基因沉默原理
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百奥迈科（Biomics）RNAi 产品与服务一览
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1. siRNA 生物合成 1.1 全位点 siRNA 表达文库构建服务
本公司拥有自主知识产权的全位点 siRNA 文库构建技术，能够从全长 cDNA 构建包含所 有有效结合位点，长度分布于 19 - 23bp 的靶基因的 siRNA 分子库，亦可以模仿体内 Dicer 酶 切割长度为 21 - 23bp 的分子库，适用于高通量功能基因及相关药物靶点筛选。
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RNAi 及基因沉默原理 百奥迈科（Biomics）RNAi 产品与服务一览 1.siRNA 生物合成
1.1 全位点 siRNA 表达文库构建服务 1.2 RNAi 载体构建技术服务 1.3 Gene TargetTM siRNA Set 2.siRNA 化学合成 2.1 化学合成 siRNA 简介 2.2 siRNA 设计 2.3 百奥迈科(Biomics) siRNA 产品简介 2.4 普通 siRNA oligo 2.5 荧光标记 siRNA oligo 2.6 化学修饰 siRNA oligo 2.7 miRNA 的化学合成 2.8 RNAi 系列优惠套餐 2.9 siRNA 对照 3.RNAi 病毒包装 3.1 腺病毒载体包装 3.2 慢病毒载体包装 3.3 其他类型病毒载体包装 4.哺乳动物细胞 siRNA 转染 4.1 转染方法 4.2 转染步骤 4.3 转染优化及注意事项 5.mRNA 水平检测基因沉默 5.1 mRNA 的提取/制备 5.2. 实时定量荧光 PCR 6 蛋白质水平检测基因沉默 6.1 Western blot 6.2 ELISA 6.3 免疫荧光 7.其他相关服务 7.1 稳定细胞筛选服务 7.2 细胞增殖毒性检测服务 7.3 细胞凋亡检测服务 7.4 DNA 测序 8.RNAi 相关产品 8.1 RISOTM RNA 抽提试剂 8.2 其他
2）合成设计好的 DNA 并退火形成双链 DNA，克隆到客户要求的载体上。 3）通过测序进行验证。 4）构建成功的 siRNA 质粒连同测序报告、产品说明书一起寄送到客户手中。
注：可根据客户要求提供 siRNA 的阳性及阴性对照质粒。 1.2.3 质量保证：
符合设计要求的 siRNA 序列测序结果。
的多克隆位点序列，提高沉默的特异性。 z siRNA 表达框（U6－siRNA－H1）可以整体亚克隆到逆转录病毒载体 (Retrovirus)、腺
病毒载体（Adenovirus）、慢病毒载体（Lentivirus），具有较好的适用性。 z siRNA 没有二级结构(如发夹型结构)，在上述病毒载体中较稳定。 z 构建的质粒载体转染到细胞内，在细胞内转录出双链 RNA，在细胞内具有中长期表达的
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RNAi 及基因沉默原理 RNA 干扰(RNAinterference，RNAi)是由双链 RNA (double-strandedRNA，dsRNA) 引发的
转录后基因静默机制。其原理是：RNaseIII 核酶家族的 Dicer，与双链 RNA 结合，将其剪切 成 21 - 25nt 及 3'端突出的小干扰 RNA (small interfering RNA，siRNA)，随后 siRNA 与 RNA 诱导沉默复合物 (RNA - induced silencing complex，RISC) 结合，解旋成单链，活化的 RISC 受已成单链的 siRNA 引导，序列特异性地结合在靶 mRNA 上并将其切断，引发靶 mRNA 的 特异性分解，从而阻断相应基因表达的转录后基因沉默机制。
1.1.1 构建流程： 1）客户可选： z 提供靶基因的 cDNA 克隆。 z 提供靶基因的相关信息 (基因的 mRNA 序列或 Genbank Accession Number)。 z 也可在本公司的 cDNA 产品目录中，挑选靶基因 cDNA 克隆。 2）进行 siRNA 文库构建，抽样测序验证。 3）根据客户要求提供相应的文库产品。 4）将其连同抽样报告、产品说明书一起寄送到客户手中。 A. HBV Polymerase Domain siRNA 表达文库位点分布（随机抽样测序） Polymerase Domain (984bp):
3）本公司还可根据客户需要提供各种商业化表达载体; 4）本公司可以为客户构建线性 siRNA 表达载体，shRNA 表达载体，miRNA 表达载体以
及病毒型 RNAi 载体。 1.2.2 构建流程：
1）siRNA 靶点设计； z 客户提供靶基因的 siRNA 序列，由本公司将其克隆到 siRNA 表达载体上。 z 客户提供靶基因的相关信息（基因的 mRNA 序列或 Genbank Accession No.），根 据客户要求，本公司设计高效特异性的 3-4 条针对靶基因的 siRNA。
基于载体的 RNAi 实验示意图
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1.2.4 各种商业化表达载体:
产品编号 BV0011 BV0012 BV0013 BV0014 BV0015 BV0016 BV0107 BV0108
载体 pRNAi-U6H1/Neo pRNAi-H1.1/Neo pRNAi-U6.1/Neo pRNAi-CMV3.1/Neo pRNAi-CMV3.2/Neo pRNAi-CMV4.1/Neo pRNAi-U6.1/Lenti pRNAi-H1.1/Retro
B. 构建的 Survivin 基因全位点 siRNA 表达文库，文库抽样基因沉默(qPCR)筛选结果： 该数据显示，本公司 siRNA 文库位点分布的随机性，可以更好地找到最优的靶点。
s1-s8: Randomly selected siRNA sequences from Biomics library s9/s10/s11: The published siRNA sequences target-off: Negative control un-transfect: Untreated normal control
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Cat.No.
Kinase
K07002 K07003 K07004 K07005 K07007 K07008 K07009 K07012 K07016 K07021 K07026 K07027 K07029 K07030 K07033 K07035 K07041 K07046 K07054 K07055 K07056 K07057 K07059
启动子 U6 和 H1 H1 U6 CMV CMV CMV U6 H1
筛选基因 Neomycin Neomycin Neomycin Neomycin Neomycin Neomycin Neomycin Neomycin
标记基因 GFP GFP GFP GFP GFP GFP GFP
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1.3. Gene TargetTM siRNA Set Gene Target™ siRNA Set 是本公司的专利技术开发的基因沉默系列产品之一。产品由 4
特性，能够较长期的发挥基因沉默的作用。 z 由于质粒可以复制扩增，较化学合成方法显著降低制备 siRNA 的成本。 z 载体法的 siRNA 可测序保证 100%序列同源性，而化学合成的 siRNA 分子的序列鉴定较
困难。
表达载体 pU6H1-GFP 图谱 产品性状形态：本产品具有可靠的稳定性，以质粒 DNA 与滤纸小圆片共干燥封装，可在 常温下运输和储存。 Gene TargetTM siRNA Set 产品包含： 1. 特定基因 4 个位点的 Gene TargetTM siRNA Clone。 2. 阳性对照 1 管（用于平行跟踪转染、RNA 提取等实验过程， 排除假阴性结果。） 3. 阴性对照 1 管 （阴性对照的 siRNA 与目的基因以及靶细胞中其 它基因 mRNA 没有同源性，排除假阳性结果。）
Gene TargetTM siRNA Set 产品目录
Description
Homo sapiens glycerate kinase (GLYCTK) Homo sapiens activin A receptor, type IC (ACVR1C) Homo sapiens hypothetical protein MGC42105 (MGC42105) Homo sapiens inositol hexaphosphate kinase 1 (IHPK1), transcript variant 1 Homo sapiens NIMA (never in mitosis gene a)-related kinase 3 (NEK3) Homo sapiens serine/threonine kinase 33 (STK33) Homo sapiens protein kinase C and casein kinase substrate in neurons 1 (PACSIN1) Homo sapiens calcium/calmodulin-dependent protein kinase (CaM kinase) II gamma (CAMK2G), transcript variant 3 Homo sapiens PDLIM1 interacting kinase 1 like (PDIK1L) Homo sapiens serine/threonine kinase 38 like (STK38L) Homo sapiens adenylate kinase 5 (AK5), transcript variant 1 Homo sapiens SNF1-like kinase (SNF1LK) Homo sapiens Fas-activated serine/threonine kinase (FASTK), transcript variant 4 Homo sapiens microtubule associated serine/threonine kinase-like (MASTL) Homo sapiens, L-fucose kinase, clone MGC:45494 IMAGE:5534376, complete cds Homo sapiens testis-specific serine kinase 1 (TSSK1) Homo sapiens serine/threonine kinase 31 (STK31), transcript variant 1 Homo sapiens SFRS protein kinase 2 (SRPK2), transcript variant 2 Homo sapiens PTEN induced putative kinase 1 (PINK1), nuclear gene encoding mitochondrial protein Homo sapiens NAD kinase (NADK) Homo sapiens aarF domain containing kinase 4 (ADCK4) Homo sapiens NCK adaptor protein 1 (NCK1) Homo sapiens TYRO3 protein tyrosine kinase (TYRO3)
ACCN No.
NM_145262 NM_145259 NM_153361 NM_153273 NM_152720 NM_030906 NM_020804 NM_172170 NM_152835 NM_015000 NM_174858 NM_173354 NM_033015 NM_032844 BC032542 NM_032028 NM_031414 NM_182691 NM_032409 NM_023018 NM_024876 NM_006153 NM_006293
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1.2 RNAi 载体构建技术服务 1.2.1 技术特点：
1）多种 siRNA 表达载体，可以在细胞内直接转录出 siRNA，行使其 RNAi 功能，包括： z U6 启动子表达载体； z H1 启动子表达载体； z U6、H1 双启动子表达载体； z CMV 启动子表达载体；
2）载体带有 GFP 标签可以监测转染效率。构建好的 siRNA 表达载体可直接用于转染细 胞进行 RNAi 实验;
个不同位点的 siRNA 克隆组成，可以降低在基因沉默中产生的脱靶现象，提高沉默效率。四 个克隆可以混合使用，也可以单独使用。产品均经基因测序证实，保证其 100%的同源性。
本产品有如下特点： z 在 U6 和 H1 启动子的起始序列 AAAAA 和终止序列 TTTTT 之间的 siRNA 片段没有多余
百奥迈科（Biomics）RNAi 产品与服务一览
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1. siRNA 生物合成 1.1 全位点 siRNA 表达文库构建服务
本公司拥有自主知识产权的全位点 siRNA 文库构建技术，能够从全长 cDNA 构建包含所 有有效结合位点，长度分布于 19 - 23bp 的靶基因的 siRNA 分子库，亦可以模仿体内 Dicer 酶 切割长度为 21 - 23bp 的分子库，适用于高通量功能基因及相关药物靶点筛选。
目录பைடு நூலகம்
RNAi 及基因沉默原理 百奥迈科（Biomics）RNAi 产品与服务一览 1.siRNA 生物合成
1.1 全位点 siRNA 表达文库构建服务 1.2 RNAi 载体构建技术服务 1.3 Gene TargetTM siRNA Set 2.siRNA 化学合成 2.1 化学合成 siRNA 简介 2.2 siRNA 设计 2.3 百奥迈科(Biomics) siRNA 产品简介 2.4 普通 siRNA oligo 2.5 荧光标记 siRNA oligo 2.6 化学修饰 siRNA oligo 2.7 miRNA 的化学合成 2.8 RNAi 系列优惠套餐 2.9 siRNA 对照 3.RNAi 病毒包装 3.1 腺病毒载体包装 3.2 慢病毒载体包装 3.3 其他类型病毒载体包装 4.哺乳动物细胞 siRNA 转染 4.1 转染方法 4.2 转染步骤 4.3 转染优化及注意事项 5.mRNA 水平检测基因沉默 5.1 mRNA 的提取/制备 5.2. 实时定量荧光 PCR 6 蛋白质水平检测基因沉默 6.1 Western blot 6.2 ELISA 6.3 免疫荧光 7.其他相关服务 7.1 稳定细胞筛选服务 7.2 细胞增殖毒性检测服务 7.3 细胞凋亡检测服务 7.4 DNA 测序 8.RNAi 相关产品 8.1 RISOTM RNA 抽提试剂 8.2 其他
2）合成设计好的 DNA 并退火形成双链 DNA，克隆到客户要求的载体上。 3）通过测序进行验证。 4）构建成功的 siRNA 质粒连同测序报告、产品说明书一起寄送到客户手中。
注：可根据客户要求提供 siRNA 的阳性及阴性对照质粒。 1.2.3 质量保证：
符合设计要求的 siRNA 序列测序结果。
的多克隆位点序列，提高沉默的特异性。 z siRNA 表达框（U6－siRNA－H1）可以整体亚克隆到逆转录病毒载体 (Retrovirus)、腺
病毒载体（Adenovirus）、慢病毒载体（Lentivirus），具有较好的适用性。 z siRNA 没有二级结构(如发夹型结构)，在上述病毒载体中较稳定。 z 构建的质粒载体转染到细胞内，在细胞内转录出双链 RNA，在细胞内具有中长期表达的
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RNAi 及基因沉默原理 RNA 干扰(RNAinterference，RNAi)是由双链 RNA (double-strandedRNA，dsRNA) 引发的
转录后基因静默机制。其原理是：RNaseIII 核酶家族的 Dicer，与双链 RNA 结合，将其剪切 成 21 - 25nt 及 3'端突出的小干扰 RNA (small interfering RNA，siRNA)，随后 siRNA 与 RNA 诱导沉默复合物 (RNA - induced silencing complex，RISC) 结合，解旋成单链，活化的 RISC 受已成单链的 siRNA 引导，序列特异性地结合在靶 mRNA 上并将其切断，引发靶 mRNA 的 特异性分解，从而阻断相应基因表达的转录后基因沉默机制。
1.1.1 构建流程： 1）客户可选： z 提供靶基因的 cDNA 克隆。 z 提供靶基因的相关信息 (基因的 mRNA 序列或 Genbank Accession Number)。 z 也可在本公司的 cDNA 产品目录中，挑选靶基因 cDNA 克隆。 2）进行 siRNA 文库构建，抽样测序验证。 3）根据客户要求提供相应的文库产品。 4）将其连同抽样报告、产品说明书一起寄送到客户手中。 A. HBV Polymerase Domain siRNA 表达文库位点分布（随机抽样测序） Polymerase Domain (984bp):
3）本公司还可根据客户需要提供各种商业化表达载体; 4）本公司可以为客户构建线性 siRNA 表达载体，shRNA 表达载体，miRNA 表达载体以
及病毒型 RNAi 载体。 1.2.2 构建流程：
1）siRNA 靶点设计； z 客户提供靶基因的 siRNA 序列，由本公司将其克隆到 siRNA 表达载体上。 z 客户提供靶基因的相关信息（基因的 mRNA 序列或 Genbank Accession No.），根 据客户要求，本公司设计高效特异性的 3-4 条针对靶基因的 siRNA。
基于载体的 RNAi 实验示意图
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1.2.4 各种商业化表达载体:
产品编号 BV0011 BV0012 BV0013 BV0014 BV0015 BV0016 BV0107 BV0108
载体 pRNAi-U6H1/Neo pRNAi-H1.1/Neo pRNAi-U6.1/Neo pRNAi-CMV3.1/Neo pRNAi-CMV3.2/Neo pRNAi-CMV4.1/Neo pRNAi-U6.1/Lenti pRNAi-H1.1/Retro
B. 构建的 Survivin 基因全位点 siRNA 表达文库，文库抽样基因沉默(qPCR)筛选结果： 该数据显示，本公司 siRNA 文库位点分布的随机性，可以更好地找到最优的靶点。
s1-s8: Randomly selected siRNA sequences from Biomics library s9/s10/s11: The published siRNA sequences target-off: Negative control un-transfect: Untreated normal control
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Cat.No.
Kinase
K07002 K07003 K07004 K07005 K07007 K07008 K07009 K07012 K07016 K07021 K07026 K07027 K07029 K07030 K07033 K07035 K07041 K07046 K07054 K07055 K07056 K07057 K07059
启动子 U6 和 H1 H1 U6 CMV CMV CMV U6 H1
筛选基因 Neomycin Neomycin Neomycin Neomycin Neomycin Neomycin Neomycin Neomycin
标记基因 GFP GFP GFP GFP GFP GFP GFP
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1.3. Gene TargetTM siRNA Set Gene Target™ siRNA Set 是本公司的专利技术开发的基因沉默系列产品之一。产品由 4
特性，能够较长期的发挥基因沉默的作用。 z 由于质粒可以复制扩增，较化学合成方法显著降低制备 siRNA 的成本。 z 载体法的 siRNA 可测序保证 100%序列同源性，而化学合成的 siRNA 分子的序列鉴定较
困难。
表达载体 pU6H1-GFP 图谱 产品性状形态：本产品具有可靠的稳定性，以质粒 DNA 与滤纸小圆片共干燥封装，可在 常温下运输和储存。 Gene TargetTM siRNA Set 产品包含： 1. 特定基因 4 个位点的 Gene TargetTM siRNA Clone。 2. 阳性对照 1 管（用于平行跟踪转染、RNA 提取等实验过程， 排除假阴性结果。） 3. 阴性对照 1 管 （阴性对照的 siRNA 与目的基因以及靶细胞中其 它基因 mRNA 没有同源性，排除假阳性结果。）
Gene TargetTM siRNA Set 产品目录
Description
Homo sapiens glycerate kinase (GLYCTK) Homo sapiens activin A receptor, type IC (ACVR1C) Homo sapiens hypothetical protein MGC42105 (MGC42105) Homo sapiens inositol hexaphosphate kinase 1 (IHPK1), transcript variant 1 Homo sapiens NIMA (never in mitosis gene a)-related kinase 3 (NEK3) Homo sapiens serine/threonine kinase 33 (STK33) Homo sapiens protein kinase C and casein kinase substrate in neurons 1 (PACSIN1) Homo sapiens calcium/calmodulin-dependent protein kinase (CaM kinase) II gamma (CAMK2G), transcript variant 3 Homo sapiens PDLIM1 interacting kinase 1 like (PDIK1L) Homo sapiens serine/threonine kinase 38 like (STK38L) Homo sapiens adenylate kinase 5 (AK5), transcript variant 1 Homo sapiens SNF1-like kinase (SNF1LK) Homo sapiens Fas-activated serine/threonine kinase (FASTK), transcript variant 4 Homo sapiens microtubule associated serine/threonine kinase-like (MASTL) Homo sapiens, L-fucose kinase, clone MGC:45494 IMAGE:5534376, complete cds Homo sapiens testis-specific serine kinase 1 (TSSK1) Homo sapiens serine/threonine kinase 31 (STK31), transcript variant 1 Homo sapiens SFRS protein kinase 2 (SRPK2), transcript variant 2 Homo sapiens PTEN induced putative kinase 1 (PINK1), nuclear gene encoding mitochondrial protein Homo sapiens NAD kinase (NADK) Homo sapiens aarF domain containing kinase 4 (ADCK4) Homo sapiens NCK adaptor protein 1 (NCK1) Homo sapiens TYRO3 protein tyrosine kinase (TYRO3)
ACCN No.
NM_145262 NM_145259 NM_153361 NM_153273 NM_152720 NM_030906 NM_020804 NM_172170 NM_152835 NM_015000 NM_174858 NM_173354 NM_033015 NM_032844 BC032542 NM_032028 NM_031414 NM_182691 NM_032409 NM_023018 NM_024876 NM_006153 NM_006293
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1.2 RNAi 载体构建技术服务 1.2.1 技术特点：
1）多种 siRNA 表达载体，可以在细胞内直接转录出 siRNA，行使其 RNAi 功能，包括： z U6 启动子表达载体； z H1 启动子表达载体； z U6、H1 双启动子表达载体； z CMV 启动子表达载体；
2）载体带有 GFP 标签可以监测转染效率。构建好的 siRNA 表达载体可直接用于转染细 胞进行 RNAi 实验;
个不同位点的 siRNA 克隆组成，可以降低在基因沉默中产生的脱靶现象，提高沉默效率。四 个克隆可以混合使用，也可以单独使用。产品均经基因测序证实，保证其 100%的同源性。
本产品有如下特点： z 在 U6 和 H1 启动子的起始序列 AAAAA 和终止序列 TTTTT 之间的 siRNA 片段没有多余