琼脂扩散试验

琼脂扩散试验（以测定鸡法氏囊琼脂抗体试验为例）

1．制板

琼脂 1g

蒸馏水

100m1 充分加热溶化，分装于培养皿中（不需无菌操作），厚度3-4mm。

氯化钠 8g

2．打孔在制备好的琼脂板上用打孔器打梅花孔(中间1孔，周围6孔，如下图），将孔内琼脂用针头挑出（针头斜面向上）。

3．封底用酒精灯轻烤打孔部位至底部琼脂板稍微溶化（手背感觉微烫手），封闭孔底，以防侧渗。

4．加样原则：（1）已知的加在中间，未知的加在周围；（2）满而不溢。

用微量移液器吸取法氏囊抗原加入中间孔，卵黄抗体加入1-4孔，生理盐水加入5-6孔。

每种样品对应一个滴头。今天上午抗原和生理盐水用一个吸头，先吸生理盐水再吸抗原。

卵黄抗体用前要摇匀。

5．反应（扩散）加样完毕后，加盖。正放静置5～10min，然后将培养皿倒置于湿盒中，37℃温箱中作用，分别在24h、48h、72h观察并记录结果。

琼脂扩散打孔示意图

7孔加抗原，1-4孔加卵黄抗体，5-6孔加生理盐水。

6．结果判定

(1)判定方法标准阳性血清与抗原孔之间出现一条清晰的白色沉淀线，则试验成立。

(2)判定标准若被检血清孔与中心抗原孔之间出现清晰致密的沉淀线，且该线与

抗原和标准阳性血清之间沉淀线的末端相吻合，则被检血清判为阳性。

吻合为阳性。

被检血清孔与中心孔之间不出现沉淀线，但标准阳性血清的沉淀线一端向被检血清孔内侧弯曲，则此孔的被检样品判为弱阳性(凡弱阳性者应重复试验，仍为弱阳性者，判为阳性)。

内弯为阳性。

若被检血清孔与中心孔之间不出现沉淀线，且标准血清沉淀线直向被检血清孔或标准阳性血清的沉淀线一端向被检血清孔外侧弯曲，，则被检血清判为阴性。

直向或外弯为阴性。

被检血清(如图中3号)孔与中心孔之间沉淀线粗而浑浊或标准阳性血清与抗原孔之间的沉淀线交叉并直伸，被检血清孔为非特异反应，应重做，若仍出现非特异反应则判为阴性。

交叉为非特异性，应重做。