组和B组试管，用另一支10mL刻度吸管吸取10mL无菌水到C组试管。

待分装完毕，每支试管加塞后把试管扎成捆后，然后用记号笔注明培养基的名称、组别、日期。

3．用高压蒸汽灭菌锅灭菌；（无菌条件避免其他菌）
4．接种菌种：用灭菌干净的1mL刻度吸管每次吸取0.1mL酵母菌母液，往每支试管中加入。

（注意滴加量不要太多，避免初始菌数过多。

）
5．培养：将A、C试管置于28℃的恒温箱中培养。

将B试管置于5℃的恒温箱中培养。

（5℃的恒温箱可由某些型号冰箱保温室设定5℃时代替。

）
6．计数和记录：本实验为7天，每天取样时间大体一致，每次每组按序号取一支试管。

计数过程中一定要遵守无菌操作规范，取样的吸管要干净且分开使用，每次取样前要试管振荡摇匀。

显微镜下进行细胞计数，后立即将数据填到记录表格中。

思考题1：如果一个小方格内酵母菌过多，难以数清，应当采取怎样的措施？
3.分析结果，得出结论；将记录的数据用曲线图表示出来。

参考1：一次实验数据记录表
C 0.8 0.4 0.1 0 0 0 0 0
参考2：出A、B、C各个处理的曲线图
显微镜直接计数法:
1. 为何用血细胞计数板可计得样品总菌值？叙述其实用范畴。

a 计数室体积必定；
b 在显微镜下，不经染色不能辨别菌体的逝世活，使计数所得的数目为一定体积内的总菌数，从而计得样品中总菌值。

实用范畴：可单细胞存在的细菌酵母菌或显丝状生长的真菌，放线菌所生的包子等。

2. 为什么计数室内不能有气泡？试剖析产赌气泡的可能原因。

a 气泡会盘踞计数室的空间，导致计数室中的菌体个数计数偏小，最后导致计数成果偏小。

b 计数室内的气泡，可影响菌液的随机散布，使计数发生误差。

产生气泡原因：
a 操作不当，先放菌液再盖盖玻片；
b 计数室洗涤不清洁；
c 盖玻片移动，造成空气进入而产生气泡。

3. 试剖析影响本实验结果的误差起源及提出改进办法？
1、仪器误差：所用器材均应干净清洁，并且计数板计数区不应当有擦痕。

2、计数室内可能有气泡。

由于酵母细胞并没有染色，看起来是透明的，有气泡很轻易被计进，使数值偏高；并且，气泡会影响菌悬液的随机散布。

改良：若产赌气泡，则用吸水纸吸出。

3、菌体在计数板上散布不均，当用选取5格计数时，会造成很大误差。

改良：应使菌液自然流入并混匀，进行察看时尽可能多数几个格子。

4、配制稀释液时汲取的浓渡过高或过低，导致稀释液浓度和原液不成准确比例，盘算时发生误差。

应将原液摇摆均匀后取中部的液体进行稀释。

5、由于数菌体数目时视觉疲劳而导致的视觉误差。

应多人察看，取记载均匀数。

6、计数时可能将格四周的菌都盘算在内了，使数值偏高。

改良：谨遵一个规矩，计上不计下，计左不计右，不可以反复计数。

7、可能呈现有出芽的酵母菌，将出芽的酵母菌按两个计数了，使数值偏高。

改进：计数时，只有当芽体于母细胞一样大的时候，才干计为两个。

8、微量移液器的最小量程太大，在加样时，轻易加多，使盖玻片鼓起，血球计数板所技巧
的体积变大，终极结果偏大。

改进：用量程的小的微量移液器并少加一些。

计数时有哪些注意事项？
①从试管中吸出培养液进行计数之前，要将试管轻轻震荡几次；如果酵母菌浓度过大，应先稀释。

②对于压在中格界线上的酵母菌，一般只取相邻两边及夹角计数；
③对于已经出芽的酵母菌，芽体达到母细胞大小一半时，即可作为两个菌体计算；已死亡的酵母菌不计数。

④每个样品一般计数三次，取其平均值。

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