小鼠腹腔巨噬细胞吞噬试验

小口(注意避开血管)，用1640灌注腹腔，收集腹腔液于 试管中(约4 ml)，1500 r/min，离心10 min，去上清， 沉积细胞用1640离洗一次。最后沉积细胞用含10％小 牛血清1640配成适当浓度备用(1-2×106／ml)。
（2）白色念珠菌制备 将白色念珠菌接种于沙氏平皿 培养基中，培养48小时，收集菌，用适量生理盐水 配成悬液，100℃，煮沸30 min灭活，离心去掉上清， 再用1％美兰染色30 min，用生理盐水洗涤二次，用 生理盐水配成1×108／ml菌悬液，4℃冰箱保存备用。
计数时，若细胞位于小方格的线上，应遵循“数上 线不数下线，数左线不数右线”的原则，以减少误差。 计数应重复3次，取其平均值。
数完毕后，依下式计算： 每1mL白细胞悬液细胞数＝（4个中方格细胞总数 /4） ×104× 稀释倍数
每1mL红细胞悬液细胞数＝（80个小方格细胞总数 /80） ×400×104× 稀释倍数
材料
1．小白鼠 2．白色念珠菌液（美兰染液着色） 3．6％可溶性淀粉肉汤 肉汤培养液100 m1，加入可溶性淀粉6g，混匀后煮 沸灭菌 4．小鼠解剖器械、显微镜、离心机、温箱等 5．试管、吸管、微量加样器、计数板
方法
(1)、小鼠巨噬细胞制备 实验前三天每只小鼠腹腔注射1％可溶性淀粉1ml。
实验时眼球放血、断椎处死小鼠，新洁尔灭浸泡5分钟。 剪开腹部皮肤，暴露腹膜，用镊子夹起腹膜剪开一
小鼠腹腔巨噬细胞 吞噬试验
武汉大学基础医学院 免疫学教研室 熊洁
原 理（体来自百度文库法）
巨噬细胞具有吞噬异物的功能，将巨噬细胞与被吞 噬物(鸡红细胞、白色念珠菌、白色葡萄球菌等)共同温 育，染色，在油镜下计数吞噬异物的巨噬细胞的吞噬百 分率和吞噬指数，以此判断巨噬细胞的吞噬功能，从而 评价机体的免疫状态。 本实验拟检测小鼠腹腔巨噬细胞对白色念珠菌的吞噬功 能。
四角的大方格，又分为16个中方格，适用于白细 胞计数。中央大方格以双线等分为25个中方格。每个 中方格又分16个小方格，通常我们取四角的4个中方格 和中间的1个中方格来计数红细胞。
首先用吸管吸取少许稀释后的单细胞悬液，从盖片 端滴一小滴（不宜过多），液体自行向内渗入，静置数 分钟后，再放在微镜下观察计数。
3、滴片时加入的细胞数依细胞的大小而定，如果使用的 吞噬细胞是细胞系，细胞体积较大，那么加入的细胞 数就相应的少一点。
血球计数板计数法
血球计数板是由一块厚玻片特制而成，其中央有 两个计数室。每个计数室划分出9个大方格（见下图）， 每格面积1mm2，加盖玻片后的深度为0.1mm。因此， 每大方格容积为0.1mm3。
**(吞噬指数式中巨噬细胞为阳性吞噬细胞)
注意事项
1、菌与细胞混合后充分混匀非常重要。对于此实验，菌 与吞噬细胞之比10：1时吞噬作用容易观察和计数。但 是吞噬效果好，能真正反映实际情况又可被检测的比 例为1：1。
2、菌和细胞在摇床中作用的时间不超过30 min，如果在 37C 条件下作用时间过长，被吞噬的菌很快会被裂解， 也就不能计数为吞噬了菌的细胞。
（3）吞噬细胞与菌混合培养 取巨噬细胞0.5ml加白色念珠菌悬液0.5ml，置37℃
温育30min。
取1滴混合液置玻片上加盖玻片，在高倍镜下观察 计数。
高倍镜下观察计算： 吞噬率％=(吞噬白色念珠菌的巨噬细胞数/100个巨噬
细胞)×100％
吞噬指数％=100个巨噬细胞中吞噬白色念珠菌总数 /100个巨噬细胞