茶叶生化成分分析方法

茶叶生化成分分析方法

1、茶汤制备

称取经粉碎过60目筛的样品1.0克，放入250mL锥形瓶中，加入90mL沸水，然后将其置于沸水浴中浸提45min，每10min振荡一次。浸提完毕后，趁热过滤后，待茶汤冷却至室温后定容至100mL，备用。

2、茶多酚含量测定（酒石酸铁比色法）

2.1仪器

2.1.1分析天平：感量0.0001g。

2.1.2分光光度仪。

2.2试剂

1）酒石酸亚铁溶液

称取1.0g硫酸亚铁（FeSO4.7H2O）和5.0g酒石酸钾钠（C14H4O6KNa.4H2O），用水溶解并定容至1L（低温保存有效期10天）。

2）pH7.5磷酸盐缓冲液：

①1/15mol/L磷酸氢二钠：称取23.9g十二水磷酸氢二钠（Na2HPO4.12H2O），加水溶解定容至1L。

②1/15mol/L磷酸二氢钾：称取经110℃烘干2h的磷酸二氢钾（KH2PO4）9.08g，加水溶解定容至1L。

取上述1/15mol/L磷酸氢二钠溶液85mL和1/15mol/L磷酸二氢钾溶液15mL混合均匀。

2.2测定步骤

准确吸取1.0mL茶汤，注入25mL容量瓶中，加入4.0mL蒸馏水、5.0mL酒石酸亚铁溶液，充分混合，再加pH7.5磷酸盐缓冲液至刻度。用10mm比色杯，在波长540nm 处，以试剂空白溶液作参比，测定吸光度。

3、游离氨基酸总量测定（茚三酮比色法）

3.1仪器

3.1.1分析天平：感量0.0001g。

3.1.2分光光度仪。

3.2试剂

1）2%茚三酮溶液

称取水合茚三酮（纯度不低于99%）2g，加50mL水和80mg氯化亚锡（分析纯），

搅拌均匀。分次加少量水溶解，放在暗处，静置1昼夜，过滤后加水定容至100mL。

2）pH8.0磷酸盐缓冲液

①1/15mol/L磷酸氢二钠：称取23.9g十二水磷酸氢二钠（Na2HPO4.12H2O），加水溶解定容至1L。

②1/15mol/L磷酸二氢钾：称取经110℃烘干2h的磷酸二氢钾（KH2PO4）9.08g，加水溶解定容至1L。

取上述1/15mol/L磷酸氢二钠溶液95mL和1/15mol/L磷酸二氢钾溶液5mL混合均匀。

3.2测定步骤

准确吸取1.0mL茶汤，注入25mL容量瓶中，加入0.5mL的2%茚三酮溶液和0.5mL 的pH8.0磷酸缓冲液，摇匀，然后置于沸浴中加热15min，取出，冷却至室温后用蒸馏水定容至刻度，放置10min后，用10mm比色杯在波长570nm处，以试剂空白溶液作参比，测定吸光度。

3.3氨基酸标准曲线制作：

3.3.1谷氨酸标准液配制

称取100mg谷氨酸（纯度不低于99%）溶于100mL水中，作为母液。准确吸取5mL 母液，加水定容至50mL作为工作液（1mL含谷氨酸0.1mg）。

3.3.2氨基酸标准曲线制作

分别吸取0、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0mL氨基酸工作液于一组25mL容量瓶中，各加水4mL、茚三酮溶液0.5mL和缓冲液2mL，在沸水浴中加热15min，冷却后加水定容至刻度，然后在570nm波长下，用10mm玻璃比色皿测定吸光度。将测得的吸光度与对应的谷氨酸浓度绘制标准曲线。

4、咖啡碱含量测定（紫外分光光度法）

4.1仪器

4.1.1分析天平：感量0.0001g。

4.1.2紫外分光光度仪。

4.1试剂（除另有规定外，均为分析纯）

1）碱式醋酸铅溶液

称取50g碱式醋酸铅（HG3-1396-81），加水100mL，静置过夜，倾出上清液过滤备用。

2）9N硫酸溶液：取硫酸250mL，用水稀释至1L，摇匀。

3）0.01N盐酸溶液：取0.9mL盐酸，用水稀释至1L，摇匀。

4.2测定步骤

准确吸取8.0mL茶汤，注入100mL容量瓶，加入4.0mL0.01N盐酸溶液和0.8mL碱式醋酸铅溶液，用水准确稀释至刻度，充分混匀，静置澄清过滤。吸取滤液50mL，注入100mL容量瓶，加入0.2mL9N硫酸溶液，加水稀释至刻度，混匀，静置澄清过滤。用10mm 比色杯，在波长274nm处，以试剂空白溶液作参比，测定吸光度。

4.3咖啡碱标准曲线制作

4.3.1咖啡碱标准液配制

称取100mg咖啡碱（纯度不低于99%）溶于100mL蒸馏水中，作为母液，准确吸取5mL母液加水至100mL稀释混匀，作为工作液（1mL含咖啡碱0.05mg）。

4.3.2咖啡碱标准曲线的制作

分别吸取0、5、10、15、20、25、30mL咖啡碱工作液于一组100mL容量瓶中，各加入4.0mL盐酸溶液，用水稀释至刻度，混匀，用10mm石英比色皿，在波长274nm处，以试剂空白人溶液作参比，测定吸光度。

5、水浸出物含量测定

取100mL的蒸发皿，置于烘箱中在105℃下恒温烘1h，取出后置于干燥器中，待冷却至室温时称重。吸取50mL茶汤入蒸发皿，置于水浴锅上蒸干，然后将蒸发皿置于烘箱中120℃下烘2h，取出，置于干燥器中冷却至室温后称重。

6、茶黄素、茶红素、茶褐素含量测定（系统分析法）

6.1试剂和主要仪器

1、正丁醇、乙酸乙酯、95%乙醇

2、2.5%碳酸氢钠溶液

称取碳酸氢钠2.5g，加水稀释至100mL。现用现配。3、饱和草酸溶液：20℃时，100mL 水中可溶解10.2g草酸，根据气温配制。

4、分光光度计、水浴锅、筒形分液漏斗、容量瓶。

6.2测定步骤

6.2.1试液制备

准确称取磨碎茶样3g，置于250ml锥形瓶中，加沸水125mL，于沸水浴中提取10min，提取过程中，振荡1-2次，提取完毕后立即用脱脂棉过滤，迅速冷却。

6.2.2分离