培养基配制及其灭菌消毒

专业：环境科

学

班级：1101 姓名：

学号： 日

期

：

2013.10.25

地点：

农生环组团B247

课程名称：环境微生物学实验 指导老师： 梁璐怡 成绩： 实验名称：真菌形态和结构观察 同组同学：

一、实验目的 二、实验原理 三、实验材料与仪器 四、实验步骤 五、实验结果（显微镜下微生物微生物形态图） 六、分析讨论 七．思考题

一、实验目的

1.了解微生物培养基的种类及其配制原理。

2.掌握微生物培养基的配制程序。

3.学习和掌握牛肉膏蛋白胨培养基、马铃薯蔗糖琼脂培养基和淀粉琼脂培养基（又称高氏一号培养基）的配制方法。

4.了解几种灭菌方法，掌握干热灭菌法和加压蒸汽灭菌法的原理及其操作方法。

5.掌握微生物常用器皿的包扎方法。

6.掌握无菌水的制备方法。

二、实验原理

1.培养基：

（1）培养基是人工配制的适合于不同微生物生长、繁殖或累积代谢产物的营养物质。对培养基的基本要求是：提供微生物正常生活所需飞各种养料（如碳源、氮源、无机盐类、生长因子等）并保持养料之间的平衡；具有适宜的pH 值；具有合适的渗透压；保持无菌状态。 （2）培养基的主要成分：

告

①水分：水分约占微生物细胞的70%～90%，具有重要的生理功能。配制培养基可以用天然水和蒸馏水。

②碳源：碳源是微生物的重要营养物质，用于合成细胞物质和提供生命活动所需的能量。配制培养基所用的碳源很多，其中主要为葡萄糖，其他还有糖类、蛋白质、脂肪、有机酸、醇类、烃类等。

③氮源：氮源是组成细胞蛋白质的主要成分。除了某些固氮细菌能利用分子态氮外，其他微生物都需要化合态氮作为养料。培养基采用的无机氮有铵盐和硝酸盐；常用的有机氮有蛋白胨、牛肉膏、酵母膏、豆芽汁、氨基酸等。

④矿物质：许多矿物质或是酶的成分，或是生理调节剂。

⑤生长因子：一些微生物的生长需要外加生长因子，在配制培养基的工程中，一般通过添加蛋白胨、酵母膏、牛肉膏等天然材料及其制品来满足。

（3）选择和设计培养基的原则：

①以工农业生产中废弃物作为培养微生物的原料：蜜糖、乳清、豆制品工业废液、黑废液等。

②工业上甲烷发酵一注意利用废水废渣作原料。在我国农村，以推广利用粪便及禾草为原料发酵生产甲烷为原料。

（4）培养基的种类：

①根据培养基的组成成分，培养基可分为天然培养基、合成培养基。

②根据培养基的物理状态，培养基可分为液体培养基、固体培养基、半固体培养基。

③根据实验目的和用途，培养基可分为基础培养基、加富培养基、选择培养基、鉴别培养基。

（5）培养基的凝固剂：

①常用的凝固剂：琼脂、明胶、硅胶。

②凝固剂必须具有以下条件：不被微生物液化、分解和利用；在微生物生长的温度范围内保持固体状态；凝固点的温度对微生物无害；不因消毒灭菌的高温处理而破坏；透明度好、黏着力强；配制方便、价格低廉。

2.培养基的配制：

①牛肉膏蛋白胨培养基是一种广泛用于细菌的培养基，主要成分是牛肉膏、蛋白胨和氯化钠。它们主要提供细菌生长繁殖所需的碳源、氮源、能源、无机盐和生长因子等。

②高氏一号培养基是一种广泛用于放线菌的合成培养基，以可溶性淀粉作为碳源和能源，硝酸钾作为氮源，磷酸氢二钾、硫酸镁、硫酸亚铁作为无机盐。

③马铃薯蔗糖培养基是一种广泛用于霉菌的培养基，在配制过程中，不经pH调节而呈自然状态。

3.灭菌和消毒：

①灭菌：灭菌是指杀死或除去特定环境中的所有微生物（包括芽孢和孢子）的过程。对于不同物品或不同成分和性质的培养基，应当采用不同的灭菌方法。

②消毒：消毒是指杀死或者除去特定环境中可能引起感染或产生其他不良影响的微生物的过程。消毒的效果取决于细菌的种类和数量，以及消毒方法和消毒剂杀菌能力等。

③灭菌和消毒的方法可分为四大类：加热灭菌、过滤除菌、射线灭菌和消毒、化学药剂灭菌和消毒。

三、实验材料与仪器

1.药品和试剂：琼脂，牛肉膏，蛋白胨马铃薯，蔗糖，可溶性淀粉，氯化钠，K2HPO4、KNO3，MgSO4·7H2O，FeSO4·7H2O，1mol/L的HCl和1mol/L的NaOH等。

2.仪器：天平，电磁炉，高压蒸汽灭菌锅，电热烘箱。

3.玻璃器皿：培养皿，带有硅胶塞的无菌试管，带铝盖的试管，移液管，装有玻璃珠的三角瓶，涂布棒，烧杯，量筒，锥形瓶，试管，吸管，玻璃漏斗，玻璃棒、三角玻棒等。

4.其他物品：刻度搪瓷杯，药匙，称量纸，pH精密试纸，纱布，线绳，牛皮纸，报纸，棉花，标签等。

四、实验步骤

1.培养基的配制：

（1）细菌培养基——牛肉膏蛋白胨培养基

①材料用量的计算：

根据配方以及所需配制培养基的数量，称取或量取所需的材料。在本实验中，先将配方中的各种材料配成浓缩液：10%牛肉膏、10%蛋白胨、10%氯化钠、。如果需要配制300mL培养基，则吸取10%牛肉膏15mL，10%蛋白胨30mL，10%氯化钠15mL，称取琼脂6g。

②配制：

将吸取的材料加入有刻度的搪瓷杯，用自来水补足到300mL，并记下刻度。

③调节pH：

按照要求，将pH调至7.2～7.4。用玻璃棒蘸取少量培养液至pH试纸上，与比色卡对照得出pH 值。根据偏差大小，分别滴入浓度为1mol/L的HCl或1mol/L的NaOH进行调节，并不断用pH试纸检测pH值，直至达到预期的pH值。

④加入琼脂：

在液体培养基中加入称好的琼脂6g，加热至沸腾，期间不断用玻璃棒搅拌，以以防糊底，直至琼脂完全熔化（用玻璃棒挑起培养液时不再有面条状的琼脂可视为琼脂已经完全熔化）。最后补足蒸发损失的水分。

⑤分装培养基：

培养基的分装应当趁热在漏斗架上完成。在带有硅胶塞的无菌试管中，每支分装5mL，共10支，用于制作斜面。带有铝盖的试管各分装15mL，共10支，用于制作平板。

⑥包扎成梱：

以10支为一捆，用防水纸包扎成梱，挂上标签，灭菌备用。

（2）放线菌培养基——淀粉琼脂培养基