方法学评价

七、注意事项
1．对比方法的选择十分重要，一般应选参考方法， 这样方法间的任何分析误差均可归于被评价的候 选方法。在整个实验中，保持候选方法和比较方 法都处于完全质量控制下，始终对实验结果有校 准措施。 2．实验时间至少做5天，时间长一些更好；标本至 少选择40份病人，多一份更好。实验的可靠性和 有效性随时间延长和更多的标本量而增加。尽可 能使50%的实验标本内分析物含量不在参考区间 内，各个标本内分析物含量分布越宽越好。
4、GOD-POD法按下表操作
加入物（ml） DDW 5.55mmol/糖标 B 0.01 — S — 0.01 测定管1 — 测定管2 —
血清
酶酚试剂
—
1.5
—
1.5
0.01
1.5
0.01
1.5
混匀，置水浴箱37℃，15分钟，505nm空白管调零， 722型分光光度计分别测各管A值。
5、邻甲苯胺法按下表操作
三用水浴箱
722型可见光分光光度计
四、试剂
1．血清标本 四种含血糖浓度不同的血清：2.2mmol/L、 6.7mmol/L、5.2mmol/L、3.7mmol/L.
2．葡萄糖标准液（5.55mmol/L）
3．GOD-POD法测定葡萄糖试剂盒
4. 邻甲苯胺试剂
五、操作步骤
1．每人随机选择血糖含量高低不同的病人血 清标本2份。 2．将每份标本分别用两种方法各测定2次。将 标本按某次序排列先测一次，第2次测定时， 标本顺序全部倒过来。例如，第1次序号为1、 2、3、4、5、6、7、8，第2份序号为8、7、6、 5、4、3、2、1。 3．计算出两法各自的测定结果。
【参考范围】 空腹：3.89～6.11mmol/L；餐后2h：＜7.8mmol/L。
数据处理 1．设对比方法测定结果为X值，候选方法测定结果为Y值。 若有n个标本，则有2n对X和Y的测定结果。 2．离群点检查：先计算每一标本每一方法成对结果的差值 和差值的均值。以4倍的各方法差值的均值为判断限，各方 法内标本的成对差值都应在限值内，说明双份测定结果符合 要求。
趋势，则需要观察是否有部分呈线性关系，寻找修正点，
使余下的部分具线性趋势。但应考虑这部分是否包括了临 床上有用的范围，是否需再多做一些在此范围的标本结果。
如去掉非线性部分后，范围过小，无应用价值，则停止评
价。
5．X、Y配对值离群点检查：将每一个标本两个方法的前 后两个测定值一一对应，求出第i个X与第i个Y的差值，并 计算出所有标本总的平均差值，以4倍的平均差值为判断限 值。所有差值都不应超出限值。若有离群点，按步骤2中的 方法处理。 6．统计学处理及误差分析 直线回归分析：对上述n个标本，2n对（Xij、Yij）数 据以回归方程式y＝a+bx表示。a为回归直线在Y轴上的截 距，代表恒定误差的大小；b为回归系数，即直线的斜率， 代表比例误差的大小。
XY ( X )( Y ) / n [ X
2
( X )
2
/ n ][ Y
2
( Y )
2
/ n]
求出的相关系数还应作相关系数的t检验。相关系数(r) 的t检验统计学公式是：
tr r n 2 1 r
2
将方法比较试验的原始数据 (x和y值) 求得的相关系数 r及例数(n)代入t检验的统计学公式，即可求出相应的tr 值，再按照n-2的方法计算出自由度(v)，查t值表求得 t0.05(v)及t0.01(v)相应的t值，若tr＞t0.05(v)，P＜0.05，说 明实测的相关系数(r)与0之间差异显著，两种测定方法 的测定结果之间存在相关关系；若tr＞t0.01(v)，P＜0.01 说明实测相关系数(r)与0之间有非常显著的差异，两种 方法的测定值之间存在着高度相关关系。
a和b的计算公式分别为：
a
b
Y n
2
b
X n
2
Y bX
XY ( X )( Y ) / n X ( X ) /n
如果两方法表示的某分析物量具相同的计量单位时，理 想状态的回归式应为y＝x，即b=1，a=0。b≠1，a≠0分别 表示两方法间的测定标本时的比列误差和恒定误差。 相关性分析： 相关系数r=
评价报告中除了要叙述操作方法(包括试剂配制 和所用实验器材)以外，应着重写明候选方法的各项 分析性能指标，要特别重视实验数据的科学整理和客 观陈述。实事求是，对候选方法的优点要充分肯定， 对其缺点和存在的问题也要如实指出。
九、可接受性判断
评价实验完成以后，应写出书面报告，确定 方法评价的结论。候选方法可否被接受，最后根 据评价实验中的误差结果进行归纳，作出判断。 根据“可允许误差的95%限度”，计算各项误差 与其比较，任何一项指标大于可允许误差都不能 被接受。
只有在假设所有实验结果是绝对正确的前提下， 才能进行上述计算。为了在适当的样品数下，能以最 小的代价取得实验误差测定的最大可靠性，可用可信 区间判断指标。使用可信区间判断指比较复杂，但能 对方法性能提供更客观的决定，起最后判断作用。
实验七：方法比较实验
一、实验目的
1．掌握方法学比较实验的原理和方法。
2．掌握邻甲苯胺法测定血糖的原理和方法。
二、实验原理
方法比较试验是将候选方法与对比方法进行
比较，以评价候选方法的准确度，以决定候选方 法是否可被采用。本实验选择血糖测定的化学方 法邻甲苯胺法作为对比方法来评价GOD-POD法 测定血糖的总系统误差。
邻甲苯胺法测定血糖原理
在热的醋酸溶液中，葡萄糖醛基与邻甲苯胺(OT)缩合成糖基胺，经脱水，生成希夫碱（Schiff base），经分子重排生成蓝绿色化合物，在630nm 波长处有一吸收峰，吸光度大小在一定范围内与血 糖浓度成正比。
邻甲苯胺+葡萄糖
缩合
葡萄糖基胺 水
脱
希夫碱
蓝绿色化合物
三、器材
微量移液器 计算器 京都快速血糖仪
加入物（ml） DDW 5.55mmol/糖标 B 0.05 — S — 0.05 测定管1 — 测定管2 —
血清
邻甲苯胺试剂
—
1.5
—
1.5
0.05
1.5
0.05
1.5
混匀，置沸水中煮沸5min，取出，冷水中冷却3min， 在630nm波长处比色，以空白管调零，读取各管吸光度。
六、结果计算
血清葡萄糖（ mmol / L ） 测定管吸光度 标准管吸光度 5
3．最好使用当天采集的标本，若需保存标本，应确 保它们的稳定性。只使用一种保存条件，能符合 两个方法的要求，以免条件不一引出新的变异。
4．方法学比较试验时，随时将实验数据点在分布图， 发现异常值即复做，及时纠正，可减少离群值出 现的机会。
八、方法学评价
对比资料的相关系(r)常用来表示两个变量间互相 关系密切的程度，并不能指明有无恒定误差和比例误 差。直线回归统计时，除了所有实验点和回归线间的 离散度会影响r值的大小外，实验点对应的分析物含 量分布宽度也会明显影响r值的大小。若实验点过于 密集，尽管离散度不大，但r值偏小。因此，可用r检 验X取值范围是否适当。一般要求r≥0.975 （或 r2≥0.95），认为X范围是适合的。若r＜0.975，应收 集更多标本再继续实验，使数据分布范围增大。依据 r值大小来判断两种比较方法分析结果符合程度时应 持谨慎态度，相关系数好，但斜率和截距仍然受离群 值和非线性以及数据分布范围的影响。
7．方法比较试验的数据属于配对资料，因而可作 配对资料的t检验。
差值标准差 (Sd) ＝
t sd
(d dHale Waihona Puke Baidu) n 1
2

d
2
( d ) n 1
2
/n
d n
自由度(V)＝n-1 差值标准差中的d代表候选方法与参考方法测定值 的差值，为差值之平均值，n为配对数。 判断：若求得t值＞t0.05(v)，即P＜0.05，表示候选 方法存在显著的系统误差。
若有1点离群点，剔除。若原数据仅为40例病人标本的结 果，剔除的数据应另做实验补上。有一点以上离群点，需查 原因，判断是否保留数据。无法找出原因，则保留使用所有 数据，不能随意剔除。若最大差异超过临床允许误差，应从 仪器、试剂、方法上寻找原因，停止继续实验。
3．绘制散点图：以X轴代表对比方法的测定值，Y轴代表被 评价方法的测定值，图中标出斜率为1通过零点的直线。 4．如果实验结果线性关系良好，继续处理。如果呈非线性