测定尿酶活性与蛋白质溶解度
测定尿酶活性与蛋白质溶解度
llppaa 发表于2006-5-1 15:27:00
测定尿酶活性的方法
定义：此方法在测定条件下，测定大豆产品中残留的尿酶活性
适用范围：适用于除添加尿素以外的豆粕、豆饼及大豆粉碎饲料。仪器设备
1.恒温水浴：须能保持温度于30±0.5℃；
2.酸度计（pH计）：具有玻璃电极、甘汞电极，可测试5ml的溶液。此为一种精密仪器，须装有温度补正器，其敏感度应为。0.0 2pH单位或更佳。仪器操作及pH值测定均依照制造商的说明，该p H计应在测定前以标准缓冲液加以校正（注1）。
3.试管：20 x 150mm并配有橡皮塞。
试剂
1.磷酸盐缓冲液0.05mol／L：溶解 3.403g磷酸二氢钾（KH 2PO4）于约100ml新鲜蒸馏水中，溶解4.355g磷酸氢二钾（KH2P O4）于约100ml蒸馏水中，然后将此两种溶液混合并配成1000ml溶液。着此溶液系纯品，则pH值应为7.0，否则应在使用前用碱或酸调整为7.0。依上述方法制备的缓冲液，其有效期在90天内。
2.加缓冲液的尿素溶液：溶解15g尿素于500ml磷酸缓冲液中，加5ml甲苯作为防腐剂以防止霉菌生成，依前述方法调整尿素溶液的pH值为7.0。
3.样品的制备：尽可能研磨样品成为细粉并混均，至少有60％通过试验筛孔径为0.4mm
“CNS 386”（美国40号标准筛），但勿使温度升高。
测定步骤
1.正确称取0.20 ±0.001g样品于试管中，加入10ml已加缓冲液的尿素溶液，加塞混合，然后置于30℃水浴中。在混合操作时试管切勿倒置。
2.空白试验需正确称取0.200。0.001g样品于试管中，并加入1 0ml磷酸盐缓冲液，加塞混合放置30℃水浴中。测定样品的制备与空白试验的制备须相隔5分钟，然后每隔5分钟搅拌试管内溶物1次。
3.30分钟后，相隔5分钟将试验及空白试验的试管自水浴中取出，将上层液体移入5ml烧杯中，在水浴中取出刚达5分钟时，分别测定此种上层液体的pH值。（注1）
4.计算：试验试管的pH值与空白试管的pH值两者间的差异，即为尿素酶活性的指数。
注：1.本项操作必须小心，以防止各玻璃仪器或电极的沾污，若pH计不能立即表示稳定的pH值时，应加以检查。有时由于大豆可溶成份的附着，会使电解质经过甘汞电极的多空纤维的流动速度降低。
2.此方法是Caskey，C.D.,T knapp,F.C.,方法的修正。工业工程化学，分析板。16:640
(1944)
附录2
快速而简单的估测尿素酶活性的方法
目的：在有指示剂酚红存在的条件下，豆粕（饼）中的尿素酶活性可按尿素转变成氨的方法定性测定。
设备
1.稀硫酸（H2SO4)0.2N或更稀些，带滴管。
2.尿素一酚红试剂。
a 将1.2克酚红溶解于30ml0.2N的NaOH中。
b 用蒸馏水将之稀释至约300aml。
c 加入90g尿素并溶解之。
d 用蒸馏水稀释至2l。
e 加入14ml 1.0N的H2SO4或70ml o.2N的H2SO4。
f 用蒸馏水稀释至最后体积3l。
g 溶液应具明亮的琥珀色。
测定步骤
1.在一个150ml的烧杯中倒入少量试剂，注意溶液必须呈明亮的琥珀色。若溶液已转
变为深桔红色，滴人稀硫酸深液并搅拌之，直至溶液再度呈境拍色。
2.量一场匙粉碎很好的豆饼粉，放置于陪替氏（petri）培养皿中。
3.在样品上加入两场匙试剂，轻轻搅拌，将样品平铺于培养皿中。若仍有干豆饼斑点，
则再加入试剂，直至将豆饼浸湿。
4.放置5分钟后观察：
a.没有任何红点出现：再任其放置25分钟，若仍无红点出现，说明豆饼过熟。
b.有少量红点：少量尿素酶活性，豆饼可用。
c.豆饼表面约有25％为红点覆盖：少量尿素酶活性；豆饼可用。
d.豆饼表面约有50％为红点覆盖：有尿素酶活性。
e.豆饼表面的75％－100％为红点覆盖：尿素酶活性很高，不应接受这种原料，因为豆饼过生。
附录3
蛋白溶解度（Protein Solubility）的测定方法（Dale等，1987）试剂
1、0.2%的氢氧化钾(KOH)溶液，相当于0.042当量,pH为12.5。
2、其它试剂为凯氏定氮所需的试剂。
3、称取2.360g KOH于溶量瓶中，加水溶解并稀释至1000ml。
注意补充KOH试剂的纯度。
测定步骤
1.称取1.5g过60目筛的豆粕，置于250ml烧杯中，加入75ml 0.2%的KOH溶液，在磁力搅拌器上搅拌20分钟；
2.之后，移入50ml溶液于离心管中，以2700转／分的速度离心10分钟。
3.取15ml上清液进行凯氏定氮。
4.用标准定氮法测定15ml溶液中的蛋白质含量，若按此法测定，该15ml上清液相当于0.3g原样本。
计算方法
蛋白溶解度(%)=0.3g样本的粗蛋白含量／原样本的粗蛋白含量。
注：当比较不同豆粕样品时，它们的粒度应一致的，样品在0.2% KOH溶液中搅拌的时间也应一致。
尿蛋白的五项检查是什么
尿蛋白的五项检查 尿蛋白与尿酶:早期肾损伤标志 1.微量白蛋白尿(MAU): 作为全身血管内皮损伤标志,MAU是预测和早期诊断肾病、糖尿病、高血压及心血管疾病血管损伤的敏感指标,而且对疾病进展、预测及治疗效果评价等也具有重要参考价值 2: 尿低分子蛋白检测 低分子量蛋白尿也称肾小管性蛋白尿,多用于早期小管损伤标志。 ⑴β2微球蛋白(β2-MG) ⑵视黄醇结合蛋白(RBP) ⑶α1微球蛋白(α1-MG) ⑷尿蛋白-1 ⑸半胱氨酸蛋白酶抑制剂C(Cystatin C) Cystatin C体内生成量恒定,不受性别、肌肉容积等因素影响,血浓度检测已成为评估肾小球滤过率的敏感指标。 沈阳国济检查报告： 尿蛋白五项： 1：尿转铁蛋白：肾小球滤过膜早期损伤的标志之一。 2：尿α1微球蛋白：肾小球滤过膜和肾小管重吸收损伤。 3：尿免疫球蛋白G：与疾病严重程度有关，越严重，值也高。 4：尿微量白蛋白：固有细胞损伤，是糖尿病肾病和高血压肾病的早期指标。 5：尿β2微球蛋白：早期肾小管损伤的指标。 案例分析：尿蛋白3+ 其含义是：正常尿液里不含或只含微量蛋白质，检查结果呈阴性（－），当尿液里的蛋白质含量上升到一定量是检查结果就呈阳性（+）。尿蛋白3+（+++、三个加号）是做24小时尿蛋白定量检测的结果。同时还可以表述为尿蛋白三个加号、尿蛋白+3，几种表述都是一个意思。尿蛋白三个加号的意思是1L尿液里含有蛋白质2.0—4.0g，即2.0—4.0g/L。
如果出现了上述的症状，我们的检查就要按照上文中的项目进行，不然造成的后果是很严重的：危害一、引起的小管细胞生物学波动：出现尿蛋白的许多肾脏病都存在着细胞过度增生，代表着一种非适应性反应，导致肾衰。蛋白质可直接调节小管细胞功能，改变其生长特性及其细胞因子和基质蛋白表型表达，可导致小管基底侧释放PDGF、FN和MCP-1，诱导纤维化过程。 二、引起小管间质缺氧加重：尿蛋白重吸收各消化多量蛋白质需额外能量，可造成小管细胞缺氧，以致引起小管细胞损伤。 三、系膜毒性：在肾衰模型中，可以观察到血清蛋白在肾小球系膜中的蓄积，那些大分子物质在系膜区的聚集可引起系膜细胞损伤、增生各系膜基质合成增多，从而产生肾小球硬化。尿蛋白肾病模型中，肾小球中有低密度脂蛋白(LDL)和极低密度脂蛋白(VLDL)的载脂蛋白B以及载脂蛋白A沉积那些聚集最终也可导致肾小球硬化。 四、尿蛋白3+的原因主要是肾小球滤过膜受损伤导致通透性增加造成的，肾小球的滤过膜通透性增强意味着启动了肾脏的纤维化，如果不及时的治疗，病情的进一步蔓延，肾脏固有细胞表型会发生转化，生成不易被降解的胶原纤维蛋白，沉积在肾脏，逐渐取代健康的肾单位，最终会发展成终末期肾衰竭--尿毒症。
影响蛋白质水合和溶解性的因素有哪些
1.影响蛋白质水合和溶解性的因素有哪些？这两方面的影响因素有何异同? 答：（1)蛋白质的水合性质(PropeｒtｉeｓHydratiｏn of Pｒoteins） A．蛋白质水合性质：蛋白质分子中带电基团、主链肽基团、Aｓn、 Gln的酰胺基、Ｓer、Thr和非极性残基团与水分子相互结 合的性质。 B. 蛋白质水合能力:当干蛋白质粉与相对湿度为9０-95％的水蒸汽 达到平衡时,每克蛋白质所结合的水的克数。 α=?C +0.4 ?Ｐ＋0．2 ?Ｎ （α：水合能力，g水／g蛋白质;?C, ?P , ?Ｎ:带电的、极性和非极性的分数） Ｃ．影响蛋白质结合水的环境因素: 1.pH 当pH=pI时，蛋白质的水合能力最低 ２．温度温度升高,氢键作用和离子基团的水合作用减弱,水合能力下降。 3．氨基酸组成极性氨基酸越多，水合能力越高 4，离子强度低浓度的盐能提高蛋白质的水合能力。 5.盐的种类 (2)蛋白质的溶解度（SolubｉlitｙoｆPrｏtｅinｓ) 影响蛋白质溶解性质的主要的相互作用： A 疏水相互作用能促进蛋白质—蛋白质相互作用，使蛋白质溶解度降低； Ｂ离子相互作用能促进蛋白质—水相互作用，使蛋白质溶解度增加。 1.pH 当pＨ高于或低于等电点时，蛋白质带净的负电荷或净的正电荷， 水分子能同这些电荷相互作用并起着稳定作用 Ｕ－形曲线，最低溶解度出现在蛋白 2.①“盐溶”（saltｅd iｎ）中性盐的离子在0.1-1Ｍ能提高蛋白质的溶 解度。 ②“盐析”(ｓalted out)中性盐的离子大于１Ｍ,蛋白质的溶解 度降低，并可能导致蛋白质沉淀。 ③当离子强度<０.5时，离子中和蛋白质表面的电荷。 电荷掩蔽效应对蛋白质的溶解度的影响取决于蛋白质的表面性质。如果蛋白质含 有高比例的非极性区域,那么此电荷掩蔽效应使它的溶解度下降，反之, 溶解度提高。 当离子强度＞1.0时，盐对蛋白质溶解度具有特殊的离子效应。 硫酸盐和氟化物（盐）逐渐降低蛋白质的溶解度。在相同的μ,各种离子对蛋 白质溶解度的相对影响（提高溶解度）的能力。Hofｍeister系列 阴离子（提高蛋白质溶解度的能力）: SO42-<Ｆ- 氢氧化钾蛋白质溶解度 的测定 公司标准化编码 [QQX96QT-XQQB89Q8-NQQJ6Q8-MQM9N] 氢氧化钾蛋白质溶解度的测定 1、原理 氢氧化钾蛋白质溶解度可以反映蛋白质变性的情况。不同的蛋白质品种，氢氧化钾蛋白质溶解度不同。蛋白质变性越大，氢氧化钾蛋白质溶解度越小。 用一定浓度的氢氧化钾溶液提取试样中的可溶性蛋白质，在催化剂作用下用浓硫酸将提取液中可溶性蛋白质的氮转化为硫酸铵。加入强碱进行蒸馏使氨逸出，用硼酸吸收后，再用盐酸滴定测出试样中可溶性蛋白质含量；同时，测定原始试样中粗蛋白质含量，计算出试样的蛋白溶解度。 2、试剂 a)??氢氧化钾（分析纯），无水硫酸钾、五水硫酸铜、氢氧化钠、硼酸、甲基红、溴甲酚绿、硫酸铵； b)??浓硫酸、盐酸（分析纯）、95%乙醇、蒸馏水。 3、仪器和设备 a)??感量为 g分析天平； b)??磁力搅拌器； c)??离心机（带离心管），转速为2700r/min以上； d)??样品粉碎机； e)??60目分析筛； f)??电炉； g)??100 mL或250 mL凯氏烧瓶； h)??凯氏蒸馏装置； i)??250 mL锥形瓶； j)??1000 mL容量瓶； k)??微量滴定管。 4、试剂的制备 a）??%氢氧化钾溶液 称取 g氢氧化钾，加水溶解后，转移至1000 mL容量瓶中，用水定容至刻度。 b）??混合催化剂 称取6 g硫酸钾和 g硫酸铜，磨碎混匀。 c)??氢氧化钠溶液 称取400 g氢氧化钠，加水溶解后，转移至1000 mL容量瓶中，用水定容至刻度。 d)??硼酸溶液 称取20 g硼酸，加水溶解后，转移至1000 mL容量瓶中，用水定容至刻度。 e)??盐酸标准溶液 量取 mL浓盐酸，注入1000 mL水中混匀，按GB 601-88要求进行标定即可。 f)??混合指示剂 尿蛋白定性检查 一、磺基水杨酸法 【目的】掌握尿蛋白（PRO）定性磺基水杨酸法（SSA）。 【原理】生物碱试剂磺基水杨酸，在酸性的条件下，其磺酸根阴离子与蛋白质氨基酸阳离子结合，形成不溶性蛋白盐沉淀。 【器材】 1. 小试管、试管架。 2.滴管、胶洗头。 3. 2ml刻度吸管、吸耳球。 4. pH广泛试纸。 5. 黑色衬纸。 【试剂】 200g/L磺基水杨酸溶液：20g磺基水杨酸溶于100ml蒸馏水中。 【标本】新鲜尿液或模拟蛋白尿标本。 【操作】 1、调pH 用pH广泛试纸测试尿液酸碱度，如pH不在5—6范围，可加酸或碱予以调节。 2、加尿液取小试管2支，分别加入清晰尿液1ml。 3、加试剂于第1支试管内滴加磺基水杨酸溶液2滴，轻轻混匀；另1支试管不加试剂作为空白对照。 4、判断结果 1min内观察结果，按照书中表格判断阳性程度及大致蛋白质含量。 【参考区间】阴性 【注意事项】 1、标本①如果尿液呈现明显的浑浊，应先离心或过滤。②当知患者应用大剂量青霉素、庆大霉素、磺胺、含碘造影剂时，应告知结果可能产生假阳性。③指导患者正确采集中段尿，避免混有生殖系统分泌物。 2、调pH 本法在尿液偏碱或偏酸时（pH＞9或pH＜3)可呈假阴性，因此检测前可先测试尿pH，必要时用稀NaOH或5%醋酸进行调节。 3、结果判断 （1）掌握好结果判断时间。操作时严格按照操作方法进行，判断时间严格掌握在1min，极轻度的混浊并无明显临床意义。当尿液中含高浓度尿酸或尿酸盐时，在加入试剂1—2min后可能出现白色点状物，逐渐呈蛛丝状浑浊，缓慢扩散，覆盖于尿液表面，遇此干扰可离心后的尿液上清进行检测。 （2）如果通过镜检发现大量细胞，分析其阳性可能是由于混有生殖系统分泌物造成的假阳性，则可用离心后的上清液重新测定，进行验证。 （3）对于微弱阳性的判断，可选用黑色衬纸作背景，以提高分辨力。 4、灵敏度本法灵敏度高，为0.05—0.10g/L。 尿葡萄糖班氏法定性试验 【目的】掌握葡萄糖（Glu）班氏定性的方法 【原理】葡萄糖含有醛基，在高热、碱性溶液中，能将试剂中的蓝 氢氧化钾蛋白质溶解度 ---参照GB/T 19541-2004 1适用范围：豆粕、菜籽粕、棉籽粕。 2 氢氧化钾蛋白质溶解度 大豆粕样品在规定的条件下，可溶于0.2%氢氧化钾溶液中的粗蛋白质含量占样品中总的粗蛋白质含量的质量百分数。 3氢氧化钾蛋白质溶解度的测定 3.1 方法原理 氢氧化钾蛋白质溶解度可以反映大豆粕产品加热过度的情况。不同加热程度的大豆粕，氢氧化钾蛋白质溶解度不同。先测定大豆粕样品在规定的条件下，可溶于氢氧化钾溶液中的粗蛋白质含量；再测定同一大豆粕样品中总的粗蛋白含量，计算出氢氧化钾蛋白质溶解度。 3.2 试剂 所用试剂均为分析纯，所用的水为按GB/T 6682中规定的三级水。 3.2.1 0.2%的氢氧化钾溶液：2.44g氢氧化钾（含量：≥82％）溶解于水中，稀释并定容至1L。 3.3 仪器设备 3.3.1实验室用样品粉碎机。 3.3.2样品筛：孔径0.25mm。 3.3.3分析天平：感量0.0001g。 3.3.4 磁力搅拌器。 3.3.5离心机：转速为2700 r/min以上。 3.3.6 TECATOR装置：消化管、消化系统、蒸馏系统。 3.4 样品的制备 取具有代表性的大豆粕样品，用四分法缩减分取200g左右，粉碎过0.25mm 孔径的样品筛，充分混匀，装入磨口瓶中备用。 3.5 测定步骤 称取大豆粕式样1.0g，精确到0.1mg，置于250mL高型烧杯中，加入50.00mL 氢氧化钾溶液，在磁力边搅拌器上搅拌20min，将溶液转移至离心管中，以2700 r/min离心10min，小心移取清液10.00ml，放入消化管中，加入6.4g混合催化剂和10mL浓硫酸，消化，蒸馏，测其粗蛋白，同时测定同一式样总的粗蛋白质含量。 3.6 结果计算 氢氧化钾蛋白质溶解度X，数值以质量分数表示，按式计算： X = W1 / W2 ×K × 100 公式中： W1 —大豆粕式样溶于氢氧化钾溶液中的粗蛋白质含量，%。 W2 —大豆粕式样总的粗蛋白质含量（以两次平行测定结果的算术平均值为测定结果），%。 K —稀释倍数。 计算记过表示到小数点后一位。 3.7 精密度 3.7.1重复性 在同一实验室，由同一操作人员完成的两个平行测定结果，相对偏差不大于2%；以两次平行测定结果的算术平均值为测定结果。 3.7.2 再现性 再不同实验室，由不同操作人员用不同的仪器设备完成的两个测定结果，相对偏差不大于4%。 氢氧化钾蛋白质溶解度的测定 1、原理 氢氧化钾蛋白质溶解度可以反映蛋白质变性的情况。不同的蛋白质品种，氢氧化钾蛋白质溶解度不同。蛋白质变性越大，氢氧化钾蛋白质溶解度越小。 用一定浓度的氢氧化钾溶液提取试样中的可溶性蛋白质，在催化剂作用下用浓硫酸将提取液中可溶性蛋白质的氮转化为硫酸铵。加入强碱进行蒸馏使氨逸出，用硼酸吸收后，再用盐酸滴定测出试样中可溶性蛋白质含量；同时，测定原始试样中粗蛋白质含量，计算出试样的蛋白溶解度。 2、试剂 a)??氢氧化钾（分析纯），无水硫酸钾、五水硫酸铜、氢氧化钠、硼酸、甲基红、溴甲酚绿、硫酸铵； b)??浓硫酸、盐酸（分析纯）、95%乙醇、蒸馏水。 3、仪器和设备 a)??感量为g分析天平； b)??磁力搅拌器； c)??离心机（带离心管），转速为2700r/min以上； d)??样品粉碎机； e)??60目分析筛； f)??电炉； g)??100 mL或250 mL凯氏烧瓶； h)??凯氏蒸馏装置； i)??250 mL锥形瓶； j)??1000 mL容量瓶； k)??微量滴定管。 4、试剂的制备 a）??%氢氧化钾溶液 称取g氢氧化钾，加水溶解后，转移至1000 mL容量瓶中，用水定容至刻度。 b）??混合催化剂 称取6 g硫酸钾和g硫酸铜，磨碎混匀。 c)??氢氧化钠溶液 称取400 g氢氧化钠，加水溶解后，转移至1000 mL容量瓶中，用水定容至刻度。 d)??硼酸溶液 称取20 g硼酸，加水溶解后，转移至1000 mL容量瓶中，用水定容至刻度。 e)??盐酸标准溶液 量取mL浓盐酸，注入1000 mL水中混匀，按GB 601-88要求进行标定即可。 f)??混合指示剂 称取1 g甲基红和5 g溴甲酚绿，加入乙醇溶解后，转移至1000 mL 尿微量白蛋白的临床检测的注意事项 欧阳嵘 目前，我国患糖尿病、高血压、心脑血管病的人数日益增多。随着病程的发展，肾脏受累的可能性与受累的程度也不断上升。通常情况下血尿素和血肌酐的测定值正常时并不能排除肾脏的受损, 而尿 常规蛋白测定结果为阳性时,肾脏的损伤往往已达到不可恢复的阶段，尿微量白蛋白(MAU) 的测定已越来越多地用做肾组织损伤的早期诊断指标,其临床意义也已日益为临床医生所重视。若在发生微量白蛋白尿的这一阶段积极有效地控制血糖、降压、降脂、减少蛋白摄入量、改善生活方式，仍有希望阻止病情向大量蛋白尿发展或延缓其发展速度，同时也能减少心血管事件的发生[1-2]。但在临床实际操作中，尿微量白蛋白的测定亦有很多需要注意的相关事项，值得我们临床医生去关注。 1、尿微量白蛋白的定义 1982年Viberti等发现1型糖尿病时尿总蛋白在参考范围内，而尿白蛋白排泄却增加，由此提出了“微量白蛋白尿”的概念，并把它作为糖尿病早期肾损害一个敏感指标[3]。其特征是尿白蛋白浓度为 20-200mg/L或白蛋白排泄率20-200μg/min（或30-300mg/24小时），或白蛋白/肌酐比率30-300mg/每克肌酐）。此时尿常规试纸条检测蛋白为阴性。尿常规试纸条检测蛋白为阳性时白蛋白浓度已大于 200mg/L（或白蛋白排泄率大于200μg/min），称为大量白蛋白尿。因尿蛋白浓度受主客观因素影响比较大，故临床上更多采用白蛋白排 泄率或尿白蛋白/肌酐比率来表示尿白蛋白的值。国际上多采用白蛋白排泄率表示尿中白蛋白的排出量。 2、尿微量白蛋白发生的机理 白蛋白(Albumin)占血浆总蛋白量的60％，分子量为69kD，是一种带有负电荷的大分子蛋白。正常情况下在肾小球滤过膜上有许多小孔起机械屏障作用，膜孔直径为5.5nm,限制大分子物质(如血细胞和大分子蛋白质)的滤过。在滤过膜上还存在着带负电荷糖蛋白和硫酸乙酰肝素，这些带负电荷的结构形成了滤过膜的电子学屏障，限制了带负电荷的分子滤过。血浆白蛋白分子量69 kD，且由于其带负电荷，所以正常情况下只有极少部分能滤过，经肾小球滤过的蛋白质几乎全部被近曲小管以主动方式重吸收，因此最后随着尿液而排出的白蛋白只有极少量。正常情况下，绝大部分蛋白不能通过滤过膜。但在病理情况下[4]，如各种炎症、代谢异常和免疫损伤，使肾小球血流动力学异常，肾小球滤过膜损害是造成尿微量白蛋白排出量增加的重要原因。糖尿病病人由于长期高血糖使非酶糖酰化速率增加，导致缺氧，血液黏度增高，同时内皮细胞释放内皮素和一氧化氮等血管活性物质使肾小球毛细血管张力改变，进而引起肾血流动力学变化，使肾小球处于高滤过状态并导致肾损害，同时糖尿病患者肾小球滤过膜上硫酸乙酰肝素合成减少，硫酸肝素分子带有许多阴离子侧链，对于维持基底膜电荷和孔径的大小起重要作用，导致肾小球滤过膜电荷选择性屏障受损，使尿微量白蛋白在尿中排出增加[。再加上糖尿病病人存在三多一少症状，近曲小管内的尿流速增加，导致被滤出的白蛋白又不 24小时尿蛋白定量 24小时尿蛋白定量-24小时尿蛋白定量的定义和意义 24小时尿蛋白定量中的“24小时的尿量”，就是把早上的第一次的小便排干净后，从第 二次的小便开始留。看一下这时是几点，记一下时间，直至第二天的这个时间，为24个小时。把这24个小时内的，每一次的所有的小便，都放到一个容器里，混合均匀，然后从中间抽取100?200毫升，拿到医院去化验。 在正常情况下，肾小球滤过膜只能通过分子量较小的物质。正常人每天尿中蛋白质一般 为40-80毫克，这一含量用蛋白质定性试验的方法一般不能检出。患某些疾病时，蛋白质漏出增加，就可被检出尿蛋白阳性。所以尿蛋白定性报告的结果是粗略的，24小时尿蛋白 定量检验可以精确地测出小便中排出的蛋白量。 24小时尿蛋白定量是判定肾病有无的可靠指标： 临床上，判定肾病发生与否，多通过尿常规检查中的尿蛋白定性和定量两个指标进行综合判定。尿蛋白定性指标就是常说的尿蛋白是阴性还是阳性。如果尿蛋白检查结果为阳性，反应肾病的病情程度看其带有几个+。而尿蛋白定量判定则更能准确的反应受检者的肾脏功 能，常用的诊断指标即是24小时尿蛋白定量。 偶然一次发生24小时尿蛋白定量超标，不能确诊为肾病： 正常人，尿常规检测24小时尿蛋白定量范围小于150mg/24小时.如果受检人的24小时尿蛋白定量指标高出了此正常值参考范围，则可认为其存在肾功能损伤情况。 尽管24小时尿蛋白定量是判定肾病是否发生的可靠指标，但是，单凭一次的24小时尿蛋白定量检查结果异常就判定受检者发生了肾病，这是不准确的。在临床对肾病的发生做 出确诊时，通常情况下，需要重复做尿常规检查。通过做定期检查，患者的尿常规检查结果 显示，存在三次及以上的24小时尿蛋白定量指标均高于正常参考范围，才可以判定患者确实发生了肾脏病变。 定期检查，早发现早治疗，防止病情恶化： 肾病早期发病隐匿，患者多无明显症状表现，很容易被忽视。许多人就医时，肾病已经 实验三蛋白质的两性反应和等电点的测定 一、目的和要求 1.了解蛋白质的两性解离性质。 2.初步学会测定蛋白质等电点的方法。 二、原理 蛋白质由许多氨基酸组成，虽然绝大多数的氨基与羧基成肽键结合，但是总有一定数量自由的氨基与羧基，以及酚基等酸碱基团，因此蛋白质和氨基酸一样时两性电解质。调节溶液的酸碱度达到一定的氢离子浓度时，蛋白质分子所带的正电荷和负电荷相等，以兼性离子状态存在，在电场内该蛋白质分子既不向阴极移动，也不向阳极移动，这时溶液的PH值称为该蛋白质的等电点（PI）。当溶液的PH低于蛋白质等电点时，即在氢离子较多的条件下，蛋白质分子带正电荷成为阳离子；当溶液的PH高于蛋白质等电点时，即在氢氧根离子较多的条件下，蛋白质分子带负电荷成为阴离子。 在等电点时蛋白质溶解度最小，容易沉淀析出。 三、试剂和器材 1.试剂 0.5%酪蛋白溶液；酪蛋白醋酸钠溶液；0.04%溴甲酚绿指示剂；0.02N盐酸； 0.1N醋酸溶液；0.01N醋酸溶液；1N醋酸溶液；0.02N氢氧化钠溶液 2.器材 试管及试管架；滴管；吸量管（1、5ml） 四、操作方法 1.蛋白质的两性反应 （1）取1支试管，加0.5%酪蛋白溶液20滴和0.04%溴甲酚绿指示剂5-7滴，混匀。观察溶液呈观的颜色，并说明原因。 （2）用细滴管缓慢加入0.02N盐酸溶液，随滴随摇，直至有明显的大量沉淀发生，此时溶液的PH接近与酪蛋白的等电点。观察溶液颜色的变化。（3）继续滴入0.02N盐酸溶液，观察沉淀和溶液颜色的变化，并说明原因。（4）再滴入0.02N氢氧化钠溶液进行中和，观察是否出现沉淀，解释其原因。 继续滴入0.02N氢氧化钠溶液，为什么沉淀又会溶液？溶液的颜色如何 变化？说明了什么问题？ 2.酪蛋白等电点的测定 （1）取9支粗细相近的干燥试管，编号后按下表的顺序准确地加入各种试剂。 加入每种试剂后应混合均匀。 （2）静置约20分钟，观察每支试管内溶液的混浊度，以—，+，++，+++，++++符号表示沉淀的多少。根据观察结果，指出哪一个PH是酪蛋白的 等电点？ 尿微量白蛋白 微量白蛋白尿：指在尿中出现微量白蛋白，定义是24小时尿白蛋白排泄率在30-300mg；微量白蛋白尿反映肾脏异常渗漏蛋白质。 检测方法：临床上主要使用免疫透视比浊法尿微量白蛋白进行检测。除此之外，放射免疫法、酶联免疫法和化学发光等方法。 免疫透视比浊法：抗原抗体结合后，形成免疫复合物，在一定时间内复合物聚合出现浊度。当光线通过溶液时，可被免疫复合物吸收。免疫复合物量越多，光线吸收越多。光线被吸收的量在一定范围内与免疫复合物的量成正比。利用比浊计测定光密度值，复合物的含量与光密度值成正比，同样当抗体量一定时，光密度值也与抗原含量成正比。本法较单向琼脂扩散试验和火箭电泳等一般免疫化学定量方法敏感、快速简便，但要求免疫复合物的数量和分子量达到一定高度，否则就难以测出。该方法注意事项：1、抗原或抗体量大大过剩，可出现可溶性复合物，造成误差。2、应维持反应管中抗体蛋白始终过剩。3、易受到脂血的影响。 意义：正常情况下，由于肾小球滤过膜电荷选择性屏障的静电同性排斥作用，MAU大部分不能通过滤过膜，而各种炎症、代谢异常和免疫损伤均可导致滤过膜上负电荷减少，静电排斥力下降，造成MAu从尿中漏出增多；尿微量白蛋白是早期发现肾病最敏感、最可靠的诊断指标，判断肾小球受损程度的重要蛋白，是糖尿病肾病最早期的生化表现，也是肾病进展和发生心血管事件危险性的一个重要标记。 24小时尿蛋白 24小时尿蛋白：包括尿液中出现的所有蛋白（分子量最小的白蛋白，分子量较中-大的免疫球蛋白、转铁蛋白、β2一微球蛋白等）； 检测方法：24小时尿蛋白定量检测前必须排除泌尿系感染、运动等影响，要先用量杯量总尿量，然后搅匀，取出一小杯测定每100毫升的蛋白量，再根据实际尿量进行计算，可计出24小时的蛋白量，检测方法为双缩脲比色法、比浊法和染料结合法；意义：24小时尿蛋白可以反映各期肾炎、肾病等早期病变、治疗效果及转归化时； 两者区别 微量白蛋白主要是指白蛋白，主要早期反映肾小球滤膜的损害； 尿蛋白是包括白蛋白，还包括分子量较中-大的免疫球蛋白、转铁蛋白、β2一微球蛋白等，尿蛋白异常反映可能为肾小球损害，也可能为肾小管损害。 蛋白尿检测方法有什么 文章导读 蛋白尿其实是肾病的主要症状，肾病给人体带来的伤害是很大的，患者在进行常规治疗的同时，最好还要在饮食上多加注意，这样才可以让疾病更快的恢复，对于一些病情比较严重的患者，最好是吃一些高质量的低蛋白食物，这样就可以有效的缓解症状，从而还会让患者的机体抵抗力得到提高，那么蛋白尿检测方法有什么呢? 第一，蛋白尿检测方法有什么?临床上常用的方法有以下3种：尿蛋白定性试验：通常采用蛋白试纸法、磺基柳酸法、加热醋酸法3种方法。正常情况下，尿蛋白定性试验呈阴性。但此种检查方法易受一些因素的影响，可致假性结果，如尿酸盐含量高时，尿呈酸性反应，蛋白试纸法结果较实际情况低，磺基柳酸法易呈假阳性;大量使用青霉素时，磺基柳酸法易呈假阳性反应;使用磺造影剂时，磺基柳酸法、加热醋酸法均可出现假阳性反应;当尿呈强碱性时，假性结果更多，或出现蛋白试纸法假阴性反应，或出现磺基柳酸法和加热醋酸法的假阴性反应。当尿蛋白仅为一些特殊蛋白质时，蛋白试纸法和磺基柳酸法均不敏感。因此，在进行尿蛋白定性时，应综合各种因素，具体情况具体分析，选择适宜的方法。尽管定性试验比较方便，但有时难以反应蛋白尿的实际情况，有条件时，最好进行定量检查。 第二，尿蛋白定量测定：一般进行ECTkey=24小时尿蛋白定量 target=_blank>24小时尿蛋白定量检测。使用的方法比较多，有些方法虽然比较精确，如凯氏定氮法、双缩脲法等，但操作很复杂。目前临床多采用简易的半定量法，如艾司巴赫氏定量法、磺基柳酸比浊定量法。24小时尿蛋白定量在0.15～0.5克之间为微量蛋白尿，在0.5～1克之间为轻度蛋白尿，在1～4克之间为中度蛋白尿，大于4克(有学者定为3.5克)为重度蛋白尿。 蛋白尿检测方法有什么?尿蛋白电泳分析：常用的方法有醋酸纤维薄膜电泳、聚丙烯酰胺凝胶电泳、尿蛋白免疫电泳等方法。该方法主要从确定尿中蛋白质的种类出发，通过区分不同尿蛋白的种类，对某些疑难病症如多发性骨髓瘤、重链病等有诊断和鉴别诊断的意义。同时可以区别尿蛋白的分子量大小，这对区别蛋白尿的来源，以及检查尿中是否有特殊蛋白质具有重要的意义。 第一部分 尿微量白蛋白（U-Albumin）的临床意义 1982年Viberti等发现了糖尿病患者尿中总蛋白在正常范围，而尿白蛋白排泄增加的现象，首先提出了尿微量白蛋白的观点，并指出了这种蛋白的出现是肾病发生的早期预兆。 随着检测技术的进步，目前主要用于对糖尿病、高血压患者早期检测发现微量蛋白尿，以便及时采取保护肾功能的措施，如限制蛋白的摄入量、禁烟、及时控制血糖和血压。 因此及时检测尿微量白蛋白，对控制和防止早期肾病的发生极为重要。 1、微量白蛋白尿的基本概念 多种疾病可引起尿白蛋白排泄率持续增加，尿中用常规方法不能检测到，叫微量白蛋白。其含量在20－200mg/L，此时如能及时治疗，肾脏损害处在尚可逆转的时期，这种常并发于糖尿病，高血压病人中的尿蛋白，称微量白蛋白。 2、尿正常代谢及尿蛋白的形成 尿是在肾脏内形成的。体内血流经肾小球毛细管时，其中的细胞、大分子蛋白质和脂类等胶体被截留，其余成份则经半透膜滤过进入肾小球中此称为原尿。原尿通过肾小管时，绝大部分水分及电介质和葡萄糖等物质又被吸收回血，同时肾小管也分泌一些物质加入尿中，最后生成终尿。经输尿管、膀胱、尿道排出体外。 病理情况下，由于肾小球内压力增高滤过增加或是基底膜改变，导致高滤过率而出现蛋白尿。 3、微量白蛋白正常值： 健康成年人尿微量白蛋白参考区间 24h尿：＜30mg/L（24h最高量） (摘自卫生部医政司“全国临床检验操作规程”2006,第三版p356) 与定性法比较有下列优点： *敏感性高，可测出定性法阴性的标本 *精密度CV5－8％ *定量结果测定范围广5－200mg/L *标本量少，20ul尿液 *特异性强能抗尿中多种物质的干扰 *测量时间快，3分钟报告结果 4、尿微量白蛋白测定的临床意义 (1) 、对高血压病的应用价值 如对您有帮助，可购买打赏，谢谢 生活常识分享尿检微白蛋白是什么意思呢 导语：随着现代社会实体经济日益俱下，很多白领人士为了保住自己的饭碗，所以他们经常都会养成憋尿的习惯，从而才能挪出更多的时间来进行工作。可 随着现代社会实体经济日益俱下，很多白领人士为了保住自己的饭碗，所以他们经常都会养成憋尿的习惯，从而才能挪出更多的时间来进行工作。可这些不良的生活习惯却容易导致他们出现一些肾脏疾病，因此很多朋友都会进行尿检微白蛋白，那么尿检微白蛋白是什么意思呢？接下来的时间就请朋友们和我一起去讨论一下。 尿微量白蛋白英文缩写：mAlb。量白蛋白尿是指在尿中出现微量白蛋白。微量白蛋白尿是指在尿中出现微量白蛋白。白蛋白是一种血液中的正常蛋白质，但在生理条件下尿液中仅出现极少量白蛋白。白蛋白是一种血液中的正常蛋白质，但在生理条件下尿液中仅出现极少量白蛋白。微量白蛋白尿反映肾脏异常渗漏蛋白质。尿微量白蛋白的增高多见于糖尿病肾病、高血压、妊娠子痫前期，是肾损伤的早期敏感指标。尿微量白蛋白，是糖尿病肾病、高血压肾病等的早期肾脏受损的表征。尿微量白蛋白正常值的参考值为0.49～2.05mg/mmol·Cr或4.28—18.14mg/g·Cr。 微量白蛋白尿是指在尿中出现微量白蛋白。白蛋白是一种血液中的正常蛋白质，但在生理条件下尿液中仅出现极少量白蛋白。微量白蛋白尿反映肾脏异常渗漏蛋白质。尿微量白蛋白的增高多见于糖尿病肾病、高血压、妊娠子痫前期，是肾损伤的早期敏感指标。尿微量白蛋白正常值的参考值为0.49～2.05mg/mmol·Cr或4.28—18.14mg/g·Cr。尿微量白蛋白是评估肾脏受损程度：当发现尿微量白蛋白在20mg/L-200mg/L范围内，尿常规尿蛋白的显示为阴性(-)或(+-)，就属于微量白 微量尿蛋白的实验室检测 什么是微量尿蛋白？ 肾脏具备强大的代偿功能，肾功能早期损伤往往没有症状和体征，患者就诊时已经到达肾功能不全，失去了最佳的治疗机会。 在早期损伤时尿蛋白已有微量的增加，但还不能用常规方法检测出，此时称为微量尿蛋白，是肾病早期损伤的最敏感变化。 目前用于实验室检测的微量尿蛋白有哪些？ 理论上讲，血浆蛋白均可在病理条件下出现于尿液中，但与肾脏结构和功能受损较为密切的微量尿蛋白系列约有20多种。由于肾单位受损部位不同，临床最常用的，最具标志性的尿微量蛋白系列有以下四种 中文名称英文名称缩写应用意义 1.尿微量白蛋白Mircroalbumin MA 肾小球滤过膜电荷屏障受损的传统标志蛋白 2.尿转铁蛋白Urine Transferrin TRU 肾小球滤过膜电荷屏障受损的敏感标志蛋白 3.尿免疫球蛋白Urine Immunoglobulin G IGU 肾小球滤过膜分子筛屏障受损的标志蛋白 4.尿α1-微球蛋白α1-Microglobulin A1M 肾小管量吸收功能受损的标志蛋白 MA TRU IGU A1M 病理变化有关提示 —/↑↑——肾小球滤过电荷屏障受 损如如糖尿病肾病，急慢性肾小球肾炎，炎症，代谢异常，免疫损伤等所引起的滤过膜上负电荷减少，静电排斥力下降，蛋白滤出增多 —/↑—/↑↑—肾小球滤过筛网屏障轻 度受损1.如高血压肾病是肾血流量增多与压力升高使肾小球内滤过压超过滤过膜阻力，蛋白滤除增多 2.如急性肾小球肾炎，微小病变肾病，狼疮肾，系膜病肾炎和小球节性硬化等引起的滤过膜通透性增高，蛋白滤出增多 ↑↑↑↑↑↑—肾小球滤过筛网屏障严 重受损如感染，肾中毒，血管病变和免疫损伤均可导致滤过膜孔径增到活闭锁，基膜断裂，蛋白滤出增多 ———↑↑肾小管重吸收功能受损如肾缺血，肾间质肾炎，重金属中毒和药物损 伤引起的肾小管上皮细胞损伤，蛋白重吸收减 少，蛋白增多 ↑↑↑↑↑↑↑↑复合损伤如多种原因引起的肾小球和肾小管同时受损除了这四项，尚有以下一些项目作为补充：(β2-mG,CysC,RBP,FDP) 另外，ACR（urine Albumin Creatinine Ratio 尿白蛋白肌酐比值）被K／DOQI指南推荐 尿微量白蛋白MALB检测 1检验目的 指导本室工作人员规范操作本检测项目，确保检测结果的准确。 2 实验原理 将未稀释的样品加入含有抗人血清白蛋白特异性抗体的缓冲液变浊溶液吸光度值（340nm）与尿液样品中白蛋白浓度成正相关。 3 标本： 3.1 病人准备：留取24h尿液标本（加苯防腐）混匀后记录尿液总量取少量尿液离心；清晨中段尿。 3.2 类型：尿液 3.3 标本存放尿液的稳定性：20～25℃保存可稳定1天，2～8℃保存至少可稳定2天； -20℃保存可稳定6个。 3.4 标本运输常温条件下运输。 3.5 标本拒收标准细菌污染的标本。 4 实验材料 4.1 试剂：上海倍特生物科技有限公司Malb试剂盒 4.1.1 试剂组成 R1:TRIS /HCL缓冲液：20 mmol/l，pH 7.4；氯化钠：150 mmol/L；聚乙二醇6% R2:抗人白蛋白TRIS /HCL缓冲液：20 mmol/l，pH 7.4氯化钠：150 mmol/l 4.1.2 试剂准备：试剂为即用式。 4.1.3 试剂稳定性与贮存：2-8°C下保存期限：见试剂标签上的有效期。机上稳定期：90天。 4.1.4变质指示：当试剂有浊度时，表明有细菌污染则试剂不能使用。 4.2 校准品：使用试剂盒里校准品自动分析仪进行校准。 5 仪器 AU2700生化分析仪，罗氏P800生化分析仪, 西门子ADVIA-2400生化分析仪，东芝TBA-120生化分析仪 6 操作步骤 6.1 样品的准备：将标好号的样品离心后放到仪器规定的位置。 6.2 试剂的检测：仪器开机后，检查各种试剂的位置，体积等确认无误后方可进行测定。 6.3 项目基本参数：参见生化检验AU2700生化分析仪，罗氏P800生化分析仪, 西门子ADVIA-2400生化分析仪，东芝TBA-120生化分析仪项目测定参数。 6.4仪器操作步骤：参见生化检验AU2700生化分析仪，罗氏P800生化分析仪, 西门子ADVIA-2400生化分析仪，东芝TBA-120生化分析仪操作规程。 7 质量控制 在每一批标本中都应把非定值血清水平I与II质控做为未知标本进行分析，以2S为质控警告限，3S为失控限，绘制质控图，判断是否在控。 8 计算方法 以MALB校准品校准仪器后，在病人结果可报告范围内，仪器直接报告可靠的检测结果，以mg/L报告。 小鼠尿微量白蛋白(ALB）酶联免疫分析（ELISA） 试剂盒使用说明书 本试剂仅供研究使用目的：本试剂盒用于测定小鼠血清，血浆,相关液体样本尿微量白蛋白(ALB）含量。 实验原理： 本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中小鼠尿微量蛋白(ALB)水平。用纯化的小鼠尿微量蛋白(ALB)抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入尿微量蛋白(ALB)，再与HRP标记的ALB抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的尿微量蛋白(ALB)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD 值），通过标准曲线计算样品中小鼠尿微量蛋白(ALB)浓度。 试剂盒组成： 试剂盒组成48孔配置96孔配置保存 说明书1份1份 封板膜2片（48）2片（96） 密封袋1个1个 酶标包被板1×48 1×96 2-8℃保存 标准品：540μg/L 0.5ml×1瓶0.5ml×1瓶2-8℃保存标准品稀释液 1.5ml×1瓶 1.5ml×1瓶2-8℃保存酶标试剂 3 ml×1瓶 6 ml×1瓶2-8℃保存样品稀释液 3 ml×1瓶 6 ml×1瓶2-8℃保存显色剂A液 3 ml×1瓶 6 ml×1瓶2-8℃保存显色剂B液 3 ml×1瓶 6 ml×1瓶2-8℃保存终止液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存浓缩洗涤液（20ml×20倍）×1瓶（20ml×30倍）×1瓶2-8℃保存 样本处理及要求： 1. 血清：室温血液自然凝固10-20分钟，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上 清，保存过程中如出现沉淀，应再次离心。 2. 血浆：应根据标本的要求选择EDTA或柠檬酸钠作为抗凝剂，混合10-20分钟后，离心 20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应该再次离心。 3. 尿液：用无菌管收集，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程 中如有沉淀形成，应再次离心。胸腹水、脑脊液参照实行。 4. 细胞培养上清：检测分泌性的成份时，用无菌管收集。离心20分钟左右（2000-3000转/ 分）。仔细收集上清。检测细胞内的成份时，用PBS（PH7.2-7.4）稀释细胞悬液，细胞 尿液蛋白质定量测定方法及临床意义 【摘要】正常人尿液中含有微量的蛋白质,每天排出量在150mg 以下,其中以白蛋白占多数,随不同病种有一定量的球蛋白和其它蛋白。随着肾病科研工作的开展,以观察患者每天排出蛋白质的量以示病情的变化,因此尿液蛋白质定量在临床上有实际应用价值,已成为医院化验室常规的检验项目。 【关键词】尿液蛋白质检测 1丽春红-S法 尿液标本中的蛋白质与丽春红-S染料混匀后一起被三氯醋酸沉淀，将沉淀物溶解于碱性溶液中，此时溶液呈紫色，显色深度与蛋白质浓度成正比。 1.1试剂 三氯乙酸-丽春红-S试剂原液：称取丽春红-S1.0g，加入到1000ml300g／L三氯乙酸中溶解。 三氯乙酸-丽春红-S试剂应用液：将原液用蒸馏水按1：10稀释，放置室温稳定数月。 蛋白定性试剂。0.2mol／L氢氧化钠溶液。 蛋白标准曲线：把定值蛋白稀释成不同的浓度，按操作测定其吸光度，以吸光度为横坐标，以稀释后的蛋白浓度为纵坐标绘制标准曲线。 1.2操作先做尿蛋白定性试验，以适当稀释标本。在试管中加入100μl标本，再加入1ml三氯乙酸一丽春红-S应用液，混匀后以3000r ／min离心15分钟，吸去上清液，倒置于洁净滤纸上。在沉淀中加入0．2mol／L氢氧化钠溶液lml，用560nm波长测定其吸光度，查标准曲线的蛋白含量。 1.3参考值46.5±18．1mg／L 1.4注意事项：尿液如被稀释应乘以稀释倍数。尿中血红蛋白含量>5mg／L时影响结果。离心后上清必须全部弃去，若沉淀中夹带有丽春红-S影响比色结果。 2双缩脲比色法 以磷钨酸乙醇溶液沉淀尿中的蛋白质，在碱性介质中蛋白质与铜离子形成紫红色络合物，与标准液比色即可得出尿中蛋白质的含量。 2.1试剂 蛋白沉淀液：称取磷钨酸7.5g，加入30ml蒸馏水、95％乙醇385ml、浓盐酸25ml。 双缩脲液：(1)称取枸橼酸钠34．6g，无水碳酸钠20g，加入120ml 蒸馏水使其溶解；(2)称取硫酸铜3．46g，加入20ml蒸馏水使其溶解。将(1)、(2)混合，加入蒸馏水至200ml，备用。0．75mol／L氢氧化钠溶液。蛋白标准液(1．5g／L)：称取150mg结晶型冻干人血清白蛋白，加入100ml的3g／L苯甲酸溶液溶解。 2.2操作取5ml24小时混合尿液，2500～3000r／min离心5分钟，取上清备检。混匀放入56℃水浴15分钟，取出后离心，倾上清留沉淀。0．75mol／1 NaOH1．51．51．5 大豆蛋白是家禽日粮中最为重要的，也是质量最好的植物蛋白饲料，除蛋氨酸略缺乏外，其它各种氨基酸都接近理想平衡。如同其它蛋白质饲料一样，豆粕质量受各种营养素含量的影响，如能量、蛋白质、纤维素和氨基酸等，例如普通豆粕与去皮豆粕间在以上指标方面就有很大的差别（见表1）。去皮豆粕由于纤维素含量低而有较高的能量水平。但是蛋白质水平高的豆粕不一定保证低纤维和高能量水平，例如某些未去皮中国豆粕的蛋白质含量可高达48%甚至50%，而仍然含有6%至7%的纤维素。因此高蛋白水平豆粕的代谢能水平仍然可能因纤维素含量高而下降，尚未见到这些高蛋白质“高纤维素”豆粕的代谢能测定值。但一般可以估计：在去皮豆粕纤维素正常含量3.5%以上时，每增加1%纤维素使每公斤猪饲料的代谢能下降32至42大卡，而每公斤禽饲料则下降将近60大卡。另一方面，豆粕质量在很大程度上受加工方面问题的影响而使它的氨基酸含量和氨基酸消化率以致于能量受到影响。本文主要讨论由加工不足或加热过度所引起的豆粕质量变异以及对生产性能的影响，同时介绍目前可行的鉴定豆粕质量的方法—尿酶活性（pH变化值）与0.2%氢氧化钾蛋白溶解度，并加以评估。 一、生大豆——抗胰蛋白酶与尿酶 众所周知，豆粕必须经过适度热加工以破坏大豆中所含的数种抗营养物质。其中对畜禽影响最大者为抗胰蛋白酶（Tripsin Inhibitor），有幸的是这些抗营养因子在加热后都会遭到破坏。适度加热是豆粕加工的关键，因为加热不足或过度都会降低豆粕的营养价值。 抗胰蛋白酶是生大豆中的一种蛋白酶抑制物，它在消化道内能使胰蛋白酶和凝乳酶失活，从而降低蛋白质的消化率，并引起胰脏代偿性增大，由于胰酶富含硫氨基酸，因此，大量分泌消化酶可能加剧大豆蛋白含硫氨基酸的缺乏现象。抗胰蛋白酶的测定方法很耗时也很昂贵，因此需要寻找一种简易而快速的测定方法。 生大豆中含不等量尿酶（Urease）。尿酶本身无营养意义，但它与抗胰蛋白酶的含量接近，而且遇热变性失活的程度与抗胰蛋白酶相似（图1），因此可用尿酶活性作为豆粕加工适宜度的间接估测指标。 抗胰蛋白和尿酶（UA)活性不仅受到加热的温度影响，而且还受加热时间及水分含量的影响（图2，图3）。由图可见，在水分含量很低时，抗胰蛋白酶和尿酶活性的破坏程度不大。 一．蛋白质的起泡性测定方法 1.配制l0ml 1%蛋白分散液（pH 8. 05的0.05mo1/L Tris-HC1缓冲液），在室 温的条件下，利用高速分散机均质l min，快速转移到25m1的量筒中，，每30min记录一次泡沫体积。每个样品重复三次，取平均值。 2.采用搅打发泡测定法[29]：将蛋清蛋白溶于pH7.0的磷酸盐缓冲溶液中，配 成3%的蛋清蛋白溶液。取200ml3%的蛋清蛋白溶液，在A-88组织捣碎匀浆机中，以8000r/min的转速打泡3min,测其泡沫体积，记录为V0，按下式计算起泡度（FAI）： FAI(%)=(V0-200/200) ×100 静置30分钟后，测泡沫体积，记录为V1，按下式计算泡沫稳定性（FS）：FS(%)= (V1-200/200 )×100 3.参照Hammershoj 等介绍的方法[36]。首先将全蛋液稀释到5%（v/v），然后 取100mL的稀释液，10000r/min速度搅拌1min。记录均质停止时和停止后30min的泡沫体积与液体体积，起泡力与泡沫稳定性分别用OR与FS表示，计算公式如下： 起泡性（OR）=Vf0 /Vli 2-3 泡沫稳定性（FS）=Vf30/Vf0 2-4 式2-3 与2-4中：Vf0—零时刻时泡沫的体积（mL）；Vli—初始阶段的液体体积（100mL）；Vf30—静置 30min后的泡沫体积。 Hammershoj, M., Qvist, K. B. Importance of hen age and egg storage time for egg albumen foaming [J]. Lebensmittel-Wissenschaft-Technologie, 2001, 34: 118–120. 4. 二．乳化性及乳化稳定性的测定方法 用0.05 mol/L Tris-HCl缓冲液（pH 7.5）配制1%的蛋白样品，取1 mL色拉油与3 mL待测溶液于均质机中均质剪切1min，分别于0min和10min时从底部取50 μL用0.1% SDS 25 mL稀释后测OD500 乳化活性指数(EA I)=(2.303 × 2 × OD 500 )/(C × Φ ×L) 乳状液稳定指数(ES)=OD 500× Δt/ΔOD 500 式中： EAl ——每克蛋白质的乳化面积，m2/g； Φ——油相所占的分数，在本实验中油相占1/4； C——蛋白质的浓度，1%； L——比色池光径，10mm。氢氧化钾蛋白质溶解度的测定
尿蛋白定性检查
氢氧化钾蛋白质溶解度的测定
氢氧化钾蛋白质溶解度的测定
尿微量白蛋白的临床检测的注意事项(精)
24小时尿蛋白定量
实验三 蛋白质的两性反应和等电点的测定
尿微量白蛋白
蛋白尿检测方法有什么【健康小知识】
第二篇 ALB尿微量白蛋白检测
尿检微白蛋白是什么意思呢
微量尿蛋白的实验室检测
尿微量白蛋白MALB检测
小鼠尿微量白蛋白(ALB)说明书
尿液蛋白质定量测定方法及临床意义
豆粕蛋白溶解度和尿酶值
蛋白质的起泡性测定方法